Ustanowienie testu diagnostycznego na zakażenie płuc prątkami niegruźliczymi przy użyciu testu stymulacji antygenem prątków niegruźliczych: od podstawy odporności, standaryzowana konfiguracja do walidacji

Wzrost zakażeń płuc wywołanych przez prątki niegruźlicze Zakażenia płuc wywołane przez prątki niegruźlicze (NTM-LD) stają się ważnym problemem klinicznym [1], ponieważ częstość zakażeń NTM wzrosła w ciągu ostatnich dziesięciu lat [2-3]. Według badań przeprowadzonych na Tajwanie, NTM-LD wzrosła z 1,26 do 7,94 na 100 000 pacjentów rocznie w latach 2000-2008 [2]. Przyczyny tego wzrostu nie są od razu jasne, ale mogą być związane ze wzrostem liczby nabytych populacji z obniżoną odpornością i postępem techniki hodowli prątków [4-7]. Spośród infekcji NTM na Tajwanie najczęściej izolowano Mycobacterium avium complex (MAC) i M. abscessus (MAB) [2].

Trudność we wczesnym rozpoznaniu i potwierdzeniu prawdziwej NTM-LD Jednak NTM występuje wszechobecnie w środowisku, więc znaczenie (rzeczywista liczba pacjentów z chorobą w porównaniu z liczbą pacjentów z chorobą lub samą kolonizacją) jest znacznie mniejsze niż 100% i różni się w różnych NTM gatunek. Na przykład, poprzednie badania wykazały, że obecność M. kansasii i MAC miała znaczenie kliniczne odpowiednio około 47-70% i 35-42% [8-9]. Jeśli chodzi o MAB, który jest nowym patogenem na całym świecie, ma znaczenie 33% [9]. Zgodnie ze współczesnymi wytycznymi NTM opracowanymi przez American Thoracic Society, zakażenie płuc NTM rozpoznaje się na podstawie wielu kryteriów, w tym mikrobiologii próbki oddechowej i obrazu klinicznego, jak również obrazu radiologicznego [1]. W kryteriach mikrobiologicznych potrzebne są dwa lub więcej zestawów dodatnich hodowli prątków plwociny dla tego samego gatunku NTM w ciągu jednego roku.

Ponieważ kolonizacja NTM nie jest rzadkością w drogach oddechowych, rozpoznanie prawdziwego zakażenia NTM w płucach stanowi duże wyzwanie w praktyce klinicznej. W rzeczywistości testy mikrobiologiczne na obecność prątków nie są ani wykonywane na czas, ani wydajne. Hodowla prątków jest czasochłonna, co wymaga tygodni oczekiwania na wyniki, mimo że jest to obecnie złoty standard identyfikacji mikroorganizmów [10]. Metoda amplifikacji kwasu nukleinowego, taka jak reakcja łańcuchowa polimerazy, nie mogła rozróżnić prawdziwej infekcji NTM i samej kolonizacji, ponieważ mikroorganizm jest obecny w obu sytuacjach [11].

Wczesne rozpoznanie, a następnie rozpoczęcie leczenia zakażenia NTM jest ważne, ponieważ zakażenie płucne NTM może być szybką śmiertelną infekcją na oddziale intensywnej terapii lub u pacjentów, którzy nie otrzymali odpowiednio wcześnie odpowiedniego leczenia [6]. Ponadto najczęściej występujące na Tajwanie MAC lub MAB są oporne na większość schematów przeciwgruźliczych. W związku z tym należy opracować szybszy i dokładniejszy test diagnostyczny [1-2, 6] Pomoc wrodzonej odporności w diagnozowaniu NTM-LD Marker stanu zapalnego organizmu, reprezentujący naszą odpowiedź immunologiczną, byłby wskaźnikiem różnicowania prawdziwego mykobakteryjnego zakażenia płuc od kolonizacji podczas gdy pierwszy zestaw hodowli prątków wyrósł na NTM [12-15]. Zarówno interferon-gamma, jak i czynnik martwicy nowotworu-alfa odgrywają kluczową rolę w ochronnej odporności na infekcje mykobakteryjne [16-17]. Odpowiedzi te są powiązane z zaangażowaniem receptora Toll-podobnego 2 (TLR2), który ma kluczowe znaczenie dla zakażenia mykobakteryjnego [18]. Jednak ekspresja TLR-2 nie została oceniona między pacjentami z zakażeniem NTM a kolonizacją. Biorąc pod uwagę powodzenie zastosowania testu uwalniania interferonu gamma do wykrywania gruźlicy [19], rozumiemy, że specyficzna odpowiedź immunologiczna jest pomocna w diagnozowaniu zakażenia mykobakteryjnego. Dlatego skupiamy się na ekspresji TLR-2 i powiązanych cytokin w dół u naszych pacjentów z chorobą płuc MAC lub MAB, która odpowiada za większość infekcji NTM [2].

Projekt naszego badania do diagnozy W celu zbadania pomocy odporności gospodarza w diagnozowaniu zakażenia płuc NTM, początkowo porównujemy wyjściową ekspresję TLR-2 i dalszych cytokin u pacjentów zakażonych MAC lub MAB i osobników skolonizowanych. Następnie wykonujemy test stymulacji in vitro z użyciem mykobakterii (MAC lub MAB) do współhodowli z jednojądrzastymi komórkami krwi obwodowej pacjentów. Ekspresja TLR-2 i aktywacja cytokin będą badane po teście stymulacji. Następnie analizujemy różnicę ekspresji między NTM-LD a kolonizacją.