Влияние частоты приема пищи на инсулинорезистентность у пациентов с диабетом 2 типа (Frequency)

Цели и приоритеты проекта Целью данного исследования является

1. проверить влияние частоты приема пищи (шесть или два раза в день с тем же суточным ограничением калорийности -500 ккал/день) на чувствительность к инсулину, секрецию инсулина и содержание жира в печени.
2. охарактеризовать некоторые механизмы действия различной частоты приема пищи (количество висцерального жира, содержание жира в печени, сывороточные концентрации адипокинов, гормонов кишечника, маркеры окислительного стресса).
3. проверить способность участников поддерживать гипокалорийную диету при обоих режимах, когда они обучены и оставлены для приготовления пищи в одиночку, по сравнению с теми, для которых будет предоставлено все питание во время исследования.

Это будет рандомизированное перекрестное исследование, в котором 50 человек с диабетом 2 типа изменят в случайном порядке два режима питания: шестиразовое и двухразовое. Каждый период тестирования будет длиться три месяца.

Метаболизм глюкозы и липидов и его регуляция будут тщательно проверены в начале и через каждые 3 месяца (пищевой тест, гиперинсулинемический изогликемический клэмп, непрямая калориметрия, МРТ печени, DXA сканирование, определение концентрации в сыворотке выбранных адипокинов, исследование кишечника). гормоны и маркеры окислительного стресса).

Гипотеза Исследователи предполагают, что низкий уровень инсулина в плазме (достигаемый периодами голодания) снижает резистентность к инсулину и содержание липидов в печени. Напротив, частые приемы пищи (и, как следствие, более высокие уровни инсулина в плазме) предрасполагают к неалкогольной жировой болезни печени и резистентности к инсулину. Исследователи также предполагают, что участники увеличат потребление калорий с увеличением частоты приема пищи (несмотря на тщательное обучение), когда их оставят готовить еду, по сравнению с теми, для кого питание будет предоставлено полностью.

Ключевые слова Инсулинорезистентность, частота приема пищи, сахарный диабет 2 типа, неалкогольная жировая болезнь печени, адипокины, гормоны кишечника, окислительный стресс. Методология. диабетики будут менять в случайном порядке частоту своего питания: шести- и двухразовое. Калорийность будет такой же (-500 ккал/день). Каждый период тестирования будет длиться три месяца. Для половины участников будет обеспечено все питание во время исследования. Другая половина будет тщательно обучена тому, как поддерживать ежедневное потребление калорий в обоих режимах, и они будут готовить еду в одиночку.

Исследуемая группа: 50 человек с сахарным диабетом 2 типа, получавших только диету или пероральные сахароснижающие препараты, длительность диабета не менее 1 года, мужчины и женщины, возраст 30-65 лет, ИМТ 27-50 кг/м². Субъектам будут разъяснены цели, методы и риски исследования, и они подпишут информированное согласие (Приложение 1).

Режимы: в режиме шестиразового питания участников попросят разделить общее потребление калорий на шесть приемов пищи и есть каждые два или три часа. При двухразовом питании они будут делить общее потребление калорий на два приема пищи: первый прием пищи будет между 6 и 10 часами утра, второй — между полуднем и 16 часами.

Физическая активность: Участников попросят не менять свои привычки к физическим упражнениям во время исследования. Физическая активность будет контролироваться с помощью шагомеров и стандартизированных вопросников: Международного опросника физической активности (IPAQ) и опросника Бекке.

Процедуры:

В начале (неделя 0) и в конце каждых 3 месяцев (недели 12 и 24) у каждого субъекта будут выполняться следующие процедуры и измерения (три раза у каждого субъекта):

