Создание диагностического теста для инфекции легких, вызванной нетуберкулезными микобактериями, с использованием теста на стимуляцию антигена нетуберкулезных микобактерий: от иммунной базы, стандартизированной установки до валидации

Увеличение нетуберкулезной микобактериальной легочной инфекции Нетуберкулезная микобактериальная легочная инфекция (НТМ-ЛД) становится важной клинической проблемой [1], поскольку частота инфицирования НТМ увеличилась за последние десять лет [2-3]. Согласно исследованию, проведенному в Тайване, с 2000 по 2008 год NTM-LD увеличилась с 1,26 до 7,94 на 100 000 стационарных пациентов в год [2]. Причины этого увеличения не совсем ясны, но могут быть связаны с ростом числа людей с приобретенным иммунодефицитом и развитием техники культивирования микобактерий [4-7]. Среди НТМ-инфекции на Тайване наиболее часто выделяли Mycobacterium avium complex (MAC) и M. abscessus (MAB) [2].

Трудность ранней диагностики и подтверждения истинного NTM-LD. Тем не менее, NTM встречается в окружающей среде повсеместно, поэтому релевантность (истинное число пациентов с заболеванием по сравнению с числом пациентов с заболеванием или просто колонизацией) намного меньше 100% и варьируется в зависимости от различных NTM. разновидность. Например, предыдущие исследования показали, что наличие M. kansasii и MAC имело клиническую значимость около 47–70% и 35–42% соответственно [8–9]. Что касается МАБ, являющегося новым возбудителем во всем мире, его актуальность составляет 33% [9]. В соответствии с современными рекомендациями по НТМ, установленными Американским торакальным обществом, легочная инфекция НТМ диагностируется по нескольким критериям, включая микробиологию образцов из дыхательных путей и клинические данные, а также рентгенологические данные [1]. В микробиологических критериях требуется два или более набора положительных культур микобактерий мокроты для одного и того же вида НТМ в течение одного года.

Поскольку колонизация NTM не является редкостью в дыхательных путях, диагностика истинной легочной инфекции NTM представляет собой серьезную проблему в клинической практике. На самом деле микробиологические тесты на микобактерии не своевременны и неэффективны. Посев микобактерий требует много времени, поэтому для ожидания результатов требовались недели, несмотря на то, что в настоящее время это золотой стандарт для идентификации микроорганизмов [10]. Метод амплификации нуклеиновых кислот, такой как полимеразная цепная реакция, не может отличить истинную инфекцию НТМ от колонизации, поскольку микроорганизм присутствует в обеих ситуациях [11].

Ранняя диагностика и последующее лечение НТМ-инфекции имеет важное значение, поскольку НТМ-легочная инфекция может привести к быстрой летальной инфекции в отделении интенсивной терапии или у пациентов, не получивших надлежащего лечения на раннем этапе [6]. Кроме того, MAC или MAB, наиболее распространенные на Тайване, устойчивы к большинству противотуберкулезных схем. Следовательно, необходимо разработать более быстрый и точный диагностический тест [1-2, 6]. Помощь врожденного иммунитета в диагностике NTM-LD Маркер воспаления организма, представляющий наш иммунный ответ, может быть индикатором для дифференциации истинной микобактериальной легочной инфекции от колонизации в то время как первый набор микобактериальной культуры выращивал НТМ [12-15]. И интерферон-гамма, и фактор некроза опухоли-альфа играют решающую роль в защитном иммунитете к микобактериальным инфекциям [16-17]. Эти ответы связаны с участием Toll-подобного рецептора 2 (TLR2), который имеет решающее значение для микобактериальной инфекции [18]. Однако экспрессия TLR-2 не оценивалась между пациентами с инфекцией NTM и колонизацией. Исходя из успеха применения анализа высвобождения гамма-интерферона для выявления туберкулеза [19], мы понимаем, что специфический иммунный ответ помогает диагностировать микобактериальную инфекцию. Поэтому мы фокусируемся на экспрессии TLR-2 и связанных с ним нижестоящих цитокинов у наших пациентов с заболеванием легких MAC или MAB, на которое приходится большая часть инфекции NTM [2].

Дизайн нашего исследования для диагностики Чтобы исследовать помощь иммунной системы хозяина в диагностике легочной инфекции NTM, мы сначала сравниваем исходную экспрессию TLR-2 и нижестоящих цитокинов у пациентов, инфицированных MAC или MAB, и у колонизированных субъектов. Затем мы проводим тест стимуляции in vitro с использованием микобактерий (MAC или MAB) для совместного культивирования с мононуклеарными клетками периферической крови пациентов. Экспрессию TLR-2 и активацию цитокинов будут исследовать после стимуляционного теста. Затем мы анализируем разницу в выражении между NTM-LD и колонизацией.