NGF urinário como um biomarcador para cistite bacteriana aguda

A ITU recorrente é um problema muito incômodo e popular na prática clínica da uroginecologia. De acordo com o relatório conjunto da International Urogynecological Association (IUGA)/International Continence Society (ICS) sobre a terminologia para disfunção do assoalho pélvico feminino, ITU recorrente é definida como pelo menos três ITU sintomáticas e clinicamente diagnosticadas nos últimos 12 meses. A(s) ITU(s) anterior(es) deve(m) ter sido resolvida(s) antes do diagnóstico de outra ITU. A ITU recorrente é um dos diagnósticos mais comuns de disfunção do assoalho pélvico feminino.

Pacientes com ITU recorrente também podem apresentar sintomas irritativos da bexiga. Estudos anteriores revelaram que pacientes com ITU recorrente têm NGF urinário elevado, sugerindo que há inflamação crônica na bexiga desses pacientes após a resolução da ITU. Os resultados preliminares dos investigadores mostraram que a inflamação crônica, a apoptose das células uroteliais e o comprometimento da função de barreira das células uroteliais podem ser a fisiopatologia subjacente da ITU recorrente em mulheres. A inflamação crônica pode residir na parede da bexiga após a resolução da ITU, o que também pode causar disfunção urotelial e função de barreira defeituosa e a ITU será fácil de recorrer nesses pacientes. Esta evidência fornece um novo foco para o manejo clínico e pesquisas futuras de infecção recorrente do trato urinário.

Com base nesse conhecimento, os pesquisadores levantaram a hipótese de que a inflamação crônica pode residir na parede da bexiga, o que também pode causar disfunção urotelial e função defeituosa da barreira. A ITU pode ser fácil de recorrer nesses pacientes com inflamação crônica residual da bexiga. Se os investigadores puderem determinar a resolução completa da inflamação crônica após o episódio de cistite aguda, é possível inibir a cistite recorrente através do tratamento da inflamação com agentes anti-inflamatórios.

O fator de crescimento nervoso (NGF) é uma pequena proteína secretada que induz a diferenciação e a sobrevivência de determinados neurônios-alvo. O NGF tem sido implicado como um mediador químico de alterações induzidas por patologia na excitabilidade do nervo aferente de fibra C e na atividade reflexa da bexiga. Os níveis de fatores neurotróficos, incluindo aumento de NGF na bexiga após lesão da medula espinhal (SCI) e níveis aumentados de NGF, foram detectados na medula espinhal lombossacral e gânglio da raiz dorsal de ratos após SCI. A administração crônica de NGF na bexiga de ratos induz hiperatividade da bexiga e aumenta a frequência de disparo de neurônios aferentes da bexiga dissociados. Níveis aumentados de NGF urinário também foram detectados em pacientes com BOO exibindo sintomas de bexiga hiperativa (OAB). Aumento do tecido da bexiga NGF foi observado em pacientes com cistite intersticial/síndrome da bexiga dolorosa (IC/PBS). Pesquisas recentes focaram nos níveis urinários de NGF na detecção de OAB e IC/PBS na disfunção do trato urinário inferior (LUTD). Evidências têm demonstrado que os níveis de proteínas urinárias, como NGF e prostaglandina E2, aumentam em pacientes com BH, urgência sensorial e hiperatividade (HD) do detrusor. Pacientes com OAB-seco e OAB-úmido têm níveis urinários de NGF significativamente mais altos em comparação com o grupo controle e pacientes com aumento da sensação de bexiga. Os níveis urinários de NGF aumentam fisiologicamente em pequena escala em indivíduos normais no desejo de urinar, mas aumentam patologicamente em grande escala em pacientes com bexiga hiperativa com pequeno volume da bexiga e sensação de urgência. Os níveis urinários de NGF diminuem após terapia antimuscarínica e diminuem ainda mais após injeções de toxina botulínica detrusora em OAB refratário. Juntos, os níveis urinários de NGF parecem ser um biomarcador potencial para o diagnóstico de OAB e da inflamação crônica subjacente.

Várias doenças urológicas, incluindo cistite bacteriana, cálculo ureteral inferior e carcinoma de células uroteliais, podem desenvolver sintomas de armazenamento que simulam OAB ou IC/PBS. Os níveis urinários de NGF também são elevados nesses distúrbios. No estudo anterior, os investigadores descobriram que a ITU pode aumentar a produção de NGF na urina associada a cálculos do trato urinário. Pacientes com resolução da ITU, mas também com bexiga hiperativa persistente, podem apresentar altos níveis de NGF urinário. Esses resultados fornecem evidências de que o NGF urinário é um produto da inflamação no trato urinário. Portanto, o NGF urinário pode ser considerado como um produto de segunda linha após dano urotelial ou alterações do ambiente urotelial que iniciam a excitação do nervo sensorial e causam hipersensibilidade da bexiga ou DO. A medição do NGF urinário é uma ferramenta não invasiva para avaliar o estado inflamatório crônico e para comparação longitudinal do tratamento.

