Estabelecendo um teste de diagnóstico para infecção pulmonar por micobactéria não tuberculosa usando teste de estimulação de antígeno de micobactéria não tuberculosa: da base imunológica, configuração padronizada à validação

O aumento da infecção pulmonar por micobactérias não tuberculosas A infecção pulmonar por micobactérias não tuberculosas (NTM-LD) torna-se uma importante preocupação clínica [1] porque a taxa de infecção por MNT aumentou nos últimos dez anos [2-3]. De acordo com um estudo em Taiwan, a NTM-LD aumentou de 1,26 para 7,94 por 100.000 pacientes internados/ano durante 2000 a 2008 [2]. As razões para esse aumento não são claras, mas podem estar relacionadas ao crescimento do número de imunocomprometidos adquiridos e aos avanços da técnica de cultura de micobactérias [4-7]. Entre as infecções por MNT em Taiwan, o complexo Mycobacterium avium (MAC) e M. abscessus (MAB) foram isolados com mais frequência [2].

A dificuldade em diagnosticar precocemente e confirmar o verdadeiro NTM-LD No entanto, o NTM existe no ambiente de forma ubíqua, de modo que a relevância (número real de pacientes com doença sobre o número de pacientes com doença ou apenas colonização) é muito inferior a 100% e varia em diferentes MNT espécies. Por exemplo, estudos anteriores mostraram que a presença de M. kansasii e MAC teve uma relevância clínica em torno de 47~70% e 35~42%, respectivamente [8-9]. Já o MAB que é patógeno emergente mundialmente, tem uma relevância de 33% [9]. De acordo com as diretrizes contemporâneas de MNT estabelecidas pela sociedade torácica americana, a infecção pulmonar por MNT é diagnosticada por vários critérios, incluindo microbiologia da amostra respiratória e achados clínicos, bem como achados radiográficos [1]. Nos critérios de microbiologia, são necessários dois ou mais conjuntos de cultura micobacteriana de escarro positiva para a mesma espécie de MNT em um ano.

Como a colonização por MNT não é incomum no trato respiratório, o diagnóstico da verdadeira infecção pulmonar por MNT é um grande desafio na prática clínica. Na verdade, os testes de microbiologia para micobactérias não são oportunos nem eficientes. A cultura de micobactérias é demorada, que precisou de semanas para aguardar os resultados, mesmo sendo o padrão ouro atual para identificação de microrganismos [10]. O método de amplificação de ácidos nucleicos, como a reação em cadeia da polimerase, não pode discriminar a verdadeira infecção por MNT e apenas a colonização porque o microrganismo está presente em ambas as situações [11].

Diagnosticar precocemente e iniciar o tratamento da infecção por MNT é importante porque a infecção pulmonar por MNT pode ser uma infecção letal rápida em unidade de terapia intensiva ou em pacientes que não receberam tratamento adequado precoce [6]. Além disso, MAC ou MAB, que são mais comuns em Taiwan, são resistentes à maioria dos regimes antituberculose. Portanto, testes diagnósticos mais rápidos e precisos devem ser desenvolvidos [1-2, 6] A ajuda da imunidade inata no diagnóstico de MNT-LD enquanto o primeiro conjunto de cultura micobacteriana cresceu NTM [12-15]. Tanto o interferon-gama quanto o fator-alfa de necrose tumoral desempenham papéis críticos na imunidade protetora contra infecções micobacterianas [16-17]. Essas respostas estão ligadas ao envolvimento do receptor Toll-like 2 (TLR2), que é crítico para a infecção micobacteriana [18]. No entanto, a expressão de TLR-2 não foi avaliada entre pacientes com infecção e colonização por MNT. De acordo com o sucesso da aplicação do ensaio de liberação de interferon-gama para detecção de tuberculose [19], entendemos que a resposta imune específica é útil para diagnosticar a infecção micobacteriana. Portanto, focamos na expressão de TLR-2 e citocinas a jusante associadas em nossos pacientes com doença pulmonar MAC ou MAB, que responde pela maior parte da infecção por MNT [2].

O desenho em nosso estudo para diagnóstico A fim de investigar a ajuda do hospedeiro imune no diagnóstico de infecção pulmonar por MNT, comparamos inicialmente a expressão basal de TLR-2 e citocinas a jusante nos pacientes infectados por MAC ou MAB e indivíduos colonizados. Em seguida, realizamos um teste de estimulação in vitro utilizando micobactérias (MAC ou MAB) para co-cultivo com células mononucleares do sangue periférico dos pacientes. A expressão de TLR-2 e a ativação de citocinas serão examinadas após o teste de estimulação. Em seguida, analisamos a diferença de expressão entre NTM-LD e colonização.