Močový NGF jako biomarker pro akutní bakteriální cystitidu

Recidivující infekce močových cest je velmi obtěžujícím a oblíbeným problémem v urogynekologické klinické praxi. Podle společné zprávy Mezinárodní urogynekologické asociace (IUGA)/International Continence Society (ICS) o terminologii dysfunkce ženského pánevního dna je recidivující UTI definována jako nejméně tři symptomatická a lékařsky diagnostikovaná UTI v předchozích 12 měsících. Předchozí UTI by měla vymizet dříve, než bude diagnostikována další UTI. Recidivující UTI je jednou z nejčastějších diagnóz dysfunkce ženského pánevního dna.

Pacienti s recidivujícími UTI mohou mít také příznaky podráždění močového měchýře. Předchozí studie odhalily, že pacienti s recidivujícími infekcemi močových cest mají zvýšený NGF v moči, což naznačuje, že po vymizení infekce močových cest je v močovém měchýři u těchto pacientů přítomen chronický zánět. Předběžné výsledky výzkumníků ukázaly, že chronický zánět, apoptóza uroteliálních buněk a poškození bariérové ​​funkce uroteliálních buněk by mohly být základní patofyziologií recidivující UTI u žen. Chronický zánět může po odeznění UTI sídlit ve stěně močového měchýře, což může také způsobit uroteliální dysfunkci a defektní bariérovou funkci a UTI se bude u těchto pacientů snadno opakovat. Tyto důkazy poskytují nové zaměření klinického managementu a budoucího výzkumu rekurentních infekcí močových cest.

Na základě těchto poznatků vědci předpokládali, že chronický zánět může sídlit ve stěně močového měchýře, což může také způsobit uroteliální dysfunkci a defektní bariérovou funkci. U těchto pacientů s reziduálním chronickým zánětem močového měchýře může být snadno recidivující UTI. Pokud mohou vyšetřovatelé určit úplné vymizení chronického zánětu po epizodě akutní cystitidy, je možné inhibovat rekurentní cystitidu léčbou zánětu protizánětlivými činidly.

Nervový růstový faktor (NGF) je malý vylučovaný protein, který indukuje diferenciaci a přežití konkrétních cílových neuronů. NGF byl implikován jako chemický mediátor patologicky indukovaných změn v excitabilitě aferentního nervu C-vlákna a reflexní aktivitě močového měchýře. Hladiny neurotrofických faktorů včetně zvýšení NGF v močovém měchýři po poranění míchy (SCI) a zvýšené hladiny NGF byly detekovány v lumbosakrální míše a dorzálním kořenovém ganglionu potkanů ​​po SCI. Chronické podávání NGF do močového měchýře krys vyvolává hyperaktivitu močového měchýře a zvyšuje frekvenci spouštění disociovaných aferentních neuronů močového měchýře. Zvýšené hladiny NGF v moči byly také detekovány u pacientů s BOO vykazujících příznaky hyperaktivního močového měchýře (OAB). Zvýšený NGF tkáně močového měchýře byl zaznamenán u pacientů s intersticiální cystitidou/syndromem bolestivého močového měchýře (IC/PBS). Nedávný výzkum se zaměřil na hladiny NGF v moči při detekci OAB a IC/PBS u dysfunkce dolních močových cest (LUTD). Důkazy ukázaly, že hladiny proteinů v moči, jako je NGF a prostaglandin E2, se zvyšují u pacientů s OAB, senzorickou naléhavostí a hyperaktivitou detruzoru (DO). Pacienti s OAB-suchým a OAB-mokrým mají významně vyšší hladiny NGF v moči ve srovnání s kontrolní skupinou a pacienty se zvýšenou citlivostí močového měchýře. Hladiny NGF v moči se fyziologicky zvyšují v malém měřítku u normálních subjektů při nutkání na močení, ale zvyšují se patologicky ve velkém měřítku u pacientů s OAB při malém objemu močového měchýře a při pocitu naléhavosti. Hladiny NGF v moči klesají po antimuskarinové terapii a dále klesají po injekcích botulotoxinu do detruzoru u refrakterní OAB. Dohromady se hladiny NGF v moči zdají být potenciálním biomarkerem pro diagnostiku OAB a základního chronického zánětu.

U několika urologických onemocnění, včetně bakteriální cystitidy, kamenů v dolním ureteru a karcinomu z uroteliálních buněk, se mohou rozvinout symptomy střádání napodobující OAB nebo IC/PBS. U těchto poruch jsou také zvýšené hladiny NGF v moči. V předchozí studii výzkumníci zjistili, že UTI může zvýšit produkci NGF v moči spojenou s kameny v močových cestách. Pacienti s ústupem UTI, ale také s perzistujícím OAB mohou mít vysoké hladiny NGF v moči. Tyto výsledky poskytují důkaz, že močový NGF je produktem zánětu v močovém traktu. Proto může být močový NGF považován za produkt druhé linie po uroteliálním poškození nebo změnách uroteliálního prostředí, které iniciují excitaci senzorického nervu a způsobují hypersenzitivitu močového měchýře nebo DO. Měření NGF v moči je neinvazivní nástroj pro hodnocení chronického zánětlivého stavu a pro dlouhodobé srovnání léčby.

