Ateriatiheyden vaikutus insuliiniresistenssiin potilailla, joilla on tyypin 2 diabetes (Frequency)

Hankkeen tavoitteet ja painopisteet Tämän tutkimuksen tarkoituksena on

1. testaa aterioiden tiheyden (kuusi vs. kaksi ateriaa päivässä samalla -500 kcal/vrk kalorirajoituksella) vaikutusta insuliiniherkkyyteen, insuliinin eritykseen ja maksan rasvapitoisuuteen.
2. luonnehtia joitain eri ateriointitiheysten vaikutusmekanismeja (viskeraalisen rasvan määrä, maksan rasvapitoisuus, seerumin adipokiinipitoisuudet, suoliston hormonit, hapettumisstressimarkkerit).
3. testaa osallistujien kykyä ylläpitää vähäkalorista ruokavaliota molemmilla hoito-ohjelmilla, kun heidät on koulutettu ja jätetty valmistamaan ateriansa yksin verrattuna niihin, joille tarjotaan kaikki ateriat tutkimuksen aikana.

Se on satunnaistettu, jakotutkimus, jossa 50 tyypin 2 diabetesta sairastavaa henkilöä muuttaa satunnaisessa järjestyksessä kahta hoito-ohjelmaa: kuusi ateriaa ja kaksi ateriaa päivässä. Jokainen testausjakso kestää kolme kuukautta.

Glukoosi- ja lipidiaineenvaihdunta ja sen säätely testataan perusteellisesti alussa ja jokaisen 3 kuukauden jakson jälkeen (ateriakoe, hyperinsulineminen isoglykeeminen puristin, epäsuora kalorimetria, maksan MRI-kuvaus, DXA-skannaus, valittujen adipokiinien seerumipitoisuuden määritys, suolisto hormonit ja hapettumisstressimarkkerit).

Hypoteesi Tutkijat olettavat, että alhaiset plasman insuliinitasot (jotka saavutetaan paaston aikana) vähentävät insuliiniresistenssiä ja maksan lipidipitoisuutta. Sitä vastoin säännölliset ateriat (ja sen seurauksena korkeammat plasman insuliinitasot) altistavat alkoholittomille rasvamaksasairauksille ja insuliiniresistenssille. Tutkijat olettavat lisäksi, että osallistujat lisäävät kalorinsaantiaan lisääntyneellä ateriatiheydellä (huolimatta perusteellisesta koulutuksesta), kun he jäävät valmistamaan ateriansa verrattuna niihin, joille kaikki ateriat tarjotaan.

Avainsanat Insuliiniresistenssi, ateriatiheys, tyypin 2 diabetes mellitus, alkoholiton rasvamaksasairaus, adipokiinit, suolistohormonit, oksidatiivinen stressi Metodologia Tutkimussuunnitelma: tutkijat käyttävät satunnaistetun, ristikkäisen tutkimuksen suunnittelua, jossa 50 henkilöä, joilla on tyyppi 2 diabetes muuttaa ruokailutiheyttä satunnaisessa järjestyksessä: kuusi ja kaksi ateriaa päivässä. Kalorirajoitus on sama (-500 kcal/vrk). Jokainen testausjakso kestää kolme kuukautta. Puolelle osallistujista tarjotaan kaikki ateriat tutkimuksen aikana. Toinen puolikas koulutetaan perusteellisesti päivittäisen kalorinsaannin ylläpitämiseen molempien hoitojen aikana ja he valmistavat ateriansa yksin.

Tutkimusryhmä: 50 tyypin 2 diabetesta sairastavaa henkilöä, jotka hoidettiin pelkällä ruokavaliolla tai suun kautta otetuilla hypoglykeemisillä lääkkeillä, diabeteksen kesto vähintään 1 vuosi, sekä miehet että naiset, ikä 30-65 vuotta, BMI 27-50 kg/m². Koehenkilöille selitetään tutkimuksen tavoitteet, menetelmät ja riskit ja he allekirjoittavat tietoisen suostumuksen (Liite 1).

Ohjelmat: Kuusi ateriaa päivässä -ohjelmassa osallistujia pyydetään jakamaan kokonaiskalorinsaanti kuuteen ateriaan ja syömään kahden tai kolmen tunnin välein. Kaksi ateriaa päivässä -ohjelmassa he jakavat kokonaiskalorinsa kahteen ateriaan: ensimmäinen ateria syödään klo 6-10 välillä, toinen puolenpäivän ja 16 välillä.

Fyysinen aktiivisuus: Osallistujia pyydetään olemaan muuttamatta liikuntatottumuksiaan tutkimuksen aikana. Fyysistä aktiivisuutta seurataan askelmittareilla ja standardoiduilla kyselylomakkeilla: International Physical Activity Questionnaire (IPAQ) ja Baecke-kysely.

Toimenpiteet:

Alussa (viikko 0) ja joka 3. kuukauden lopussa (viikoilla 12 ja 24) suoritetaan seuraavat toimenpiteet ja mittaukset jokaiselle aiheelle (kolme kertaa kussakin aiheessa):

