NGF urinario come biomarcatore per la cistite batterica acuta

Le infezioni del tratto urinario ricorrenti sono un problema molto fastidioso e diffuso nella pratica clinica uroginecologica. Secondo il rapporto congiunto della International Urogynecological Association (IUGA)/International Continence Society (ICS) sulla terminologia per la disfunzione del pavimento pelvico femminile, le IVU ricorrenti sono definite come almeno tre IVU sintomatiche e diagnosticate dal punto di vista medico nei 12 mesi precedenti. Le precedenti UTI dovrebbero essersi risolte prima che venga diagnosticata un'ulteriore UTI. L'infezione del tratto urinario ricorrente è una delle diagnosi più comuni per la disfunzione del pavimento pelvico femminile.

I pazienti con IVU ricorrenti possono anche avere sintomi irritativi della vescica. Precedenti studi hanno rivelato che i pazienti con UTI ricorrenti hanno NGF urinario elevato, suggerendo che l'infiammazione cronica è presente nella vescica di questi pazienti dopo la risoluzione dell'UTI. I risultati preliminari dei ricercatori hanno mostrato che l'infiammazione cronica, l'apoptosi delle cellule uroteliali e la compromissione della funzione di barriera delle cellule uroteliali potrebbero essere la patofisiologia alla base delle IVU ricorrenti nelle donne. L'infiammazione cronica potrebbe risiedere nella parete della vescica dopo la risoluzione dell'UTI, che potrebbe anche causare disfunzione uroteliale e funzione di barriera difettosa e l'UTI sarà facile da ripresentarsi in questi pazienti. Questa evidenza fornisce un nuovo focus per la gestione clinica e la ricerca futura delle infezioni ricorrenti del tratto urinario.

Sulla base di queste conoscenze, i ricercatori hanno ipotizzato che l'infiammazione cronica potrebbe risiedere nella parete della vescica, che potrebbe anche causare disfunzione uroteliale e funzione di barriera difettosa. L'infezione del tratto urinario potrebbe facilmente ripresentarsi in questi pazienti con un'infiammazione vescicale cronica residua. Se gli investigatori possono determinare la completa risoluzione dell'infiammazione cronica dopo l'episodio di cistite acuta, è possibile inibire la cistite ricorrente trattando l'infiammazione con agenti antinfiammatori.

Il fattore di crescita nervoso (NGF) è una piccola proteina secreta che induce la differenziazione e la sopravvivenza di particolari neuroni bersaglio. L'NGF è stato implicato come mediatore chimico dei cambiamenti indotti dalla patologia nell'eccitabilità del nervo afferente della fibra C e nell'attività della vescica riflessa. I livelli di fattori neurotrofici compreso l'aumento di NGF nella vescica dopo la lesione del midollo spinale (SCI) e l'aumento dei livelli di NGF sono stati rilevati nel midollo spinale lombosacrale e nel ganglio della radice dorsale dei ratti dopo la SCI. La somministrazione cronica di NGF nella vescica dei ratti induce l'iperattività della vescica e aumenta la frequenza di attivazione dei neuroni afferenti della vescica dissociati. Livelli aumentati di NGF urinario sono stati rilevati anche in pazienti BOO che presentano sintomi di vescica iperattiva (OAB). Nei pazienti con cistite interstiziale/sindrome della vescica dolorosa (IC/PBS) è stato osservato un aumento del tessuto vescicale NGF. Recenti ricerche si sono concentrate sui livelli di NGF urinario nel rilevare OAB e IC/PBS nella disfunzione del tratto urinario inferiore (LUTD). Le prove hanno dimostrato che le proteine ​​urinarie come NGF e i livelli di prostaglandina E2 aumentano nei pazienti con OAB, urgenza sensoriale e iperattività detrusoriale (DO). I pazienti con OAB-dry e OAB-wet hanno livelli di NGF urinario significativamente più alti rispetto al gruppo di controllo e ai pazienti con aumentata sensibilità alla vescica. I livelli urinari di NGF aumentano fisiologicamente su piccola scala nei soggetti normali con urgenza minzionale, ma aumentano patologicamente su larga scala nei pazienti con volume vescicale ridotto e con sensazione di urgenza. I livelli urinari di NGF diminuiscono dopo terapia antimuscarinica e diminuiscono ulteriormente dopo iniezioni di tossina botulinica detrusoriale in OAB refrattaria. Messi insieme, i livelli urinari di NGF sembrano essere un potenziale biomarcatore per la diagnosi di OAB e l'infiammazione cronica sottostante.

Diverse malattie urologiche tra cui la cistite batterica, i calcoli dell'uretere inferiore e il carcinoma a cellule uroteliali possono sviluppare sintomi di accumulo che imitano l'OAB o l'IC/PBS. Anche i livelli urinari di NGF sono elevati in questi disturbi. Nello studio precedente i ricercatori hanno scoperto che l'UTI può aumentare la produzione di NGF nelle urine associata a calcoli del tratto urinario. I pazienti con risoluzione delle infezioni del tratto urinario ma anche con OAB persistente possono avere livelli elevati di NGF urinario. Questi risultati forniscono la prova che l'NGF urinario è un prodotto dell'infiammazione delle vie urinarie. Pertanto, l'NGF urinario può essere considerato un prodotto di seconda linea a seguito di danni uroteliali o cambiamenti dell'ambiente uroteliale che avviano l'eccitazione del nervo sensoriale e causano ipersensibilità della vescica o DO. La misurazione dell'NGF urinario è uno strumento non invasivo per valutare lo stato infiammatorio cronico e per il confronto longitudinale del trattamento.

