早发性冠状动脉疾病 - 临床和分子遗传学方面 (PIHS)

目的 研究第 1 部分：量化丹麦中部地区极早发 CAD 患者动脉粥样硬化危险因素的发生率，并调查根据国家指南对患者进行治疗的程度。

研究第 2 部分：调查已确诊的极早发 CAD 患者的中年一级亲属中 CAD 的发生情况。

研究第 3 部分：使用外显子组测序分析评估 CAD 高患病率家庭中可能的遗传“风险因素”。

假设 假设 1：极早发 CAD 患者具有可改变的危险因素，相对于当前的国家指南，这些因素没有得到充分治疗。

假设 2：极早发 CAD 的发生与疾病的家族积累有关。

假设 3：在选定的具有表型严重早产 CAD 的家族中使用外显子组测序将识别致病的遗传变异。

方法研究第 1 部分。将从西丹麦心脏登记处 (VDHD) 中选择在 40 岁之前接受过经皮冠状动脉介入治疗 (PCI) 或冠状动脉搭桥手术 (CABG) 的早发 CAD 患者。 具体而言，将招募 2007 年 1 月 1 日至 2013 年 12 月 31 日期间在 Skejby 的奥胡斯大学医院 (AUH) 治疗心肌梗塞 (MI)、稳定型或不稳定型心绞痛的患者，并评估登记的风险因素的发生情况（样本表示应用程序。 每年 170 名患者）。 在获得知情同意后，他们将参与本研究。 参与者将在 Dep. 的心脏门诊接受采访。心脏病学，AUH，Skejby。 将收集以下有关心血管危险因素的信息；动脉粥样硬化家族史（将进行系谱分析并确定诊断为 CVD 的病例）、既往病史（即 高血压、血脂异常、糖尿病、慢性肾病、血管疾病）、吸烟状况和包年数、饮酒量和血管症状（即 心绞痛、间歇性跛行）。 收集的信息将与患者记录和 VDHD 中的注册信息进行比较。 此外，将整理有关侵入性治疗定位、CAD 程度和左心室射血分数 (LVEF) 的最新估计值的信息。 将检查所有患者的身高和体重、腹围并采集血样。 将执行自动办公室血压测量（Bp-TRU 设备）。 将测量肌酐 (e-GFR)、总胆固醇、LDL 胆固醇、HDL 胆固醇、甘油三酯和 HbA1c 的水平。 此外，将保存一份血样用于前瞻性 DNA 分析（如下）。 研究人员将根据国家指南评估治疗目标的实现程度。 将更正分析以反映近年来发生的这些治疗指南的变化。

研究第 2 部分。研究 1 中的患者（指标患者）被要求与 30 至 65 岁的一级亲属建立联系，以参与研究第 2 部分。联系方式遵循与家庭联系的常规部门指南成员。 给予知情同意的一级亲属将被纳入研究第 2 部分（参与者）。 将获得被诊断患有动脉粥样硬化的参与者的患者记录。 排除标准将是以前通过 CTCA 或经皮腔内冠状动脉造影诊断为 CAD、慢性心房颤动、肾功能衰竭（e-GFR < 30ml/min）、肥胖（BMI > 30 是指示性的，但身体几何形状起作用）、以前过敏对比剂反应和怀孕。 传统的风险概况和血液样本将在研究第 1 部分中收集。在 CTCA 之前，LVEF 是通过超声心动图估计的。 CTCA 是根据部门的标准协议执行的。 最初，在没有造影剂的情况下执行 CT 扫描，以便通过 Agatstons 方法估计冠状动脉钙化。 然后用 70 毫升含碘造影剂进行扫描。 将使用 ECG 调制和减少辐射的方案，以便普通参与者 (70 kg) 可能期望接受低于 3 mSv 的辐射剂量。 对比研究的分析将侧重于自动和半自动斑块量化。 部门将根据部门标准程序描述非心脏发现。放射学、AUH、Skejby 和医疗干预按照临床指示进行。

研究第 3 部分。研究第 1 部分和第 2 部分中被认为受动脉粥样硬化严重影响的家庭，将根据家庭规模、受影响的人数和疾病的严重程度进行评估。 同意的家庭成员（指标患者、一级亲属以及相关的一级亲属）将被纳入研究第 3 部分。将与研究第 2 部分中一样尝试与尚未参与该项目的亲属联系。 A如果尚未获得传统的风险概况和用于 DNA 分析（外显子组测序）的血液样本，则将被要求。 分析在分子医学系 (MOMA)、AUH、Skejby 进行，他们拥有执行测试和生物信息学分析所需的设备、软件和实验室专业知识。 首先，纯化基因组 DNA 并将其片段化为 200-500 个碱基对的大小。 Illumina TruSeq 文库（与外显子组测序一起使用）将在 Caliper Sciclone 机器人上生成，其中还将使用 Nimblegens EZ in solution Exome v3 套件进行外显子组富集。 数据分析将在 MOMA 工作人员的指导下在 MOMA 进行。 第一个序列将被修剪并与人道基因组对齐。 其次，将在调用变体之前对比对进行微调，包括单核苷酸变体和各种大小的插入/删除。 数据的解释将在软件程序 Cartagenia 中进行，它可以访问大量的公共和商业数据库，也提供了集成私人数据库的机会。 变体将根据频率、基因位置、现有知识和不同的计算机预测工具进行过滤。 可能的重大发现将通过 Sanger 测序进行验证。

统计分析 在研究第 3 部分发现的基因型中，进行耦合分析以识别受疾病影响的个体共享的基因组区域。 谱系分析和耦合分析的使用大大减少了基因组中的候选区间，从而提高了识别致病变异的统计能力，即使在小家庭中也是如此。 由于所包含家族的精确遗传结构和家族结构尚不清楚，因此无法精确计算统计功效。 在显性单基因疾病的情况下，仅基于定位（耦合）的过滤减少了 app 的潜在变异。 80% 在一对受影响的兄弟姐妹中，超过 95% 的单基因隐性疾病，如果受影响的个体来自近交家庭。

研究生物库 一个研究生物库将在奥胡斯大学临床医学健康研究所下建立。 来自研究 1-3 中所有参与者的 2x4 ml（BD Vacutainer K3E 7,2mg Ref. 368860）和 1x4ml（BD Vacutainer SST II Advance，Ref. 367957）血液样本将提交至生物库进行进一步分析。 采样在 AUH、Skejby 或玻璃杯进行，回邮信封将寄给患者，供其家庭医生抽血。 样本被冷冻保存，并对研究部分 3 的参与者进行外显子组测序。生物样本库将在项目结束后进行，以供未来研究之用。 如果将来对保存的材料进行分析，将事先通知研究伦理委员会和参与者（如果还活着）。 存储生物材料的许可将根据丹麦数据保护局指定的时间间隔连续应用。 所有参与者都可以随时要求销毁他们的生物材料。