进餐频率对 2 型糖尿病患者胰岛素抵抗的影响 (Frequency)

项目的目标和优先事项 本研究的目的是

1. 测试进餐频率（每日六餐与两餐，每日热量限制相同，为 -500 kcal/天）对胰岛素敏感性、胰岛素分泌和肝脏脂肪含量的影响。
2. 描述不同进餐频率的一些作用机制（内脏脂肪量、肝脏脂肪含量、脂肪因子的血清浓度、肠道激素、氧化应激标志物）。
3. 与那些在研究期间提供所有膳食的参与者相比，测试参与者在受过教育并独自准备膳食时在两种方案中保持低热量饮食的能力。

这将是一项随机交叉研究，其中 50 名 2 型糖尿病患者将随机改变两种方案：六餐和一天两餐。 每个测试周期需要三个月。

葡萄糖和脂质代谢及其调节将在开始时和每 3 个月后进行彻底测试（膳食测试、高胰岛素等血糖钳夹、间接量热法、肝脏 MRI 扫描、DXA 扫描、选定脂肪因子的血清浓度测定、肠道激素和氧化应激标记物）。

假设 研究人员假设低血浆胰岛素水平（通过禁食期达到）会降低胰岛素抵抗和肝脏脂质含量。 相反，频繁进餐（以及随之而来的更高血浆胰岛素水平）会导致非酒精性脂肪肝和胰岛素抵抗。 研究人员进一步假设，与那些提供所有膳食的人相比，参与者在留下来准备饭菜时会随着进餐频率的增加（尽管接受了全面的教育）而增加卡路里摄入量。

关键词 胰岛素抵抗、进餐频率、2 型糖尿病、非酒精性脂肪肝、脂肪因子、肠道激素、氧化应激 方法学 研究设计：研究人员将使用随机交叉研究的设计，其中 50 名 2 型糖尿病患者会以随机顺序改变他们进餐的频率：一日六餐和两餐。 热量限制将相同（-500 kcal/天）。 每个测试周期需要三个月。 将为一半的参与者提供研究期间的所有膳食。 另一半将接受彻底的教育，了解如何在两种方案中保持每日热量摄入，他们将独自准备饭菜。

研究组：50 名 2 型糖尿病患者，仅接受饮食或口服降糖药治疗，糖尿病病程至少 1 年，男性和女性，年龄 30-65 岁，BMI 27-50 kg/m²。 向受试者解释研究的目的、方法和风险，并签署知情同意书（附录 1）。

养生法：在每天六餐的养生法中，参与者将被要求将他们的总热量摄入分为六餐，每两到三个小时进食一次。 在每天两餐的方案中，他们会将总热量摄入分为两顿：第一顿在早上 6 点到 10 点之间吃，第二顿在中午到下午 4 点之间吃。

身体活动：参与者将被要求在研究期间不要改变他们的运动习惯。 将使用计步器和标准化问卷监测身体活动：国际身体活动问卷 (IPAQ) 和 Baecke 问卷。

手续：

在开始时（第 0 周）和每 3 个月结束时（第 12 周和 24 周），将对每个受试者执行以下程序和测量（每个受试者三次）：

1. 常见的人体测量调查（体重、BMI、腰围和臀围），将采集血液样本进行实验室评估（常见的实验室测试、葡萄糖和脂质代谢参数、选择的脂肪因子、氧化应激标记物、肠道激素、血清中的脂肪酸组成磷脂等——见分析方法）。
2. 标准早餐后用于葡萄糖耐量评估的膳食测试/面包鳄鱼奶酪美食 - 180 克，能量 452.8 Kcal/1895.7 kJ，成分：碳水化合物 49.2 克（44.55%），蛋白质 18.5 克（16， 74%)，脂质 18.8 g (38.7%)，其中饱和 6.8 g，单不饱和 6.0 g，多不饱和 5.0 g/。 将在早餐后 0、30、60、120 和 180 分钟采集用于评估血糖、C 肽、免疫反应性胰岛素 (IRI) 的血样。
3. 高胰岛素 (1 mU/kg/min) 等血糖钳 (HIC) 3 小时，使用间接量热法。 这种方法可以精确量化胰岛素抵抗和能量底物的利用。
4. 对肝脏进行 MRI（磁共振成像）扫描以测量肝脏脂肪含量。
5. DXA（双能 X 射线吸收测定法）扫描以测量全身成分和脂肪含量。
6. 在每个方案结束时在医院停留一天期间，将测量胰岛素分泌和葡萄糖控制。 全天将每三个小时采集一次血样。 全天收集尿液以测量微量白蛋白尿和 C 肽废物。

分析方法：

所选脂肪因子（抵抗素、总脂联素、HMW-脂联素、TNFalfa 和瘦素）和其他细胞因子和蛋白质 (FABP) 的血浆浓度将使用标准试剂盒（ELISA，Linco，USA）以酶促方式测量。 肠激素的血浆水平将使用标准试剂盒（Milliplex，Millipore，USA）以酶促方式测量。 脂质过氧化的参数将根据通过与硫代巴比妥酸反应的 TBARS 的水平和根据共轭二烯的水平来确定。

还原和氧化型谷胱甘肽的水平将使用具有荧光检测的 HPLC 方法来确定。 抗坏血酸可用二硝基苯肼分光光度反应测定。 根据 Catignani 和 Biery 的改进方法，通过反相高效液相色谱法 (HPLC) 和荧光检测法测定血清中 α- 和 g- 生育酚的浓度。 SOD的活性将通过阻断硝基四氮唑蓝还原和硝基磷烷生成的反应来分析。 过氧化氢酶活性测量基于 H2O2 与钼酸铵产生颜色复合物的能力，该颜色复合物通过分光光度法检测。 谷胱甘肽过氧化物酶的活性将通过Ellman试剂对谷胱甘肽的氧化速度进行监测。 将使用葡萄糖氧化酶方法 Beckman 分析仪（Beckman Instruments Inc., Fullerton, CA, USA）分析血清葡萄糖，使用 IMMUNOTECH Insulin IRMA 试剂盒（IMMUNOTECH as, Prague, Czech Republic）通过放射免疫测定法测定 IRI，C-使用 IMMUNOTECH C-肽 IRMA 试剂盒（IMMUNOTECH as，布拉格，捷克共和国）和糖化血红蛋白的肽将通过 Bio-Rad 血红蛋白 A1c 柱测试（Bio-Rad Laboratories GmbH，慕尼黑，德国）测量。

在根据 Folch 提取脂质并通过薄层色谱法分离脂质级分后，将测量血清磷脂中的脂肪酸模式。 脂肪酸的甲酯将通过气相色谱分离。

由于选择的基因多态性，将评估不同膳食频率方案的最终效果。

统计分析：将使用方差分析检验、配对和非配对 t 检验以及使用标准统计程序的其他统计方法来完成。 通过统计软件 PASS 2005（Number Cruncher Statistical Systems，Kaysville，UT，USA）使用重复测量的功效分析来估计要招募的受试者数量。 该模型中包含的因素是个体间因素（对照组与实验组）、个体内因素（研究中的个体时间体育场）和因素之间的相互作用（对照组和实验组时间曲线之间的差异程度）。

时间范围：2010 年 12 月至 2011 年 2 月招募参与者 2011 年 3 月开始研究 A 组：12 周每天 6 餐，然后额外 12 周每天 2 餐 B 组：12 周每天 2 餐，然后额外 12 餐每周 6 餐/天 2011 年 9 月 研究结束

所有测量都将在开始时、第 12 周和第 24 周进行。