Effetto della frequenza dei pasti sulla resistenza all'insulina nei soggetti con diabete di tipo 2 (Frequency)

Obiettivi e priorità del progetto Lo scopo di questo studio è quello di

1. testare l'effetto della frequenza dei pasti (sei vs. due pasti al giorno con la stessa restrizione calorica giornaliera di -500 kcal/die) sulla sensibilità all'insulina, sulla secrezione di insulina e sul contenuto di grasso epatico.
2. caratterizzare alcuni dei meccanismi di azione delle diverse frequenze dei pasti (quantità di grasso viscerale, contenuto di grasso epatico, concentrazioni sieriche di adipochine, ormoni intestinali, marcatori dello stress ossidativo).
3. testare la capacità dei partecipanti di mantenere una dieta ipocalorica su entrambi i regimi quando istruiti e lasciati a preparare i propri pasti da soli rispetto a quelli per i quali verranno forniti tutti i pasti durante lo studio.

Sarà uno studio randomizzato e incrociato, in cui 50 individui con diabete di tipo 2 cambieranno in ordine casuale due regimi: sei e due pasti al giorno. Ogni periodo di prova durerà tre mesi.

Il metabolismo del glucosio e dei lipidi e la sua regolazione saranno accuratamente testati all'inizio e dopo ogni periodo di 3 mesi (test del pasto, clamp isoglicemico iperinsulinemico, calorimetria indiretta, risonanza magnetica del fegato, scansione DXA, determinazione della concentrazione sierica di adipochine selezionate, ormoni e marcatori di stress ossidativo).

Ipotesi I ricercatori ipotizzano che bassi livelli plasmatici di insulina (come raggiunti da periodi di digiuno) ridurranno la resistenza all'insulina e il contenuto di lipidi epatici. Al contrario, pasti frequenti (e conseguenti livelli plasmatici più elevati di insulina) predispongono alla steatosi epatica non alcolica e all'insulino-resistenza. I ricercatori ipotizzano inoltre che i partecipanti aumenteranno il loro apporto calorico con una maggiore frequenza dei pasti (nonostante un'istruzione approfondita) quando lasciati a preparare i loro pasti rispetto a quelli per i quali saranno forniti tutti i pasti.

Parole chiave Insulino-resistenza, frequenza dei pasti, diabete mellito di tipo 2, steatosi epatica non alcolica, adipochine, ormoni intestinali, stress ossidativo Metodologia Disegno dello studio: i ricercatori utilizzeranno il disegno di uno studio randomizzato e crossover, in cui 50 individui con il diabete cambierà in ordine casuale la frequenza dei loro pasti: sei e due pasti al giorno. La restrizione calorica sarà la stessa (-500 kcal/giorno). Ogni periodo di prova durerà tre mesi. Per metà dei partecipanti saranno forniti tutti i pasti durante lo studio. L'altra metà sarà istruita a fondo su come mantenere il proprio apporto calorico giornaliero durante entrambi i regimi e preparerà i pasti da sola.

Gruppo di studio: 50 individui con diabete di tipo 2 trattati solo con dieta o agenti ipoglicemizzanti orali, durata del diabete di almeno 1 anno, uomini e donne, età 30-65 anni, BMI 27-50 kg/m². Ai soggetti verranno illustrate finalità, modalità e rischi dello studio e firmeranno il consenso informato (Appendice 1).

Regimi: nel regime di sei pasti al giorno, ai partecipanti verrà chiesto di dividere il loro apporto calorico totale in sei pasti e di mangiare ogni due o tre ore. Nel regime di due pasti al giorno, divideranno il loro apporto calorico totale in due pasti: il primo pasto sarà consumato tra le 6:00 e le 10:00, il secondo tra mezzogiorno e le 16:00.

Attività fisica: ai partecipanti verrà chiesto di non modificare le proprie abitudini di esercizio durante lo studio. L'attività fisica sarà monitorata utilizzando contapassi e questionari standardizzati: International Physical Activity Questionnaire (IPAQ) e Baecke questionario.

Procedure:

All'inizio (settimana 0) e alla fine di ogni 3 mesi (settimana 12 e 24), verranno eseguite le seguenti procedure e misurazioni su ciascun soggetto (tre volte in ciascun soggetto):

