Efeito da frequência das refeições na resistência à insulina em indivíduos com diabetes tipo 2 (Frequency)

Objetivos e prioridades do projeto O objetivo deste estudo é

1. testar o efeito da frequência das refeições (seis versus duas refeições diárias com a mesma restrição calórica diária de -500 kcal/dia) na sensibilidade à insulina, secreção de insulina e conteúdo de gordura hepática.
2. caracterizar alguns dos mecanismos de ação de diferentes frequências de refeições (quantidade de gordura visceral, teor de gordura hepática, concentrações séricas de adipocinas, hormônios intestinais, marcadores de estresse oxidativo).
3. testar a capacidade dos participantes de manter uma dieta hipocalórica em ambos os regimes quando educados e deixados para preparar suas refeições sozinhos em comparação com aqueles para quem serão fornecidas todas as refeições durante o estudo.

Será um estudo randomizado, cruzado, onde 50 indivíduos com diabetes tipo 2 mudarão em ordem aleatória dois regimes: seis e duas refeições ao dia. Cada período de teste levará três meses.

O metabolismo da glicose e lipídios e sua regulação serão exaustivamente testados no início e após cada período de 3 meses (teste de refeição, clamp isoglicêmico hiperinsulinêmico, calorimetria indireta, ressonância magnética do fígado, DXA, determinação da concentração sérica de adipocinas selecionadas, hormônios e marcadores de estresse oxidativo).

Hipótese Os investigadores levantam a hipótese de que níveis baixos de insulina plasmática (conforme alcançados por períodos de jejum) reduzirão a resistência à insulina e o conteúdo lipídico hepático. Em contraste, refeições frequentes (e consequentes níveis plasmáticos mais altos de insulina) irão predispor à doença hepática gordurosa não alcoólica e resistência à insulina. Os investigadores levantaram a hipótese de que os participantes aumentariam sua ingestão calórica com o aumento da frequência das refeições (apesar da educação completa) quando deixados para preparar suas refeições em comparação com aqueles para quem todas as refeições serão fornecidas.

Palavras-chave Resistência à insulina, frequência das refeições, diabetes mellitus tipo 2, doença hepática gordurosa não alcoólica, adipocinas, hormônios intestinais, estresse oxidativo Metodologia Desenho do estudo: os investigadores usarão o desenho de um estudo cruzado randomizado, onde 50 indivíduos com tipo 2 diabetes vai mudar em ordem aleatória a frequência de suas refeições: seis e duas refeições por dia. A restrição calórica será a mesma (-500 kcal/dia). Cada período de teste levará três meses. Para metade dos participantes, todas as refeições durante o estudo serão fornecidas. A outra metade será totalmente educada sobre como manter sua ingestão calórica diária durante os dois regimes e preparará suas refeições sozinhas.

Grupo de estudo: 50 indivíduos com diabetes tipo 2 tratados apenas com dieta ou hipoglicemiantes orais, diabetes com duração de pelo menos 1 ano, homens e mulheres, idade 30-65 anos, IMC 27-50 kg/m². Serão explicados aos sujeitos os objetivos, métodos e riscos do estudo e eles assinarão o consentimento informado (Anexo 1).

Regimes: No regime de seis refeições por dia, os participantes serão solicitados a dividir sua ingestão calórica total em seis refeições e comer a cada duas ou três horas. No regime de duas refeições por dia, eles dividirão sua ingestão calórica total em duas refeições: a primeira refeição será feita entre 6h e 10h, a segunda entre meio-dia e 16h.

Atividade física: Os participantes serão solicitados a não mudar seus hábitos de exercício durante o estudo. A atividade física será monitorada por meio de pedômetros e questionários padronizados: Questionário Internacional de Atividade Física (IPAQ) e questionário de Baecke.

Procedimentos:

No início (semana 0) e no final de cada 3 meses (semana 12 e 24), os seguintes procedimentos e medições serão realizados em cada sujeito (três vezes em cada sujeito):

