Effet de la fréquence des repas sur la résistance à l'insuline chez les sujets atteints de diabète de type 2 (Frequency)

Objectifs et priorités du projet Le but de cette étude est de

1. tester l'effet de la fréquence des repas (six vs deux repas par jour avec la même restriction calorique quotidienne de -500 kcal/jour) sur la sensibilité à l'insuline, la sécrétion d'insuline et la teneur en graisse hépatique.
2. caractériser certains des mécanismes d'action des différentes fréquences de repas (quantité de graisse viscérale, teneur en graisse hépatique, concentrations sériques d'adipokines, hormones intestinales, marqueurs du stress oxydatif).
3. tester la capacité des participants à maintenir un régime hypocalorique sur les deux régimes lorsqu'ils sont éduqués et laissés seuls pour préparer leurs repas par rapport à ceux pour qui tous les repas de l'étude seront fournis.

Il s'agira d'une étude croisée randomisée, où 50 personnes atteintes de diabète de type 2 changeront dans un ordre aléatoire deux régimes : six et deux repas par jour. Chaque période de test durera trois mois.

Le métabolisme du glucose et des lipides et sa régulation seront minutieusement testés au début et après chaque période de 3 mois (test de repas, pince isoglycémique hyperinsulinémique, calorimétrie indirecte, IRM du foie, DXA, détermination de la concentration sérique d'adipokines sélectionnées, intestin hormones et marqueurs de stress oxydatif).

Hypothèse Les chercheurs émettent l'hypothèse que de faibles niveaux d'insuline plasmatique (obtenus par des périodes de jeûne) réduiront la résistance à l'insuline et la teneur en lipides hépatiques. En revanche, des repas fréquents (et par conséquent des taux plasmatiques plus élevés d'insuline) prédisposeront à la stéatose hépatique non alcoolique et à la résistance à l'insuline. Les enquêteurs émettent en outre l'hypothèse que les participants augmenteront leur apport calorique avec une fréquence de repas accrue (malgré une éducation approfondie) lorsqu'ils seront laissés pour préparer leurs repas par rapport à ceux pour qui tous les repas seront fournis.

Mots clés Résistance à l'insuline, fréquence des repas, diabète sucré de type 2, stéatose hépatique non alcoolique, adipokines, hormones intestinales, stress oxydatif le diabète va modifier dans un ordre aléatoire la fréquence de ses repas : six et deux repas par jour. La restriction calorique sera la même (-500 kcal/jour). Chaque période de test durera trois mois. Pour la moitié des participants, tous les repas pendant l'étude seront fournis. L'autre moitié sera parfaitement éduquée sur la façon de maintenir son apport calorique quotidien pendant les deux régimes et elle préparera ses repas seule.

Groupe d'étude : 50 individus atteints de diabète de type 2 traités uniquement par un régime ou des hypoglycémiants oraux, durée du diabète d'au moins 1 an, hommes et femmes, âgés de 30 à 65 ans, IMC de 27 à 50 kg/m². Les sujets se verront expliquer les objectifs, les méthodes et les risques de l'étude et ils signeront un consentement éclairé (Annexe 1).

Régimes : sur le régime de six repas par jour, les participants seront invités à diviser leur apport calorique total en six repas et à manger toutes les deux ou trois heures. Sur le régime de deux repas par jour, ils diviseront leur apport calorique total en deux repas : le premier repas sera pris entre 6 h et 10 h, le second entre 12 h et 16 h.

Activité physique : les participants seront invités à ne pas modifier leurs habitudes d'exercice pendant l'étude. L'activité physique sera suivie à l'aide de podomètres et de questionnaires standardisés : questionnaire international sur l'activité physique (IPAQ) et questionnaire de Baecke.

Procédures:

Au début (semaine 0) et à la fin de tous les 3 mois (semaines 12 et 24), les procédures et mesures suivantes seront effectuées chez chaque sujet (trois fois chez chaque sujet) :

