Korai koszorúér-betegség – klinikai és molekuláris genetikai vonatkozások (PIHS)

Célok Tanulmány 1. rész: Számszerűsítse az atherosclerosis kockázati tényezőinek előfordulását a nagyon korai CAD-ben szenvedő betegek körében a közép-dániai régióban, és vizsgálja meg, milyen mértékben kezelik a betegeket a nemzeti irányelvek szerint.

2. vizsgálati rész: A CAD előfordulásának vizsgálata nagyon korai CAD-ben szenvedő betegek középkorú 1. fokú rokonai körében.

Tanulmány 3. rész: Értékelje a lehetséges genetikai "kockázati tényezőket" magas CAD prevalenciával rendelkező családokban exome szekvenálási analízis segítségével.

Hipotézisek 1. hipotézis: A nagyon korai CAD-ben szenvedő betegek módosítható kockázati tényezőkkel rendelkeznek, amelyeket a jelenlegi nemzeti irányelvekhez képest nem kezelnek megfelelően.

2. hipotézis: A nagyon korai CAD előfordulása összefügg a betegség családi halmozódásával.

3. hipotézis: Az exome szekvenálás alkalmazása a fenotípusos, súlyos korai CAD-ben szenvedő kiválasztott családokban betegséget okozó genetikai variánsokat azonosít.

Módszertanulmány 1. rész. Azokat a korai CAD-ben szenvedő betegeket, akiknél 40 éves koruk előtt perkután koszorúér-beavatkozáson (PCI) vagy coronaria bypass műtéten (CABG) végeztek, a West Denmark Heart Registry (VDHD)-ből választják ki. A 2007. január 1. és 2013. december 31. közötti időszakban a skejbyi Aarhusi Egyetemi Kórházban (AUH) szívizominfarktus (MI), stabil vagy instabil angina pectoris miatt kezelt betegek felvételére és a regisztrált kockázati tényezők előfordulásának értékelésére kerül sor (minta). alkalmazást jelzi. évi 170 beteg). A tájékozott beleegyezés megszerzése után részt vesznek ebben a kutatási tanulmányban. A résztvevőket a Dep. kardiológiai ambulanciáján kérdezik meg. of Cardiology, AUH, Skejby. A szív- és érrendszeri kockázati tényezőkről a következő információkat gyűjtjük össze; atherosclerosis családi anamnézisében (törzskönyvi elemzést végeznek, és azonosítják a diagnosztizált CVD eseteit), korábbi kórtörténet (pl. magas vérnyomás, diszlipidémia, cukorbetegség, krónikus vesebetegség, érrendszeri betegségek), a dohányzási állapot és a csomagévek száma, az alkoholfogyasztás és az érrendszeri tünetek (pl. angina pectoris, intermittáló claudicatio). Az összegyűjtött információkat összehasonlítják a betegnyilvántartásokban és a VDHD-ben regisztrált adatokkal. Ezenkívül összegyűjtik az invazív kezelés lokalizációjával, a CAD fokával és a bal kamrai ejekciós frakció (LVEF) legfrissebb becslésével kapcsolatos információkat. Minden beteget megvizsgálnak a magasság és a súly, a haskörfogat tekintetében, és vérmintát vesznek. Automatizált irodai vérnyomásmérés (Bp-TRU készülék) kerül végrehajtásra. Megmérik a kreatinin (e-GFR), az összkoleszterin, az LDL-koleszterin, a HDL-koleszterin, a trigliceridek és a HbA1c szintjét. Ezenkívül a rendszer elment egy vérmintát a leendő DNS-elemzéshez (lent). A vizsgálók a nemzeti irányelveknek megfelelően értékelik, hogy a kezelési célok milyen mértékben teljesültek. Az elemzést úgy javítjuk, hogy tükrözze a kezelési irányelvekben az elmúlt években bekövetkezett változásokat.

2. vizsgálati rész. Az 1. vizsgálatból származó betegeket (indexbetegek) kérjük, hogy 30 és 65 év közötti I. fokú hozzátartozóikkal lépjenek kapcsolatba a 2. vizsgálati részben való részvétel céljából. tagjai. Azok az 1. fokú hozzátartozók, akik beleegyezésüket adják, bekerülnek a 2. vizsgálati részbe (résztvevők). Az ateroszklerózissal diagnosztizált résztvevők betegfelvételeit beszerezzük. Kizárási kritérium a CAD korábbi CTCA-val vagy perkután transzluminális koszorúér angiográfiával történő diagnosztizálása, krónikus pitvarfibrilláció, veseelégtelenség (e-GFR < 30 ml/perc), elhízás (a BMI > 30 jelzésértékű, de a testgeometria is szerepet játszik), korábbi allergiás kontraszt reakció és terhesség. A hagyományos kockázati profilt és vérmintákat gyűjtenek az 1. vizsgálati részben leírtak szerint. A CTCA előtt az LVEF-t echokardiográfiával becsülik meg. A CTCA-t az osztályon a szabványos protokoll szerint hajtják végre. A CT-vizsgálatot kezdetben kontraszt nélkül végezzük, hogy Agatston módszerrel becsüljük meg a koszorúér meszesedést. Ezt követően 70 ml jódtartalmú kontrasztanyaggal szkennelést végzünk. EKG-modulációs és sugárcsökkentett protokollokat alkalmaznak, így egy átlagos résztvevő (70 kg) 3 mSv alatti sugárdózisra számíthat. A kontrasztvizsgálat elemzése az automatizált és félautomata plakk mennyiségi meghatározására fog összpontosítani. A nem kardiális leleteket az osztály szokásos eljárásai szerint írja le a Dep. radiológia, AUH, Skejby, valamint a klinikailag indokolt orvosi beavatkozás.

