Wpływ częstotliwości posiłków na insulinooporność u osób z cukrzycą typu 2 (Frequency)

Cele i priorytety projektu Celem niniejszego opracowania jest

1. zbadać wpływ częstotliwości posiłków (sześć vs. dwa posiłki dziennie przy tym samym dziennym ograniczeniu kalorycznym -500 kcal/dzień) na wrażliwość na insulinę, wydzielanie insuliny i zawartość tłuszczu w wątrobie.
2. scharakteryzować niektóre mechanizmy działania różnych częstotliwości posiłków (ilość tłuszczu trzewnego, zawartość tłuszczu wątrobowego, stężenie adipokin w surowicy, hormony jelitowe, markery stresu oksydacyjnego).
3. przetestować zdolność uczestników do utrzymania diety hipokalorycznej na obu schematach, gdy są wykształceni i pozostawieni do samodzielnego przygotowywania posiłków w porównaniu z tymi, którym zapewnione zostaną wszystkie posiłki podczas badania.

Będzie to randomizowane badanie krzyżowe, w którym 50 osób z cukrzycą typu 2 zmieni w losowej kolejności dwa schematy: sześć i dwa posiłki dziennie. Każdy okres testowy potrwa trzy miesiące.

Gospodarka glukozowo-lipidowa i jej regulacja będą dokładnie badane na początku i po każdym 3-miesięcznym okresie (próba pokarmowa, klamra izoglikemiczna hiperinsulinemiczna, kalorymetria pośrednia, rezonans magnetyczny wątroby, badanie DXA, oznaczenie stężenia wybranych adipokin w surowicy, badanie jelit hormony i markery stresu oksydacyjnego).

Hipoteza Badacze postawili hipotezę, że niski poziom insuliny w osoczu (osiągnięty przez okresy postu) zmniejszy oporność na insulinę i zawartość lipidów w wątrobie. Natomiast częste posiłki (a co za tym idzie wyższy poziom insuliny w osoczu) predysponują do niealkoholowej stłuszczeniowej choroby wątroby i insulinooporności. Badacze wysuwają ponadto hipotezę, że uczestnicy będą zwiększać spożycie kalorii wraz ze zwiększoną częstotliwością posiłków (pomimo gruntownej edukacji), gdy zostaną pozostawieni do przygotowania posiłków w porównaniu z tymi, którym zapewnione zostaną wszystkie posiłki.

Słowa kluczowe Insulinooporność, częstotliwość posiłków, cukrzyca typu 2, niealkoholowe stłuszczenie wątroby, adipokiny, hormony jelitowe, stres oksydacyjny Metodologia Projekt badania: badacze wykorzystają projekt randomizowanego badania krzyżowego, w którym weźmie udział 50 osób z cukrzycą typu 2 diabetycy zmienią w losowej kolejności częstotliwość swoich posiłków: sześć i dwa posiłki dziennie. Ograniczenie kaloryczne będzie takie samo (-500 kcal/dzień). Każdy okres testowy potrwa trzy miesiące. Dla połowy uczestników zapewnione będą wszystkie posiłki w trakcie badania. Druga połowa zostanie gruntownie przeszkolona, ​​jak utrzymać dzienną podaż kalorii podczas obu schematów i samodzielnie będzie przygotowywać posiłki.

Grupa badana: 50 osób z cukrzycą typu 2 leczonych wyłącznie dietą lub doustnymi lekami hipoglikemizującymi, z cukrzycą od co najmniej 1 roku, kobiety i mężczyźni, wiek 30-65 lat, BMI 27-50 kg/m². Uczestnikom zostaną wyjaśnione cele, metody i zagrożenia związane z badaniem oraz podpiszą oni świadomą zgodę (Załącznik 1).

Schematy: W schemacie sześciu posiłków dziennie uczestnicy zostaną poproszeni o podzielenie całkowitego spożycia kalorii na sześć posiłków i jedzenie co dwie lub trzy godziny. W schemacie z dwoma posiłkami dziennie podzielą swoje całkowite spożycie kalorii na dwa posiłki: pierwszy posiłek będzie spożywany między 6 a 10 rano, drugi między południem a 16 po południu.

Aktywność fizyczna: Uczestnicy zostaną poproszeni o niezmienianie nawyków związanych z ćwiczeniami podczas badania. Aktywność fizyczna będzie monitorowana za pomocą krokomierzy oraz wystandaryzowanych kwestionariuszy: Międzynarodowego Kwestionariusza Aktywności Fizycznej (IPAQ) oraz kwestionariusza Baecke.

Procedury:

Na początku (tydzień 0) i na koniec co 3 miesiące (tydzień 12 i 24) u każdego pacjenta zostaną przeprowadzone następujące procedury i pomiary (trzy razy u każdego pacjenta):