Je nezbytné vědět, zda se hladiny NGF v moči mohou také zvýšit při akutní cystitidě a zda produkce souvisí s přidruženými symptomy střádání v různé fázi po léčbě antibiotiky. Tato studie je navržena k měření hladin NGF v moči u pacientů s akutní cystitidou a v různých stadiích po léčbě antibiotiky. Pokud jsou hladiny NGF v moči spojeny se základním zánětem ve stěně močového měchýře, výzkumníci jej mohou použít jako biomarker k určení stavu vyřešení zánětu a poskytnout lékařům, aby rozhodli, jak dlouho by měli vyšetřovatelé léčit pacienty s akutní cystitidou.

Materiály a metody

Do této studie bude zařazeno 30 pacientek s první UTI a 30 pacientek s recidivujícími UTI (alespoň dvě předchozí epizody UTI za posledních 12 měsíců), které mají nedávnou akutní epizodu. Deset žen stejného věku (30 až 50 let) bez předchozí anamnézy infekce močových cest nebo patologie močových cest bude pozváno, aby sloužily jako kontroly. Vzorky moči budou pacientům odebírány na začátku, 7 dní po léčbě antibiotiky a 2 týdny, 4 týdny, 8 týdnů a 12 týdnů po epizodě UTI. Analýza moči bude provedena při každé návštěvě a kultivace moči bude provedena na začátku a při návštěvách po 2 týdnech a 3 měsících. Vzorky moči na začátku a po 3 měsících budou odebrány z kontrol pro srovnání.

U všech pacientů by mělo být prokázáno, že mají UTI detekcí pyurie při analýze moči (WBC>10 na vysoce výkonné pole) a měli mít pozitivní výsledek kultivace moči. Kromě toho bude proveden snímek ledvin, močovodu a močového měchýře (KUB) a sonografie ledvin, aby se vyloučila možnost urolitiázy nebo jiné patologie močových cest. Jednodenní mikční deník bude požádán o záznam při každé návštěvě, aby se určila funkční kapacita močového měchýře (FBC) a frekvence epizod za den. Symptomy močového měchýře budou zaznamenávány pomocí skóre hyperaktivního močového měchýře (OABSS) a vizuální analogové stupnice bolesti (VAS). Kromě toho bude při návštěvě 2 změřena uroflowmetrie, včetně maximální průtokové rychlosti (Qmax), vyprázdněného objemu a postvoidního reziduálního objemu (PVR). NGF měření. Antibiotika (Cephalexin 500 mg Q6H) po dobu 1 až 2 týdnů budou zahájena na začátku léčby, dokud se analýza moči neprokáže jako negativní a kultivace moči nebude negativní. Poté bude náhodně předepsáno antimikrobiální činidlo (Baktar 800 mg h.s.) nebo protizánětlivé činidlo (Celecoxib 200 mg QD) pro profylaxi UTI po dobu 3 měsíců po úplném vymizení akutní cystitidy. Všichni pacienti budou sledováni po dobu až jednoho roku, aby se sledovalo, zda se u nich nevyskytuje recidivující UTI.

Všechny vzorky moči budou odebírány s plným močovým měchýřem a přirozeným vyprazdňováním. Měření hladin NGF v moči bude provedeno metodou ELISA. Vzorky moči se neředí. Vyprázdněná moč se ihned umístí na led a centrifuguje při 3000 g po dobu 10 minut při 4 °C. Supernatant se rozdělí na alikvoty v 1,5 ml zkumavkách a uchovává se v mrazáku -80 °C. Současně se odebírají 3 ml moči k měření hladiny kreatininu v moči. Koncentrace NGF v moči se stanovuje pomocí systému Emax ImmunoAssay System (Promega, Madison, Wisconsin, USA) se specifickou a vysoce citlivou soupravou ELISA, která má minimální citlivost 7,8 pg/ml. Množství NGF ve vzorcích moči spadá pod detekční limity NGF testu bylo extrahováno ze standardní křivky NGF. Všechny vzorky budou testovány v triplikátech, hladiny NGF v moči bez konzistentní hodnoty ve třech měřeních budou opakovány a hodnoty budou zprůměrovány. Celkové hladiny NGF v moči jsou dále normalizovány koncentrací kreatininu v moči (hladina NGF/Cr). Hladiny NGF/Cr se porovnávají mezi všemi podskupinami.

Statistické analýzy budou provedeny párovým t-testem pro párová data v po sobě jdoucích časových bodech. Mann-Whitney test bude použit pro neparametrickou analýzu mezi různými podskupinami. P-hodnota menší než 0,05 se považuje za významnou.

očekávané výsledky

Výzkumníci předpokládali, že pacienti s recidivující UTI mohou mít trvale zvýšené hladiny NGF v moči ve srovnání s pacienty s poprvé UTI. Hladiny NGF v moči zůstanou zvýšené u pacientů, kteří mají přetrvávající příznaky OAB po epizodě akutní cystitidy a mohou být trvale vyšší než u kontrol po 3 měsících. Pacienti léčení protizánětlivým činidlem mohou mít nižší hladiny NGF v moči při 3měsíční návštěvě ve srovnání s těmi, kteří užívali antimikrobiální látky. Výskyt recidivující UTI v následujícím roce může být vyšší u pacientů léčených antimikrobiálními látkami než u pacientů léčených protizánětlivými látkami.