1. Investigações antropométricas comuns (peso corporal, IMC, circunferência da cintura e do quadril), amostras de sangue serão coletadas para avaliações laboratoriais (exames laboratoriais comuns, parâmetros do metabolismo da glicose e lipídios, adipocinas escolhidas, marcadores de estresse oxidativo, hormônios intestinais, composição de ácidos graxos no soro fosfolípidos etc.- ver métodos analíticos).
2. Teste de refeição para avaliação de tolerância à glicose após café da manhã padrão/baguete Crocodille Cheese Gourmet - 180g, energia 452,8 Kcal/1895,7 kJ, composição: carboidratos 49,2 g (44,55%), proteínas 18,5 g (16, 74%), lipídios 18,8 g (38,7%), dos quais saturados 6,8 g, monoinsaturados 6,0 g, poliinsaturados 5,0 g/. Amostras de sangue para avaliação de glicemia, peptídeo C, insulina imunorreativa (IRI) serão coletadas em 0, 30, 60, 120 e 180 minutos após o café da manhã.
3. Clamp isoglicêmico (HIC) hiperinsulinêmico (1 mU/kg/min) 3 horas de duração com calorimetria indireta. Este método permite a quantificação exata da resistência à insulina e utilização de substratos energéticos.
4. Varredura de ressonância magnética (ressonância magnética) do fígado para medir o conteúdo de gordura hepática.
5. Digitalização DXA (absorciometria de raios X de dupla energia) para medir a composição corporal total e o teor de gordura.
6. A secreção de insulina e o controle da glicose serão medidos durante um dia de internação no final de cada regime. Amostras de sangue serão coletadas a cada três horas durante todo o dia. A urina será coletada durante todo o dia para medir a microalbuminúria e resíduos de peptídeo C.

Métodos analíticos:

As concentrações plasmáticas de adipocinas selecionadas (resistina, adiponectina total, HMW-adiponectina, TNFalfa e leptina) e outras citocinas e proteínas (FABP) serão medidas enzimaticamente usando kits padrão (ELISA, Linco, EUA). Os níveis plasmáticos de hormônios intestinais serão medidos enzimaticamente usando kits padrão (Milliplex, Millipore, EUA). Parâmetros de peroxidação lipídica serão determinados de acordo com os níveis de TBARS pela reação com ácido tiobarbitúrico e de acordo com os níveis de dienos conjugados.

O nível de glutationa reduzida e oxidada será determinado pelo método de HPLC com detecção de fluorescência. O ácido ascórbico será determinado por reação espectrofotométrica com dinitrofenilhidrazina. As concentrações de a- e g-tocoferol no soro serão determinadas por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) de fase reversa com detecção de fluorescência de acordo com o método modificado de Catignani e Biery. A atividade da SOD será analisada pela reação de bloqueio da redução do azul de nitrotetrazólio e formação de nitroformasano. A medição da atividade da catalase é baseada na capacidade do H2O2 de produzir com o molibdato de amônio o complexo colorido detectado espectrofotometricamente. A atividade da glutationa peroxidase será monitorada pela velocidade de oxidação da glutationa pelo reagente de Ellman. A glicose sérica será analisada usando o método glicose-oxidase Beckman Analyzer (Beckman Instruments Inc., Fullerton, CA, EUA), o IRI será determinado por radioimunoensaio usando um kit IMMUNOTECH Insulin IRMA (IMMUNOTECH as, Praga, República Tcheca), C- peptídeo usando um kit IMMUNOTECH C-Peptide IRMA (IMMUNOTECH as, Praga, República Tcheca) e a hemoglobina glicada será medida por um teste de coluna de hemoglobina A1c da Bio-Rad (Bio-Rad Laboratories GmbH, Munique, Alemanha).

O padrão de ácidos graxos nos fosfolipídios séricos será medido após extração dos lipídios segundo Folch e separação das frações lipídicas por cromatografia em camada delgada. Os ésteres metílicos de ácidos graxos serão separados por cromatografia gasosa.

Eventuais efeitos de diferentes regimes de frequência de refeições serão avaliados devido aos polimorfismos dos genes escolhidos.

Análise estatística: Será feita com o uso de testes ANOVA, testes t de par e desemparelhamento e outros métodos estatísticos usando programas estatísticos padrão. A estimativa do número de indivíduos a serem recrutados foi feita usando análise de poder de medições repetidas por meio do software estatístico PASS 2005 (Number Cruncher Statistical Systems, Kaysville, UT, EUA). Os fatores incluídos neste modelo são fatores interindividuais (controle vs. grupo experimental), fatores intraindividuais (estádio temporal individual no estudo) e interação entre fatores (grau de divergência entre os perfis temporais no grupo controle e experimental).

Prazo: dezembro de 2010 a fevereiro de 2011 recrutamento dos participantes março de 2011 início do estudo Grupo A: 12 semanas 6 refeições/dia seguidas de 12 semanas adicionais de 2 refeições/dia Grupo B: 12 ​​semanas 2 refeições/dia seguidas de 12 refeições adicionais semanas de 6 refeições/dia setembro de 2011 fim do estudo

Todas as medições serão feitas no início, semana 12 e semana 24.