Diagnosztikai teszt létrehozása nem tuberkulózisos mikobaktérium-tüdőfertőzésre nem tuberkulózus mikobaktérium-antigénstimulációs teszt segítségével: az immunrendszertől a szabványos beállítástól a validálásig

A non-tuberculous mycobacteria tüdőfertőzés növekedése A nontuberculous mycobacteria tüdőfertőzés (NTM-LD) fontos klinikai aggodalomra ad okot [1], mivel az NTM fertőzések aránya az elmúlt tíz évben nőtt [2-3]. Egy tajvani tanulmány szerint az NTM-LD 100 000 fekvőbeteg/év 1,26-ról 7,94-re nőtt 2000 és 2008 között [2]. Ennek a növekedésnek az okai nem világosak, de összefügghetnek a szerzett immunhiányos populáció számának növekedésével és a mikobaktérium-tenyésztési technika fejlődésével [4-7]. A tajvani NTM-fertőzések közül a Mycobacterium avium komplexet (MAC) és a M. abscessust (MAB) izolálták leggyakrabban [2].

A valódi NTM-LD korai diagnosztizálásának és megerősítésének nehézségei Az NTM azonban mindenütt jelen van a környezetben, így a relevancia (a betegségben szenvedő betegek valós száma a betegségben szenvedő vagy csak kolonizációs betegek számához képest) jóval kevesebb, mint 100%, és a különböző NTM-ekben változó. faj. Például korábbi tanulmányok kimutatták, hogy a M. kansasii és a MAC jelenléte 47-70%, illetve 35-42% körüli klinikai jelentőséggel bír [8-9]. A világszerte feltörekvő kórokozónak számító MAB 33%-os relevanciája [9]. Az amerikai mellkasi társadalom által felállított kortárs NTM irányelvek szerint az NTM tüdőfertőzést többféle kritérium alapján diagnosztizálják, beleértve a légúti minták mikrobiológiáját és a klinikai leleteket, valamint a radiográfiai leleteket [1]. A mikrobiológiai kritériumok szerint egy éven belül két vagy több pozitív köpet-mikobaktérium-tenyészetre van szükség ugyanazon NTM-fajhoz.

Mivel az NTM kolonizáció nem ritka a légutakban, a valódi pulmonális NTM-fertőzés diagnosztizálása nagy kihívást jelent a klinikai gyakorlatban. Valójában a mikobaktériumok kimutatására irányuló mikrobiológiai tesztek sem nem időszerűek, sem nem hatékonyak. A mikobaktériumok tenyésztése időigényes, és hetekig kellett várni az eredményekre, annak ellenére, hogy ez a mikroorganizmusok azonosításának jelenlegi aranystandardja [10]. A nukleinsav-amplifikációs módszer, például a polimeráz láncreakció nem tudta megkülönböztetni a valódi NTM-fertőzést és kizárólag a kolonizációt, mivel a mikroorganizmus mindkét helyzetben jelen van [11].

Az NTM-fertőzés korai diagnosztizálása, majd kezelésének megkezdése azért fontos, mert az NTM-tüdőfertőzés gyors halálos fertőzés lehet az intenzív osztályon, vagy olyan betegeknél, akik nem részesültek korai megfelelő kezelésben [6]. Ezenkívül a Tajvanon legelterjedtebb MAC vagy MAB rezisztens a legtöbb tuberkulózis elleni kezelésre. Ezért gyorsabb és pontosabb diagnosztikai tesztet kell kidolgozni [1-2, 6] A veleszületett immunitás segítsége az NTM-LD diagnosztizálásában A szervezet gyulladásos markere, amely az immunválaszunkat reprezentálja, indikátora lenne a valódi mikobakteriális tüdőfertőzés és a kolonizáció megkülönböztetésének. míg az első mycobacterium tenyészetben NTM nőtt [12-15]. Mind az interferon-gamma, mind a tumor nekrózis faktor-alfa kritikus szerepet játszik a mikobakteriális fertőzésekkel szembeni védő immunitásban [16-17]. Ezek a válaszok a Toll-like receptor 2 (TLR2) bekapcsolódásához kapcsolódnak, amely kritikus a mikobakteriális fertőzésben [18]. A TLR-2 expresszióját azonban nem értékelték az NTM-fertőzött és kolonizációs betegek között. A tuberkulózis kimutatására szolgáló interferon-gamma felszabadulási vizsgálat [19] sikeres alkalmazásának megfelelően megértjük, hogy a specifikus immunválasz hasznos a mikobakteriális fertőzés diagnosztizálásában. Ezért a TLR-2 és a kapcsolódó downstream citokinek expressziójára összpontosítunk MAC- vagy MAB-tüdőbetegségben szenvedő pácienseinkben, amelyek a legtöbb NTM-fertőzést okozzák [2].

Vizsgálatunk diagnosztikai terve Annak érdekében, hogy megvizsgáljuk a gazdaszervezet immunrendszerének segítségét az NTM tüdőfertőzés diagnosztizálásában, először összehasonlítjuk a TLR-2 és a downstream citokinek kiindulási expresszióját MAC vagy MAB fertőzött betegekben és kolonizált alanyokban. Ezután in vitro stimulációs tesztet végzünk mikobaktériumok (MAC vagy MAB) felhasználásával a betegek perifériás vérének mononukleáris sejtjeivel való együtttenyésztéshez. A TLR-2 expresszióját és a citokinek aktiválását a stimulációs teszt után vizsgáljuk. Ezután elemezzük az NTM-LD és a kolonizáció közötti expressziós különbséget.