È essenziale sapere se i livelli di NGF urinario possono aumentare anche in caso di episodio di cistite acuta e se la produzione ha una relazione con i sintomi di accumulo associati in diversi stadi dopo il trattamento antibiotico. Questo studio è progettato per misurare i livelli urinari di NGF in pazienti con cistite acuta e diversi stadi dopo il trattamento antibiotico. Se i livelli di NGF urinario sono associati all'infiammazione sottostante nella parete della vescica, i ricercatori potrebbero usarlo come biomarcatore per determinare lo stato di risoluzione dell'infiammazione e fornire ai medici la possibilità di decidere per quanto tempo i ricercatori devono trattare i pazienti con cistite acuta.

Materiali e metodi

Questo studio arruolerà 30 pazienti di sesso femminile con la prima volta UTI e 30 pazienti di sesso femminile con UTI ricorrente (almeno due precedenti episodi di UTI negli ultimi 12 mesi) ma hanno un episodio acuto recente. Dieci donne della stessa età (dai 30 ai 50 anni) senza precedenti di IVU o patologie del tratto urinario saranno invitate a fungere da controlli. I campioni di urina verranno raccolti nei pazienti al basale, 7 giorni dopo il trattamento antibiotico e 2 settimane, 4 settimane, 8 settimane e 12 settimane dopo l'episodio di UTI. L'analisi delle urine verrà eseguita ad ogni visita e l'urinocoltura verrà eseguita al basale e alle visite di 2 settimane e 3 mesi. I campioni di urina al basale ea 3 mesi saranno raccolti dai controlli per il confronto.

Tutti i pazienti devono dimostrare di avere UTI rilevando piuria nell'analisi delle urine (WBC> 10 per campo ad alta potenza) e avere un risultato positivo dell'urinocoltura. Inoltre, verranno eseguiti un film del rene, dell'uretere e della vescica (KUB) e l'ecografia renale per escludere la possibilità di urolitiasi o altra patologia del tratto urinario. Ad ogni visita verrà richiesto di registrare il diario minzionale di un giorno per determinare la capacità funzionale della vescica (FBC) e la frequenza degli episodi al giorno. I sintomi della vescica saranno registrati da Overactive Bladder Symptom Score (OABSS) e scala analogica visiva del dolore (VAS). Inoltre, alla visita 2 verranno misurati anche l'uroflussometria, inclusa la portata massima (Qmax), il volume svuotato e il volume residuo postminzionale (PVR). I campioni di urina al basale e ogni visita dopo il trattamento saranno raccolti a una vescica comodamente piena e inviati per Misurazioni dell'NGF. Gli antibiotici (Cephalexin 500mg Q6H) per 1 o 2 settimane verranno avviati al basale fino a quando l'analisi delle urine si è dimostrata negativa e l'urinocoltura non è risultata negativa. Quindi l'agente antimicrobico (Baktar 800mg h.s.) o l'agente antinfiammatorio (Celecoxib 200mg QD) verrà prescritto in modo casuale per la profilassi delle UTI per 3 mesi dopo la completa risoluzione della cistite acuta. Tutti i pazienti saranno seguiti fino a un anno per monitorare se hanno insorgenza di UTI ricorrenti.

Tutti i campioni di urina saranno raccolti con una vescica piena e uno svuotamento naturale. La misurazione dei livelli di NGF urinario sarà eseguita con il metodo ELISA. I campioni di urina non sono diluiti. L'urina espulsa viene messa immediatamente in ghiaccio e centrifugata a 3000 g per 10 min a 4 ◦C. Il surnatante viene separato in aliquote in provette da 1,5 mL e conservato in un congelatore a -80 °C. Allo stesso tempo, vengono prelevati 3 ml di urina per misurare i livelli di creatinina urinaria. La concentrazione di NGF urinario viene determinata utilizzando l'Emax ImmunoAssay System (Promega, Madison, Wisconsin, USA) con un kit ELISA specifico e altamente sensibile, che ha una sensibilità minima di 7,8 pg/mL. La quantità di NGF nei campioni di urina scende al di sotto dei limiti di rilevazione del dosaggio NGF è stata estratta da una curva standard NGF. Tutti i campioni verranno analizzati in triplicato, verranno ripetuti i livelli di NGF urinario senza un valore consistente in tre misure e verrà calcolata la media dei valori. I livelli totali di NGF urinario sono ulteriormente normalizzati dalla concentrazione di creatinina urinaria (livello NGF/Cr). I livelli di NGF/Cr vengono confrontati tra tutti i sottogruppi.

Le analisi statistiche saranno eseguite mediante un paired t-test per dati appaiati in punti temporali consecutivi. Il test di Mann-Whitney sarà utilizzato per l'analisi non parametrica tra diversi sottogruppi. Un valore P inferiore a 0,05 è considerato significativo.

risultati aspettati

I ricercatori hanno ipotizzato che i pazienti con UTI ricorrenti possano avere livelli di NGF urinari persistentemente elevati rispetto a quelli con UTI per la prima volta. I livelli di NGF urinario rimarranno elevati nei pazienti che presentano sintomi persistenti di OAB dopo un episodio di cistite acuta e potrebbero essere persistentemente più alti rispetto ai controlli dopo 3 mesi. I pazienti trattati con agenti antinfiammatori potrebbero avere livelli di NGF urinario più bassi alla visita di 3 mesi rispetto a quelli che assumono antimicrobici. L'incidenza di UTI ricorrenti nell'anno successivo potrebbe essere maggiore nei pazienti trattati con antimicrobici rispetto a quelli trattati con agenti antinfiammatori.