Etablering af en diagnostisk test for ikke-tuberkuløs mykobakterie-lungeinfektion ved hjælp af ikke-tuberkuløs mykobakterie-antigenstimuleringstest: Fra immunbase, standardiseret opsætning til validering

Stigningen af ​​ikke-tuberkuløs mykobakterie-lungeinfektion Nontuberkuløs mykobakterie-lungeinfektion (NTM-LD) bliver et vigtigt klinisk problem [1], fordi antallet af NTM-infektioner er steget i løbet af de sidste ti år [2-3]. Ifølge en undersøgelse i Taiwan steg NTM-LD fra 1,26 til 7,94 pr. 100.000 indlagte patienter/år i løbet af 2000 til 2008 [2]. Årsagerne til denne stigning er ikke umiddelbart klare, men kan være relateret til væksten i antallet af den erhvervede immunkompromitterede population og fremskridt inden for teknik til mykobakteriel kultur [4-7]. Blandt NTM-infektionen i Taiwan blev Mycobacterium avium complex (MAC) og M. abscessus (MAB) oftest isoleret [2].

Vanskeligheden ved tidlig diagnosticering og bekræftelse af ægte NTM-LD Imidlertid findes NTM i miljøet allestedsnærværende, så relevansen (sandt sygdomspatientantal over antallet af patienter med sygdom eller blot kolonisering) er langt mindre end 100 % og varieret i forskellige NTM arter. For eksempel har tidligere undersøgelser vist, at tilstedeværelsen af ​​M. kansasii og MAC havde en klinisk relevans omkring henholdsvis 47~70% og 35~42% [8-9]. Hvad angår MAB, som er ved at opstå patogen på verdensplan, har en relevans på 33% [9]. I henhold til nutidige NTM-retningslinjer etableret af det amerikanske thoraxsamfund diagnosticeres NTM-lungeinfektion ud fra flere kriterier, herunder mikrobiologi af respiratoriske prøver og kliniske fund samt radiografiske fund [1]. I mikrobiologiske kriterier er der behov for to eller flere sæt positiv sputum-mycobakteriel kultur for den samme NTM-art inden for et år.

Fordi NTM-kolonisering ikke er ualmindeligt i luftvejene, er diagnose af ægte lunge NTM-infektion en stor udfordring i klinisk praksis. Faktisk er mikrobiologiske tests for mykobakterier hverken rettidige eller effektive. Mycobakteriel kultur er tidskrævende, hvilket tog uger at vente på resultaterne, selvom det er den nuværende guldstandard for mikroorganisme-identifikation [10]. Nukleinsyreamplifikationsmetoden såsom polymerasekædereaktion kunne ikke skelne mellem ægte NTM-infektion og udelukkende kolonisering, fordi mikroorganismen er til stede i begge situationer [11].

Det er vigtigt at tidligt diagnosticere og derefter påbegynde behandling af NTM-infektion, fordi NTM-lungeinfektion kan være hurtig dødelig infektion på intensivafdeling eller hos patienter, der ikke havde modtaget tidlig korrekt behandling [6]. Derudover er MAC eller MAB, som er mest almindelige i Taiwan, resistente over for de fleste anti-tuberkulose regimer. Derfor bør der udvikles en hurtigere og mere præcis diagnostisk test [1-2, 6] Hjælp fra medfødt immunitet til diagnosticering af NTM-LD. Den kropsinflammatoriske markør, repræsenterer vores immunrespons, ville være en indikator for at differentiere ægte mykobakteriel lungeinfektion fra kolonisering mens det første sæt af mykobakteriel kultur voksede NTM [12-15]. Både interferon-gamma og tumornekrosefaktor-alfa spiller kritiske roller i beskyttende immunitet over for mykobakterielle infektioner [16-17]. Disse responser er forbundet med engagement af Toll-like receptor 2 (TLR2), som er kritisk for mykobakteriel infektion [18]. TLR-2-ekspressionen er dog ikke blevet evalueret mellem patienter med NTM-infektion og kolonisering. Ifølge succesen med anvendelsen af ​​interferon-gamma-frigivelsesassay til tuberkulosedetektion [19], forstår vi, at det specifikke immunrespons er nyttigt til at diagnosticere mycobakteriel infektion. Vi fokuserer derfor på ekspressionen af ​​TLR-2 og associerede nedstrøms cytokiner hos vores patienter med MAC eller MAB lungesygdom, som tegner sig mest for NTM-infektion [2].

Designet i vores undersøgelse til diagnose For at undersøge hjælpen fra værtsimmun til diagnosticering af NTM-lungeinfektion, sammenligner vi indledningsvis basislinjeekspressionen af ​​TLR-2 og nedstrøms cytokiner i de MAC- eller MAB-inficerede patienter og koloniserede forsøgspersoner. Derefter udfører vi en in vitro-stimuleringstest ved hjælp af mykobakterier (MAC eller MAB) til samdyrkning med perifere blod mononukleære celler fra patienter. TLR-2-ekspressionen og cytokinaktiveringen vil blive undersøgt efter stimulationstesten. Vi analyserer derefter ekspressionsforskellen mellem NTM-LD og kolonisering.