1. Общие антропометрические исследования (масса тела, ИМТ, окружность талии и бедер), образцы крови будут взяты для лабораторных оценок (общие лабораторные тесты, параметры метаболизма глюкозы и липидов, выбранные адипокины, маркеры окислительного стресса, гормоны кишечника, состав жирных кислот в сыворотке). фосфолипиды и др.- см. аналитические методы).
2. Пищевой тест для определения толерантности к глюкозе после стандартного завтрака /багет Крокодил Чиз Гурмэ - 180г, энергетическая ценность 452,8 Ккал/1895,7 кДж, состав: углеводы 49,2 г (44,55%), белки 18,5 г (16, 74%), липидов 18,8 г (38,7%), из них насыщенных 6,8 г, мононенасыщенных 6,0 г, полиненасыщенных 5,0 г/. Образцы крови для оценки гликемии, С-пептида, иммунореактивного инсулина (ИРИ) будут брать через 0, 30, 60, 120 и 180 минут после завтрака.
3. Гиперинсулинемический (1 мЕд/кг/мин) изогликемический клэмп (HIC) продолжительностью 3 часа с непрямой калориметрией. Этот метод позволяет точно определить резистентность к инсулину и использование энергетических субстратов.
4. МРТ (магнитно-резонансная томография) печени для измерения содержания жира в печени.
5. DXA (двухэнергетическая рентгеновская абсорбциометрия) сканирование для измерения общего состава тела и содержания жира.
6. Секреция инсулина и контроль уровня глюкозы будут измеряться во время однодневного пребывания в больнице в конце каждого режима. Образцы крови будут браться каждые три часа в течение всего дня. Моча будет собираться в течение всего дня для измерения микроальбуминурии и отходов С-пептида.

Аналитические методы:

Концентрации в плазме выбранных адипокинов (резистин, общий адипонектин, HMW-адипонектин, TNF-альфа и лептин) и других цитокинов и белков (FABP) будут измеряться ферментативно с использованием стандартных наборов (ELISA, Linco, США). Уровни кишечных гормонов в плазме будут измерять ферментативно с использованием стандартных наборов (Milliplex, Millipore, USA). Показатели перекисного окисления липидов будут определять по уровням ТБАР в реакции с тиобарбитуровой кислотой и по уровням конъюгированных диенов.

Уровень восстановленного и окисленного глутатиона будет определяться методом ВЭЖХ с флуоресцентным детектированием. Аскорбиновую кислоту определят спектрофотометрической реакцией с динитрофенилгидразином. Концентрации a- и g-токоферола в сыворотке будут определять с помощью обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с флуоресцентным детектированием по модифицированному методу Catignani и Biery. Активность СОД будет анализироваться по реакции блокирования восстановления нитротетразолиевого синего и образования нитрофомазана. Измерение активности каталазы основано на способности H2O2 образовывать с молибдатом аммония окрашенный комплекс, определяемый спектрофотометрически. Активность глутатионпероксидазы будет контролироваться по скорости окисления глутатиона с помощью реактива Эллмана. Уровень глюкозы в сыворотке будет анализироваться с использованием глюкозооксидазного метода Beckman Analyzer (Beckman Instruments Inc., Фуллертон, Калифорния, США), IRI будет определяться радиоиммуноанализом с использованием набора IMMUNOTECH Insulin IRMA (IMMUNOTECH as, Прага, Чехия), C- Уровень пептида с использованием набора IMMUNOTECH C-Peptide IRMA (IMMUNOTECH as, Прага, Чехия) и гликированного гемоглобина будет измеряться с помощью колоночного теста Bio-Rad Hemoglobin A1c (Bio-Rad Laboratories GmbH, Мюнхен, Германия).

Состав жирных кислот в фосфолипидах сыворотки будет измерен после экстракции липидов по Фолчу и разделения фракций липидов с помощью тонкослойной хроматографии. Метиловые эфиры жирных кислот разделяют газовой хроматографией.

Возможные эффекты различных режимов частоты приема пищи будут оцениваться из-за выбранных полиморфизмов генов.

Статистический анализ: будет проводиться с использованием тестов ANOVA, парных и непарных t-тестов и других статистических методов с использованием стандартных статистических программ. Оценка количества субъектов, которые должны быть набраны, была сделана с использованием анализа мощности повторных измерений с помощью статистического программного обеспечения PASS 2005 (Number Cruncher Statistical Systems, Kaysville, UT, USA). Факторами, включенными в эту модель, являются межиндивидуальные факторы (контрольная и экспериментальная группы), внутрииндивидуальные факторы (индивидуальный временной стадион в исследовании) и взаимодействие между факторами (степень расхождения между временными профилями в контрольной и экспериментальной группах).

Сроки: декабрь 2010 г. – февраль 2011 г. набор участников март 2011 г. начало исследования Группа A: 12 недель 6 приемов пищи в день, затем еще 12 недель 2 приема пищи в день Группа B: 12 ​​недель 2 приема пищи в день, затем еще 12 недели 6-разового питания в день, сентябрь 2011 г., конец исследования

Все измерения будут проводиться в начале, на 12-й и 24-й неделе.