1. Enquêtes anthropométriques courantes (poids corporel, IMC, tour de taille et de hanche), des échantillons de sang seront prélevés pour des évaluations en laboratoire (tests de laboratoire courants, paramètres du métabolisme du glucose et des lipides, adipokines choisies, marqueurs de stress oxydatif, hormones intestinales, composition en acides gras dans le sérum phospholipides etc. - voir méthodes analytiques).
2. Test de repas pour l'évaluation de la tolérance au glucose après petit-déjeuner standard/baguette Crocodille Cheese Gourmet - 180g, énergie 452,8 Kcal/1895,7 kJ, composition : glucides 49,2 g (44,55%), protéines 18,5 g (16, 74%), lipides 18,8 g (38,7%), dont saturés 6,8 g, monoinsaturés 6,0 g, polyinsaturés 5,0 g/. Des échantillons de sang pour l'évaluation de la glycémie, du peptide C, de l'insuline immunoréactive (IRI) seront prélevés 0, 30, 60, 120 et 180 minutes après le petit-déjeuner.
3. Clamp isoglycémique (HIC) hyperinsulinémique (1 mU/kg/min) de 3 heures avec calorimétrie indirecte. Cette méthode permet une quantification exacte de la résistance à l'insuline et de l'utilisation des substrats énergétiques.
4. IRM (imagerie par résonance magnétique) du foie pour mesurer la teneur en graisse hépatique.
5. Analyse DXA (absorptiométrie à rayons X à double énergie) pour mesurer la composition corporelle totale et la teneur en graisse.
6. La sécrétion d'insuline et le contrôle de la glycémie seront mesurés pendant un séjour d'une journée à l'hôpital à la fin de chaque régime. Des échantillons de sang seront prélevés toutes les trois heures pendant toute la journée. L'urine sera collectée pendant toute la journée pour mesurer la microalbuminurie et les déchets de peptide C.

Méthodes analytiques :

Les concentrations plasmatiques d'adipokines sélectionnées (résistine, adiponectine totale, HMW-adiponectine, TNFalfa et leptine) et d'autres cytokines et protéines (FABP) seront mesurées par voie enzymatique à l'aide de kits standard (ELISA, Linco, USA). Les taux plasmatiques d'hormones intestinales seront mesurés par voie enzymatique à l'aide de kits standards (Milliplex, Millipore, USA). Les paramètres de peroxydation lipidique seront déterminés en fonction des taux de TBARS par la réaction avec l'acide thiobarbiturique et en fonction des taux de diènes conjugués.

Le niveau de glutathion réduit et oxydé sera déterminé en utilisant la méthode HPLC avec détection de fluorescence. L'acide ascorbique sera dosé par réaction spectrophotométrique avec la dinitrophénylhydrazine. Les concentrations d'a- et de g-tocophérol dans le sérum seront déterminées par chromatographie liquide à haute performance (HPLC) en phase inverse avec détection de fluorescence selon la méthode modifiée de Catignani et Biery. L'activité de la SOD sera analysée par la réaction de blocage de la réduction du bleu de nitrotéthrazolium et de la formation de nitrophormasane. La mesure de l'activité catalase est basée sur la capacité de H2O2 à produire avec le molybdate d'ammonium le complexe coloré détecté par spectrophotométrie. L'activité de la glutathion peroxydase sera contrôlée par la vitesse d'oxydation du glutathion par le réactif d'Ellman. Le glucose sérique sera analysé à l'aide de la méthode glucose-oxydase Beckman Analyzer (Beckman Instruments Inc., Fullerton, CA, USA), l'IRI sera déterminé par radioimmunodosage à l'aide d'un kit IMMUNOTECH Insulin IRMA (IMMUNOTECH as, Prague, République tchèque), C- peptide à l'aide d'un kit IMMUNOTECH C-Peptide IRMA (IMMUNOTECH as, Prague, République tchèque) et l'hémoglobine glyquée seront mesurés par un test sur colonne d'hémoglobine A1c Bio-Rad (Bio-Rad Laboratories GmbH, Munich, Allemagne).

Le profil des acides gras dans les phospholipides sériques sera mesuré après extraction des lipides selon Folch et séparation des fractions lipidiques par chromatographie sur couche mince. Les esters méthyliques d'acides gras seront séparés par chromatographie en phase gazeuse.

Les effets éventuels de différents régimes de fréquence des repas seront évalués en raison des polymorphismes génétiques choisis.

Analyse statistique : sera effectuée à l'aide de tests ANOVA, de tests t appariés et non appariés et d'autres méthodes statistiques à l'aide de programmes statistiques standard. L'estimation du nombre de sujets à recruter a été réalisée à l'aide d'une analyse de puissance de mesures répétées via le logiciel statistique PASS 2005 (Number Cruncher Statistical Systems, Kaysville, UT, USA). Les facteurs inclus dans ce modèle sont des facteurs interindividuels (groupe témoin vs groupe expérimental), des facteurs intraindividuels (stade temporel individuel dans l'étude) et des interactions entre facteurs (degré de divergence entre les profils temporels dans le groupe témoin et le groupe expérimental).

Période : Décembre 2010-Février 2011 recrutement des participants Mars 2011 début de l'étude Groupe A : 12 semaines 6 repas/jour suivis de 12 semaines supplémentaires de 2 repas/jour Groupe B : 12 semaines 2 repas/jour suivis de 12 autres semaines de 6 repas/jour Septembre 2011 fin de l'étude

Toutes les mesures seront effectuées au début, semaine 12 et semaine 24.