Zavedení diagnostického testu pro netuberkulózní mykobakteriální plicní infekci pomocí netuberkulózního mykobakteriálního antigenního stimulačního testu: od imunitní báze, standardizovaného nastavení až po validaci

Nárůst plicních infekcí netuberkulózními mykobakteriemi Netuberkulózní mykobakteriální plicní infekce (NTM-LD) se stává důležitým klinickým problémem [1], protože míra infekce NTM se za posledních deset let zvýšila [2–3]. Podle studie na Tchaj-wanu se NTM-LD během let 2000 až 2008 zvýšil z 1,26 na 7,94 na 100 000 hospitalizovaných pacientů/rok [2]. Důvody tohoto nárůstu nejsou zcela jasné, ale mohly by souviset s nárůstem počtu získané imunokompromitované populace a pokroky v technice kultivace mykobakterií [4–7]. Z infekce NTM na Tchaj-wanu byly nejčastěji izolovány Mycobacterium avium complex (MAC) a M. abscessus (MAB) [2].

Obtížnost včasné diagnostiky a potvrzení skutečné NTM-LD NTM však existuje v prostředí všudypřítomně, takže relevance (počet pacientů se skutečným onemocněním nad počtem pacientů s onemocněním nebo pouze kolonizací) je mnohem menší než 100 % a liší se v různých NTM druh. Předchozí studie například ukázaly, že přítomnost M. kansasii a MAC měla klinickou relevanci kolem 47–70 %, respektive 35–42 % [8–9]. Pokud jde o MAB, který se celosvětově objevuje jako patogen, má relevanci 33 % [9]. Podle současných doporučení NTM zavedených americkou hrudní společností je plicní infekce NTM diagnostikována podle mnoha kritérií včetně mikrobiologie respiračního vzorku a klinických nálezů a také rentgenových nálezů [1]. V mikrobiologických kritériích jsou zapotřebí dvě nebo více sad pozitivní mykobakteriální kultury ve sputu pro stejný druh NTM během jednoho roku.

Protože kolonizace NTM není v respiračním traktu neobvyklá, diagnostika skutečné plicní NTM infekce je v klinické praxi velkou výzvou. Ve skutečnosti mikrobiologické testy na mykobakterie nejsou ani včasné, ani účinné. Kultivace mykobakterií je časově náročná, což vyžadovalo týdny na čekání na výsledky, přestože jde o současný zlatý standard pro identifikaci mikroorganismů [10]. Metoda amplifikace nukleové kyseliny, jako je polymerázová řetězová reakce, nemohla rozlišit skutečnou infekci NTM a pouze kolonizaci, protože mikroorganismus je přítomen v obou situacích [11].

Včasná diagnóza a následné zahájení léčby NTM infekce je důležité, protože NTM plicní infekce může být rychlou letální infekcí na jednotce intenzivní péče nebo u pacientů, kteří nedostali včasnou řádnou léčbu [6]. Navíc MAC nebo MAB, které jsou nejběžnější na Tchaj-wanu, jsou odolné vůči většině antituberkulózních režimů. Proto by měl být vyvinut rychlejší a přesnější diagnostický test [1-2, 6] Pomoc vrozené imunity při diagnostice NTM-LD Tělesný zánětlivý marker, který představuje naši imunitní odpověď, by byl indikátorem pro odlišení skutečné mykobakteriální plicní infekce od kolonizace. zatímco první sada mykobakteriálních kultur rostla NTM [12–15]. Jak interferon-gama, tak tumor nekrotizující faktor-alfa hrají zásadní roli v ochranné imunitě vůči mykobakteriálním infekcím [16–17]. Tyto reakce jsou spojeny se zapojením Toll-like receptoru 2 (TLR2), který je kritický pro mykobakteriální infekci [18]. Exprese TLR-2 však nebyla hodnocena mezi pacienty s infekcí NTM a kolonizací. Podle úspěšnosti aplikace testu uvolňování interferonu-gama pro detekci tuberkulózy [19] jsme pochopili, že specifická imunitní odpověď je užitečná pro diagnostiku mykobakteriální infekce. Zaměřujeme se proto na expresi TLR-2 a souvisejících downstream cytokinů u našich pacientů s plicním onemocněním MAC nebo MAB, které tvoří většinu infekcí NTM [2].

Návrh naší studie pro diagnostiku Abychom prozkoumali pomoc imunitního hostitele při diagnostice NTM plicní infekce, nejprve porovnáme výchozí expresi TLR-2 a downstream cytokinů u pacientů a kolonizovaných pacientů infikovaných MAC nebo MAB. Poté provedeme in vitro stimulační test pomocí mykobakterií (MAC nebo MAB) pro kokultivaci s mononukleárními buňkami periferní krve pacientů. Exprese TLR-2 a aktivace cytokinů budou zkoumány po stimulačním testu. Poté analyzujeme rozdíl v expresi mezi NTM-LD a kolonizací.