1. Wspólne badania antropometryczne (masa ciała, BMI, obwód talii i bioder), pobranie krwi do badań laboratoryjnych (wspólne badania laboratoryjne, parametry metabolizmu glukozy i lipidów, wybrane adipokiny, markery stresu oksydacyjnego, hormony jelitowe, skład kwasów tłuszczowych w surowicy fosfolipidy itp. - patrz metody analityczne).
2. Test posiłkowy do oceny tolerancji glukozy po standardowym śniadaniu /bagietka Crocodille Cheese Gourmet - 180g, wartość energetyczna 452,8 Kcal/1895,7 kJ, skład: węglowodany 49,2 g (44,55%), białka 18,5 g (16, 74%), lipidy 18,8 g (38,7%), w tym nasycone 6,8 g, jednonienasycone 6,0 g, wielonienasycone 5,0 g/. Próbki krwi do oceny glikemii, peptydu C, insuliny immunoreaktywnej (IRI) będą pobierane 0, 30, 60, 120 i 180 minut po śniadaniu.
3. Hiperinsulinemiczny (1 mU/kg/min) klamra izoglikemiczna (HIC) trwająca 3 godziny z kalorymetrią pośrednią. Metoda ta pozwala na dokładne określenie ilościowe insulinooporności i wykorzystania substratów energetycznych.
4. MRI (obrazowanie metodą rezonansu magnetycznego) wątroby w celu zmierzenia zawartości tłuszczu w wątrobie.
5. Skanowanie DXA (absorpcjometria rentgenowska o podwójnej energii) w celu pomiaru całkowitego składu ciała i zawartości tłuszczu.
6. Wydzielanie insuliny i kontrola glikemii będą mierzone podczas jednodniowego pobytu w szpitalu pod koniec każdego schematu. Próbki krwi będą pobierane co trzy godziny przez cały dzień. Mocz będzie zbierany przez cały dzień w celu pomiaru mikroalbuminurii i odpadów peptydu C.

Metody analityczne:

Stężenia wybranych adipokin w osoczu (rezystyna, adiponektyna całkowita, adiponektyna HMW, TNFalfa i leptyna) oraz innych cytokin i białek (FABP) będą oznaczane enzymatycznie za pomocą standardowych zestawów (ELISA, Linco, USA). Poziomy hormonów jelitowych w osoczu będą mierzone enzymatycznie przy użyciu standardowych zestawów (Milliplex, Millipore, USA). Parametry peroksydacji lipidów zostaną określone na podstawie poziomów TBARS w reakcji z kwasem tiobarbiturowym oraz na podstawie poziomów sprzężonych dienów.

Poziom glutationu zredukowanego i utlenionego zostanie określony metodą HPLC z detekcją fluorescencyjną. Kwas askorbinowy zostanie oznaczony w reakcji spektrofotometrycznej z dinitrofenylohydrazyną. Stężenia a- i g-tokoferolu w surowicy będą oznaczane metodą wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC) w układzie faz odwróconych z detekcją fluorescencyjną według zmodyfikowanej metody Catignani i Biery. Aktywność SOD będzie analizowana poprzez reakcję blokowania redukcji błękitu nitrotetrazoliowego i powstawania nitroformazanu. Pomiar aktywności katalazy opiera się na zdolności H2O2 do wytwarzania z molibdenianem amonu barwnego kompleksu wykrywanego spektrofotometrycznie. Aktywność peroksydazy glutationowej będzie monitorowana na podstawie szybkości utleniania glutationu za pomocą odczynnika Ellmana. Stężenie glukozy w surowicy będzie analizowane metodą oksydazy glukozy Beckman Analyzer (Beckman Instruments Inc., Fullerton, CA, USA), IRI będzie oznaczane metodą radioimmunologiczną przy użyciu zestawu IMMUNOTECH Insulin IRMA (IMMUNOTECH as, Praga, Czechy), C- peptyd przy użyciu zestawu IMMUNOTECH C-Peptide IRMA (IMMUNOTECH as, Praga, Republika Czeska) i hemoglobina glikowana będą mierzone za pomocą testu kolumnowego Bio-Rad Hemoglobin A1c (Bio-Rad Laboratories GmbH, Monachium, Niemcy).

Wzór kwasów tłuszczowych w fosfolipidach surowicy zostanie zmierzony po ekstrakcji lipidów metodą Folcha i rozdzieleniu frakcji lipidowych metodą chromatografii cienkowarstwowej. Estry metylowe kwasów tłuszczowych będą rozdzielane metodą chromatografii gazowej.

Ewentualne skutki różnych schematów częstotliwości posiłków zostaną ocenione ze względu na wybrane polimorfizmy genów.

Analiza statystyczna: Zostanie wykonana z wykorzystaniem testów ANOVA, t-testów parowania i rozwiązywania par oraz innych metod statystycznych z wykorzystaniem standardowych programów statystycznych. Oszacowania liczby badanych do rekrutacji dokonano za pomocą analizy mocy powtarzanych pomiarów za pomocą oprogramowania statystycznego PASS 2005 (Number Cruncher Statistical Systems, Kaysville, UT, USA). Czynnikami uwzględnionymi w tym modelu są czynniki międzyosobnicze (grupa kontrolna vs. eksperymentalna), czynniki wewnątrzosobnicze (indywidualny etap czasowy w badaniu) oraz interakcja między czynnikami (stopień rozbieżności między profilami czasowymi w grupie kontrolnej i eksperymentalnej).

Ramy czasowe: grudzień 2010-luty 2011 rekrutacja uczestników marzec 2011 rozpoczęcie badania Grupa A: 12 tygodni 6 posiłków/dzień następnie dodatkowe 12 tygodni po 2 posiłki/dzień Grupa B: 12 ​​tygodni 2 posiłki/dzień następnie dodatkowe 12 tygodnie 6 posiłków/dzień wrzesień 2011 koniec badania

Wszystkie pomiary zostaną wykonane na początku, w 12. i 24. tygodniu.