使用非结核分枝杆菌抗原刺激试验建立非结核分枝杆菌肺部感染的诊断试验：从免疫基础、标准化设置到验证

非结核分枝杆菌肺部感染的增加 非结核分枝杆菌肺部感染 (NTM-LD) 成为一个重要的临床问题 [1]，因为在过去十年中 NTM 感染率有所增加 [2-3]。 根据台湾的一项研究，在 2000 年至 2008 年期间，NTM-LD 从每年每 100,000 名住院患者中有 1.26 例增加到 7.94 例 [2]。 这种增加的原因尚不清楚，但可能与获得性免疫功能低下人群数量的增加和分枝杆菌培养技术的进步有关 [4-7]。 在台湾的 NTM 感染中，最常分离出鸟分​​枝杆菌复合体 (MAC) 和脓肿分枝杆菌 (MAB) [2]。

早期诊断和确认真正的 NTM-LD 的困难 然而，NTM 在环境中无处不在，因此相关性（真正的疾病患者数量与疾病患者或只是定植患者的数量之比）远低于 100%，并且在不同的 NTM 中存在差异物种。 例如，先前的研究表明，堪萨斯分枝杆菌和 MAC 的存在与临床相关性分别约为 47~70% 和 35~42% [8-9]。 对于世界范围内新兴病原体 MAB，相关性为 33%[9]。 根据美国胸科学会制定的当代 NTM 指南，NTM 肺部感染的诊断依据包括呼吸道标本微生物学和临床表现以及影像学表现在内的多项标准 [1]。 在微生物学标准中，需要在一年内对同一 NTM 物种进行两次或更多次痰分枝杆菌培养阳性。

由于 NTM 定植在呼吸道并不少见，因此诊断真性肺部 NTM 感染是临床实践中的一大挑战。 实际上，分枝杆菌的微生物学检测既不及时也不有效。 分枝杆菌培养非常耗时，即使它是目前微生物鉴定的金标准，也需要数周才能等待结果 [10]。 聚合酶链反应等核酸扩增方法无法区分真正的 NTM 感染和单纯的定植，因为微生物在这两种情况下都存在 [11]。

早期诊断并开始治疗 NTM 感染很重要，因为 NTM 肺部感染在重症监护室或未接受早期适当治疗的患者中可能是快速致死性感染 [6]。 此外，在台湾最常见的MAC或MAB对大多数抗结核药物都有耐药性。 因此，应该开发更快速和准确的诊断测试 [1-2, 6] 先天免疫对 NTM-LD 诊断的帮助 身体炎症标志物代表我们的免疫反应，将是区分真正的分枝杆菌肺部感染和定植的指标而第一组分枝杆菌培养物生长 NTM [12-15]。 干扰素-γ 和肿瘤坏死因子-α 在分枝杆菌感染的保护性免疫中起着关键作用 [16-17]。 这些反应与对分枝杆菌感染至关重要的 Toll 样受体 2 (TLR2) 的结合有关 [18]。 然而，尚未评估 NTM 感染和定植患者之间的 TLR-2 表达。 根据γ-干扰素释放试验在结核病检测中的成功应用[19]，我们了解到特异性免疫反应有助于诊断分枝杆菌感染。 因此，我们关注 MAC 或 MAB 肺病患者中 TLR-2 和相关下游细胞因子的表达，这在 NTM 感染中占了大部分 [2]。

我们诊断研究的设计 为了研究宿主免疫对诊断 NTM 肺部感染的帮助，我们首先比较了 MAC 或 MAB 感染患者和定植受试者中 TLR-2 和下游细胞因子的基线表达。 然后，我们使用分枝杆菌（MAC 或 MAB）与患者的外周血单核细胞进行共培养，进行体外刺激试验。 刺激试验后将检查TLR-2表达和细胞因子激活。 然后我们分析了 NTM-LD 和定植之间的表达差异。