1. Indagini antropometriche comuni (peso corporeo, BMI, circonferenza vita e fianchi), verranno prelevati campioni di sangue per valutazioni di laboratorio (test di laboratorio comuni, parametri del metabolismo glucidico e lipidico, adipochine scelte, marcatori dello stress ossidativo, ormoni intestinali, composizione degli acidi grassi nel siero fosfolipidi ecc.- vedi metodi analitici).
2. Test del pasto per la valutazione della tolleranza al glucosio dopo colazione standard/baguette Crocodille Cheese Gourmet - 180g, valore energetico 452,8 Kcal/1895,7 kJ, composizione: carboidrati 49,2 g (44,55%), proteine ​​18,5 g (16, 74%), lipidi 18,8 g (38,7%), di cui saturi 6,8 g, monoinsaturi 6,0 g, polinsaturi 5,0 g/. I campioni di sangue per la valutazione della glicemia, del peptide C, dell'insulina immunoreattiva (IRI) verranno prelevati a 0, 30, 60, 120 e 180 minuti dopo la colazione.
3. Clamp isoglicemico (HIC) iperinsulinemico (1 mU/kg/min) della durata di 3 ore con calorimetria indiretta. Questo metodo consente una quantificazione esatta dell'insulino-resistenza e dell'utilizzo dei substrati energetici.
4. Scansione MRI (risonanza magnetica) del fegato per misurare il contenuto di grasso epatico.
5. Scansione DXA (Dual energy X-ray absorptiometry) per misurare la composizione corporea totale e il contenuto di grassi.
6. La secrezione di insulina e il controllo del glucosio saranno misurati durante un giorno di degenza in ospedale alla fine di ogni regime. I campioni di sangue verranno prelevati ogni tre ore durante l'intera giornata. L'urina sarà raccolta durante l'intera giornata per misurare la microalbuminuria e il C-peptide di scarto.

Metodi analitici:

Le concentrazioni plasmatiche di adipochine selezionate (resistina, adiponectina totale, HMW-adiponectina, TNFalfa e leptina) e di altre citochine e proteine ​​(FABP) saranno misurate enzimaticamente utilizzando kit standard (ELISA, Linco, USA). I livelli plasmatici degli ormoni intestinali saranno misurati enzimaticamente utilizzando kit standard (Milliplex, Millipore, USA). I parametri di perossidazione lipidica saranno determinati in base ai livelli di TBARS per reazione con acido tiobarbiturico e in base ai livelli di dieni coniugati.

Il livello di glutatione ridotto e ossidato sarà determinato utilizzando il metodo HPLC con rivelazione a fluorescenza. L'acido ascorbico sarà determinato mediante reazione spettrofotometrica con dinitrofenilidrazina. Le concentrazioni di a- e g-tocoferolo nel siero saranno determinate mediante cromatografia liquida ad alta prestazione (HPLC) in fase inversa con rilevazione della fluorescenza secondo il metodo modificato di Catignani e Biery. L'attività della SOD sarà analizzata mediante la reazione di blocco della riduzione del blu di nitrotetrazolio e la formazione di nitrophormasane. La misura dell'attività della catalasi si basa sulla capacità dell'H2O2 di produrre con il molibdato di ammonio il complesso di colore rilevato spettrofotometricamente. L'attività della glutatione perossidasi sarà monitorata mediante la velocità di ossidazione del glutatione mediante il reagente di Ellman. Il glucosio sierico sarà analizzato utilizzando il metodo della glucosio-ossidasi Beckman Analyzer (Beckman Instruments Inc., Fullerton, CA, USA), l'IRI sarà determinato mediante dosaggio radioimmunologico utilizzando un kit IMMUNOTECH Insulin IRMA (IMMUNOTECH as, Prague, Czech Republic), C- peptide utilizzando un kit IMMUNOTECH C-Peptide IRMA (IMMUNOTECH as, Praga, Repubblica Ceca) e l'emoglobina glicata sarà misurata mediante un test della colonna Bio-Rad Hemoglobin A1c (Bio-Rad Laboratories GmbH, Monaco, Germania).

Il profilo degli acidi grassi nei fosfolipidi sierici sarà misurato dopo l'estrazione dei lipidi secondo Folch e la separazione delle frazioni lipidiche mediante cromatografia su strato sottile. Gli esteri metilici degli acidi grassi saranno separati mediante gascromatografia.

Eventuali effetti di diversi regimi di frequenza dei pasti saranno valutati in base ai polimorfismi genici scelti.

Analisi statistica: verrà eseguita con l'uso di test ANOVA, test t di coppia e disaccoppiamento e altri metodi statistici utilizzando programmi statistici standard. La stima del numero di soggetti da reclutare è stata effettuata utilizzando l'analisi della potenza di misurazioni ripetute tramite il software statistico PASS 2005 (Number Cruncher Statistical Systems, Kaysville, UT, USA). I fattori inclusi in questo modello sono fattori interindividuali (gruppo di controllo rispetto a gruppo sperimentale), fattori intraindividuali (stadio temporale individuale nello studio) e interazione tra fattori (grado di divergenza tra i profili temporali nel gruppo di controllo e sperimentale).

Periodo: dicembre 2010-febbraio 2011 reclutamento dei partecipanti marzo 2011 inizio dello studio Gruppo A: 12 settimane 6 pasti/giorno seguite da ulteriori 12 settimane di 2 pasti/giorno Gruppo B: 12 ​​settimane 2 pasti/giorno seguite da ulteriori 12 settimane di 6 pasti/giorno settembre 2011 fine dello studio

Tutte le misurazioni verranno effettuate all'inizio, alla settimana 12 e alla settimana 24.