1. Yleiset antropometriset tutkimukset (paino, BMI, vyötärön ja lonkan ympärysmitta), verinäytteitä otetaan laboratoriotutkimuksia varten (yhteiset laboratoriotutkimukset, glukoosi- ja lipidiaineenvaihdunnan parametrit, valitut adipokiinit, oksidatiiviset stressimarkkerit, suoliston hormonit, seerumin rasvahappokoostumus fosfolipidit jne. – katso analyyttiset menetelmät).
2. Ateriatesti glukoositoleranssin arvioimiseksi normaalin aamiaisen jälkeen /patonki Crocodille Cheese Gourmet - 180g, energia 452,8 Kcal/1895,7 kJ, koostumus: hiilihydraatit 49,2 g (44,55%), proteiinit 18,5 g (16, 74 %), lipidejä 18,8 g (38,7 %), joista tyydyttyneitä 6,8 g, kertatyydyttymättömiä 6,0 g, monityydyttymättömiä 5,0 g/. Verinäytteet glykemian, C-peptidin, immunoreaktiivisen insuliinin (IRI) arvioimiseksi otetaan 0, 30, 60, 120 ja 180 minuutin kuluttua aamiaisesta.
3. Hyperinsulineminen (1 mU/kg/min) isoglykeeminen puristin (HIC) 3 tunnin mittainen epäsuoralla kalorimetrialla. Tämä menetelmä mahdollistaa insuliiniresistenssin ja energiasubstraattien käytön tarkan kvantifioinnin.
4. MRI (magneettikuvaus) maksasta maksan rasvapitoisuuden mittaamiseksi.
5. DXA (Dual Energy X-ray absorptiometry) -skannaus kehon kokonaiskoostumuksen ja rasvapitoisuuden mittaamiseksi.
6. Insuliinin eritystä ja glukoosin hallintaa mitataan yhden päivän sairaalassaoloaikana kunkin hoito-ohjelman lopussa. Verinäytteitä otetaan kolmen tunnin välein koko päivän ajan. Virtsaa kerätään koko päivän ajan mikroalbuminuria- ja C-peptidijätteen mittaamiseksi.

Analyyttiset menetelmät:

Valittujen adipokiinien (resistiini, adiponektiinin kokonaismäärä, HMW-adiponektiini, TNFalfa ja leptiini) ja muiden sytokiinien ja proteiinien (FABP) pitoisuudet plasmassa mitataan entsymaattisesti käyttämällä standardipakkauksia (ELISA, Linco, USA). Suoliston hormonien plasmatasot mitataan entsymaattisesti standardipakkausten (Milliplex, Millipore, USA) avulla. Lipidiperoksidaatioparametrit määritetään TBARS-tasojen mukaisesti reaktiolla tiobarbituurihapon kanssa ja konjugoituneiden dieenien pitoisuuksien mukaan.

Pelkistyneen ja hapettuneen glutationin taso määritetään HPLC-menetelmällä fluoresenssidetektiolla. Askorbiinihappo määritetään spektrofotometrisesti reaktiolla dinitrofenyylihydratsiinin kanssa. Seerumin a- ja g-tokoferolin pitoisuudet määritetään korkean erotuskyvyn käänteisfaasinestekromatografialla (HPLC) fluoresenssidetektiolla Catignanin ja Bieryn modifioidun menetelmän mukaisesti. SOD:n aktiivisuus analysoidaan reaktiolla, joka estää nitrotetratsoliumsinisen pelkistyksen ja nitroformasaanin muodostumisen. Katalaasiaktiivisuuden mittaus perustuu H2O2:n kykyyn tuottaa ammoniummolybdaatilla spektrofotometrisesti havaittu värikompleksi. Glutationiperoksidaasin aktiivisuutta seurataan glutationin hapettumisnopeudella Ellman-reagenssilla. Seerumin glukoosi analysoidaan glukoosioksidaasimenetelmällä Beckman Analyzer (Beckman Instruments Inc., Fullerton, CA, USA), IRI määritetään radioimmunomäärityksellä käyttäen IMMUNOTECH Insulin IRMA -kittiä (IMMUNOTECH as, Praha, Tšekki), C- peptidi käyttäen IMMUNOTECH C-Peptide IRMA -pakkausta (IMMUNOTECH as, Praha, Tšekki) ja glykoitu hemoglobiini mitataan Bio-Rad Hemoglobin A1c -kolonnitestillä (Bio-Rad Laboratories GmbH, München, Saksa).

Rasvahappokuvio seerumin fosfolipideissä mitataan lipidiuuton jälkeen Folchin mukaisesti ja lipidifraktioiden erottamisen jälkeen ohutkerroskromatografialla. Rasvahappojen metyyliesterit erotetaan kaasukromatografialla.

Erilaisten ateria-ohjelmien mahdolliset vaikutukset arvioidaan valituista geenipolymorfismista johtuen.

Tilastollinen analyysi: Tehdään ANOVA-testeillä, pari- ja parittomilla t-testeillä ja muilla tilastollisilla menetelmillä käyttäen vakiotilasto-ohjelmia. Arvio rekrytoitavien koehenkilöiden määrästä tehtiin käyttämällä toistuvien mittausten tehoanalyysiä tilastoohjelmistolla PASS 2005 (Number Cruncher Statistical Systems, Kaysville, UT, USA). Tähän malliin sisältyviä tekijöitä ovat yksilöiden väliset tekijät (kontrolli vs. koeryhmä), yksilön sisäiset tekijät (yksilöllinen aikastadion tutkimuksessa) ja tekijöiden välinen vuorovaikutus (verrokki- ja koeryhmän aikaprofiilien välinen ero).

Aikataulu: Joulukuu 2010-helmikuu 2011 osallistujien rekrytointi Maaliskuu 2011 tutkimuksen alku Ryhmä A: 12 viikkoa 6 ateriaa/päivä, jonka jälkeen 12 viikkoa 2 ateriaa/päivä Ryhmä B: 12 ​​viikkoa 2 ateriaa/päivä ja sen jälkeen 12 lisäruokaa viikkoa 6 ateriaa/päivä syyskuu 2011 tutkimuksen loppu

Kaikki mittaukset tehdään alussa, viikolla 12 ja viikolla 24.