3. vizsgálati rész. Az 1. és 2. vizsgálati részből olyan családokat választanak ki, akiket az érelmeszesedésben súlyosan érintettnek tekintenek, a család mérete, az érintettek száma és a betegség súlyossága alapján értékelve. A beleegyező családtagok (indexbetegek, 1. fokú hozzátartozóik és adott esetben 1. fokú hozzátartozóik is) a 3. vizsgálati részbe kerülnek. Azokkal a hozzátartozókkal, akik még nem vettek részt a projektben, a 2. vizsgálati részben leírtak szerint kerül sor. hagyományos kockázati profilt és vérmintát kérnek DNS-elemzéshez (exome szekvenálás), ha azt még nem szerezték be. Az elemzés a Skejby-i AUH Molekuláris Medicina Osztályán (MOMA) történik, ahol a vizsgálatok, valamint a bioinformatikai elemzés elvégzéséhez szükséges felszerelések, szoftverek és laboratóriumi szakértelemmel rendelkeznek. Először a genomi DNS-t megtisztítják és 200-500 bázispár méretűre fragmentálják. Az Illumina TruSeq könyvtárakat (az exome szekvenáláshoz használandó) egy Caliper Sciclone-robotban állítják elő, ahol az exome dúsítása is megtörténik a Nimblegens EZ oldatos Exome v3 kittel. Az adatelemzés a MOMA-ban zajlik majd a MOMA munkatársainak irányításával. Az első szekvenciákat levágják és a humán genomhoz igazítják. Másodszor, az igazítások finomhangolásra kerülnek a változatok meghívása előtt, beleértve az egynukleotidos változatokat és a különböző méretű inszerciókat/deléciókat. Az adatok értelmezése a Cartagenia szoftverben történik, amely rengeteg nyilvános és kereskedelmi adatbázishoz ad hozzáférést, valamint lehetőséget kínál privát adatbázisok integrálására is. A változatok szűrése gyakoriság, génpozíció, meglévő ismeretek és különböző in-silico előrejelző eszközök alapján történik. Az esetleges szignifikáns eredményeket Sanger-szekvenálás igazolja.

Statisztikai elemzés A 3. vizsgálati részben talált genotípusoknál csatolási analízist végeznek, hogy azonosítsák a genom azon régióit, amelyeken a betegségben érintett egyének osztoznak. A származási analízis és a csatolási elemzés alkalmazása jelentősen csökkenti a jelölt intervallumokat a genomban, ezáltal növeli a statisztikai erőt a betegséget okozó változatok azonosítására még kis családokban is. Mivel a bevont családok pontos genetikai architektúrája és családszerkezete nem ismert, a statisztikai erő pontos kiszámítása nem lehetséges. Domináns monogenetikus betegség esetén a csak lokalizáción (csatoláson) alapuló szűrés kb. 80%-a egy érintett testvérpáron belül, és több mint 95%-a monogenetikus recesszív betegségek esetén, ha beltenyésztett családból származó egyedek.

Kutatási Biobank Kutatási biobankot hoznak létre az Aarhusi Egyetem Egészségügyi Klinikai Orvostudományi Intézetében. Az 1-3. vizsgálatokban részt vevőktől egy 2x4 ml-es (BD Vacutainer K3E 7,2mg Ref. 368860) és 1x4 ml-es (BD Vacutainer SST II Advance, Ref. 367957) vérmintát továbbítanak a biobanknak további elemzés céljából. A mintavételt az AUH-ban, Skejbyben vagy pohárban végzik, és a háziorvosa visszaküldi a borítékot vérvétel céljából. A mintát kriokonzerválják, és a 3. vizsgálati rész résztvevőinél exome szekvenálást végzünk. A biobankot a projekt lezárása után folytatjuk a jövőbeni kutatások érdekében. A megőrzött anyag jövőbeni elemzése esetén A Kutatásetikai Bizottságot és a résztvevőt (ha még él) előzetesen felfigyeljük. A biológiai anyag tárolására vonatkozó engedélyt a Dán Adatvédelmi Ügynökség meghatározott időközönként folyamatosan alkalmazza. Minden résztvevő bármikor követelheti biológiai anyagának megsemmisítését.