Establecimiento de una prueba de diagnóstico para la infección pulmonar por micobacterias no tuberculosas mediante la prueba de estimulación con antígenos de micobacterias no tuberculosas: desde la base inmunitaria, la configuración estandarizada hasta la validación

El aumento de la infección pulmonar por micobacterias no tuberculosas La infección pulmonar por micobacterias no tuberculosas (NTM-LD) se convierte en una preocupación clínica importante [1] porque la tasa de infección por MNT ha aumentado en los últimos diez años [2-3]. Según un estudio en Taiwán, NTM-LD aumentó de 1,26 a 7,94 por 100 000 pacientes hospitalizados/año durante 2000 a 2008 [2]. Las razones de este aumento no están claras, pero podrían estar relacionadas con el crecimiento en el número de personas inmunocomprometidas adquiridas y los avances de la técnica para el cultivo de micobacterias [4-7]. Entre las infecciones por NTM en Taiwán, Mycobacterium avium complex (MAC) y M. abscessus (MAB) fueron las más frecuentemente aisladas [2].

La dificultad en el diagnóstico temprano y la confirmación de las NTM-LD verdaderas Sin embargo, las NTM existen en el medio ambiente de manera ubicua, por lo que la relevancia (número de pacientes con enfermedad real sobre el número de pacientes con enfermedad o solo colonización) es mucho menor al 100% y varía en diferentes NTM. especies. Por ejemplo, estudios previos han demostrado que la presencia de M. kansasii y MAC tiene una relevancia clínica de alrededor del 47~70 % y del 35~42 %, respectivamente [8-9]. En cuanto a MAB, que es un patógeno emergente a nivel mundial, tiene una relevancia del 33% [9]. De acuerdo con las pautas contemporáneas de NTM establecidas por la sociedad torácica estadounidense, la infección pulmonar por NTM se diagnostica mediante múltiples criterios que incluyen la microbiología de la muestra respiratoria y los hallazgos clínicos, así como los hallazgos radiográficos [1]. Según los criterios de microbiología, se necesitan dos o más conjuntos de cultivo de micobacterias de esputo positivo para la misma especie de MNT en el plazo de un año.

Debido a que la colonización por MNT no es infrecuente en las vías respiratorias, el diagnóstico de una verdadera infección pulmonar por MNT es un gran desafío en la práctica clínica. En realidad, las pruebas de microbiología para micobacterias no son ni oportunas ni eficientes. El cultivo de micobacterias requiere mucho tiempo, por lo que se necesitaron semanas para esperar los resultados a pesar de que es el estándar de oro actual para la identificación de microorganismos [10]. El método de amplificación de ácidos nucleicos, como la reacción en cadena de la polimerasa, no pudo discriminar la verdadera infección por NTM y únicamente la colonización porque el microorganismo está presente en ambas situaciones [11].

Es importante diagnosticar precozmente y luego iniciar el tratamiento de la infección por MNT porque la infección pulmonar por MNT puede ser una infección letal rápida en la unidad de cuidados intensivos o en pacientes que no han recibido el tratamiento adecuado a tiempo [6]. Además, MAC o MAB, que son los más comunes en Taiwán, son resistentes a la mayoría de los regímenes antituberculosos. Por lo tanto, se debe desarrollar una prueba diagnóstica más rápida y precisa [1-2, 6] La ayuda de la inmunidad innata en el diagnóstico de NTM-LD El marcador inflamatorio corporal, representa nuestra respuesta inmune, sería un indicador para diferenciar la infección pulmonar micobacteriana verdadera de la colonización mientras que el primer conjunto de cultivo de micobacterias creció NTM [12-15]. Tanto el interferón-gamma como el factor de necrosis tumoral alfa desempeñan un papel fundamental en la inmunidad protectora frente a las infecciones por micobacterias [16-17]. Estas respuestas están relacionadas con la participación del receptor tipo Toll 2 (TLR2), que es fundamental para la infección por micobacterias [18]. Sin embargo, la expresión de TLR-2 no ha sido evaluada entre pacientes con infección y colonización por NTM. De acuerdo con el éxito de la aplicación del ensayo de liberación de interferón-gamma para la detección de tuberculosis [19], entendemos que la respuesta inmunitaria específica es útil para diagnosticar la infección por micobacterias. Por lo tanto, nos centramos en la expresión de TLR-2 y las citocinas posteriores asociadas en nuestros pacientes con enfermedad pulmonar MAC o MAB, que representa la mayor parte de la infección por NTM [2].

El diseño de nuestro estudio para el diagnóstico Con el fin de investigar la ayuda de la inmunidad del huésped en el diagnóstico de la infección pulmonar por NTM, inicialmente comparamos la expresión inicial de TLR-2 y las citocinas aguas abajo en los pacientes infectados con MAC o MAB y los sujetos colonizados. Luego, realizamos una prueba de estimulación in vitro usando micobacterias (MAC o MAB) para co-cultivar con células mononucleares de sangre periférica de pacientes. La expresión de TLR-2 y la activación de citoquinas se examinarán después de la prueba de estimulación. Luego analizamos la diferencia de expresión entre NTM-LD y la colonización.