É essencial saber se os níveis urinários de NGF também podem aumentar no episódio de cistite aguda e se a produção tem relação com os sintomas de armazenamento associados em diferentes estágios após o tratamento com antibióticos. Este estudo é projetado para medir os níveis urinários de NGF em pacientes com cistite aguda e diferentes estágios após o tratamento com antibióticos. Se os níveis urinários de NGF tiverem associação com a inflamação subjacente na parede da bexiga, os investigadores podem usá-lo como um biomarcador para determinar o estado de resolução da inflamação e fornecer aos médicos a decisão de por quanto tempo os investigadores devem tratar pacientes com cistite aguda.

Materiais e métodos

Este estudo incluirá 30 pacientes do sexo feminino com ITU pela primeira vez e 30 pacientes do sexo feminino com ITU recorrente (pelo menos dois episódios anteriores de ITU nos últimos 12 meses), mas com um episódio agudo recente. Dez mulheres da mesma idade (30 a 50 anos) sem história prévia de ITU ou patologia do trato urinário serão convidadas para servir como controles. Amostras de urina serão coletadas dos pacientes no início do estudo, 7 dias após o tratamento com antibióticos e 2 semanas, 4 semanas, 8 semanas e 12 semanas após o episódio de ITU. O exame de urina será realizado em cada visita e a urocultura será realizada na linha de base e nas visitas de 2 semanas e 3 meses. Amostras de urina no início e 3 meses serão coletadas dos controles para comparação.

Deve-se comprovar que todos os pacientes têm ITU pela detecção de piúria no exame de urina (WBC>10 por campo de alta potência) e tiveram um resultado positivo da urocultura. Além disso, um filme de rim, ureter e bexiga (KUB) e ultrassonografia renal serão realizados para excluir a possibilidade de urolitíase ou outra patologia do trato urinário. O diário miccional de um dia será solicitado a ser registrado em cada visita para determinar a capacidade funcional da bexiga (FBC) e os episódios de frequência por dia. Os sintomas da bexiga serão registrados por pontuação de sintoma de bexiga hiperativa (OABSS) e escala visual analógica de dor (VAS). Além disso, urofluxometria, incluindo taxa de fluxo máximo (Qmax), volume miccional e volume residual pós-miccional (PVR) também serão medidos na visita 2. Amostras de urina na linha de base e em cada visita após o tratamento serão coletadas em uma bexiga confortavelmente cheia e enviadas para Medições de NGF. Antibióticos (Cefalexina 500 mg Q6H) por 1 a 2 semanas serão iniciados na linha de base até que o exame de urina seja negativo e a urocultura se torne negativa. Em seguida, agente antimicrobiano (Baktar 800mg h.s.) ou agente anti-inflamatório (Celecoxib 200mg QD) será prescrito aleatoriamente para profilaxia de ITU por 3 meses após a resolução completa da cistite aguda. Todos os pacientes serão acompanhados por até um ano para monitorar a ocorrência de ITU recorrente.

Todas as amostras de urina serão coletadas com a bexiga cheia e micção natural. A dosagem dos níveis urinários de NGF será realizada pelo método ELISA. As amostras de urina não são diluídas. A urina eliminada é imediatamente colocada no gelo e centrifugada a 3.000 g por 10 minutos a 4 ◦C. O sobrenadante é separado em alíquotas em tubos de 1,5 mL e conservado em freezer a -80 ◦C. Ao mesmo tempo, 3 mL de urina são coletados para medir os níveis de creatinina urinária. A concentração urinária de NGF é determinada utilizando o Emax ImmunoAssay System (Promega, Madison, Wisconsin, EUA) com um kit ELISA específico e altamente sensível, que apresenta uma sensibilidade mínima de 7,8 pg/mL. A quantidade de NGF em amostras de urina abaixo dos limites de detecção do ensaio de NGF foi extraída de uma curva padrão de NGF. Todas as amostras serão processadas em triplicata, os níveis urinários de NGF sem um valor consistente em três medições serão repetidos e os valores serão calculados. Os níveis urinários totais de NGF são ainda normalizados pela concentração de creatinina urinária (nível de NGF/Cr). Os níveis de NGF/Cr são comparados entre todos os subgrupos.

As análises estatísticas serão realizadas por um teste t pareado para dados pareados em pontos de tempo consecutivos. O teste de Mann-Whitney será utilizado para análise não paramétrica entre os diferentes subgrupos. Um valor P inferior a 0,05 é considerado significativo.

resultados esperados

Os investigadores levantaram a hipótese de que os pacientes com ITU recorrente podem ter níveis de NGF urinário persistentemente elevados em comparação com aqueles com ITU pela primeira vez. Os níveis urinários de NGF permanecerão elevados em pacientes com sintomas persistentes de bexiga hiperativa após um episódio de cistite aguda e podem ser persistentemente mais altos do que os controles após 3 meses. Os pacientes tratados com agentes anti-inflamatórios podem ter níveis urinários de NGF mais baixos na visita de 3 meses em comparação com aqueles que tomam antimicrobianos. A incidência de ITU recorrente no ano seguinte pode ser maior nos pacientes tratados com antimicrobianos do que naqueles tratados com agentes anti-inflamatórios.