Enfermedad Arterial Coronaria Prematura - Aspectos Clínicos y Genéticos Moleculares (PIHS)

Propósitos Parte 1 del estudio: Cuantificar la ocurrencia de factores de riesgo de aterosclerosis entre pacientes con CAD muy prematura en la región central de Dinamarca e investigar hasta qué punto los pacientes son tratados de acuerdo con las pautas nacionales.

Parte 2 del estudio: Investigar la ocurrencia de CAD entre familiares de primer grado de mediana edad de pacientes establecidos que tienen CAD muy prematura.

Parte 3 del estudio: Evaluar los posibles "factores de riesgo" genéticos en familias con una alta prevalencia de EAC mediante el análisis de secuenciación del exoma.

Hipótesis Hipótesis 1: Los pacientes con EAC muy prematura tienen factores de riesgo modificables, que son tratados inadecuadamente en relación con las guías nacionales actuales.

Hipótesis 2: La aparición de EAC muy prematura está asociada con la acumulación familiar de la enfermedad.

Hipótesis 3: El uso de la secuenciación del exoma en familias seleccionadas con CAD prematura severa fenotípica identificará las variantes genéticas que causan la enfermedad.

Método Estudio parte 1. Los pacientes que sufren de CAD prematura que han tenido una intervención coronaria percutánea (PCI) o una operación de injerto de derivación de la arteria coronaria (CABG) realizados antes de la edad de 40 años serán seleccionados del Registro del Corazón de Dinamarca Occidental (VDHD). En concreto, se reclutarán pacientes tratados en el Hospital Universitario de Aarhus (AUH) en Skejby por infarto de miocardio (IM), angina de pecho estable o inestable en el período comprendido entre el 1 de enero de 2007 y el 31 de diciembre de 2013 y se evaluará la aparición de factores de riesgo registrados (muestra indica aplicación. 170 pacientes por año). Después de obtener el consentimiento informado, participarán en este estudio de investigación. Los participantes serán entrevistados en la clínica ambulatoria cardíaca en el Dep. de Cardiología, AUH, Skejby. Se recopilará la siguiente información sobre factores de riesgo cardiovascular; antecedentes familiares de aterosclerosis (se realizará un análisis genealógico y se identificarán los casos de enfermedades cardiovasculares diagnosticadas), antecedentes médicos previos (es decir, hipertensión, dislipidemia, diabetes, enfermedad renal crónica, enfermedad vascular), tabaquismo y número de paquetes por año, consumo de alcohol y síntomas vasculares (es decir, angina de pecho, claudicación intermitente). La información recopilada se comparará con la información registrada en los registros de pacientes y VDHD. Además, se recopilará información sobre la localización del tratamiento invasivo, el grado de CAD y la última estimación de la fracción de eyección del ventrículo izquierdo (FEVI). Todos los pacientes serán examinados con respecto a la altura y el peso, la circunferencia abdominal y se recolectará una muestra de sangre. Se realizará una medición automatizada de la presión arterial en el consultorio (dispositivo Bp-TRU). Se medirán los niveles de creatinina (e-GFR), colesterol total, colesterol LDL, colesterol HDL, triglicéridos y HbA1c. Además, se guardará una muestra de sangre para un posible análisis de ADN (abajo). Los investigadores evaluarán en qué medida se han cumplido los objetivos de tratamiento de acuerdo con las directrices nacionales. El análisis se corregirá para reflejar los cambios en estas pautas de tratamiento, que se han producido en los últimos años.

Parte 2 del estudio. Se solicita a los pacientes del estudio 1 (pacientes índice) que establezcan contacto con familiares de primer grado entre 30 y 65 años de edad con el fin de participar en la parte 2 del estudio. La forma de contacto sigue las pautas regulares del departamento para el contacto con la familia. miembros Los familiares de primer grado que den su consentimiento informado serán incluidos en la parte 2 del estudio (participantes). Se obtendrán registros de pacientes de los participantes a los que se les diagnostica aterosclerosis. Los criterios de exclusión serán diagnóstico anterior de CAD por CTCA o angiografía coronaria transluminal percutánea, fibrilación auricular crónica, insuficiencia renal (e-GFR < 30 ml/min), obesidad (IMC > 30 es indicativo pero la geometría corporal juega un papel), antecedentes alérgicos de contraste reacción y embarazo. Se recolectará un perfil de riesgo tradicional y muestras de sangre como en la parte 1 del estudio. Antes de la CTCA, la FEVI se estima mediante ecocardiografía. Se realiza una CTCA de acuerdo con el protocolo estándar en el departamento. Inicialmente la tomografía computarizada se realiza sin contraste para estimar la calcificación coronaria por el método de Agatston. Posteriormente se realiza una exploración con 70 ml de contraste yodado. Se utilizarán protocolos de reducción de radiación y modulación de ECG para que un participante promedio (70 kg) pueda esperar recibir una dosis de radiación inferior a 3 mSv. El análisis del estudio de contraste se centrará en la cuantificación de placa automatizada y semiautomática. Los hallazgos no cardíacos se describirán de acuerdo con los procedimientos estándar del departamento por parte del Dep. de Radiología, AUH, Skejby, e intervención médica realizada según indicación clínica.

Parte 3 del estudio. Se seleccionarán las familias de las partes 1 y 2 del estudio que se consideren gravemente afectadas por aterosclerosis, evaluadas en función del tamaño de la familia, el número de afectados y la gravedad de la enfermedad. Los miembros de la familia (pacientes índice, familiares de primer grado y, si corresponde, también sus familiares de primer grado) que den su consentimiento, se incluirán en la parte 3 del estudio. Se intentará contactar con familiares que aún no hayan participado en el proyecto como en la parte 2 del estudio. se solicitará perfil de riesgo tradicional y muestra de sangre para análisis de ADN (secuenciación del exoma) si no se ha obtenido ya. El análisis se lleva a cabo en el Departamento de Medicina Molecular (MOMA), AUH, Skejby, que cuenta con el equipo, el software y la experiencia de laboratorio necesarios para realizar las pruebas y el análisis bioinformático. Primero, el ADN genómico se purifica y se fragmenta a un tamaño de 200 a 500 pares de bases. Las bibliotecas Illumina TruSeq (que se utilizarán con la secuenciación del exoma) se producirán en un robot Caliper Sciclone, donde también se llevará a cabo el enriquecimiento del exoma con el kit Nimblegens EZ en solución Exome v3. El análisis de datos se llevará a cabo en MOMA bajo la dirección del personal de MOMA. Las primeras secuencias se recortarán y alinearán con el genoma humano. En segundo lugar, las alineaciones se ajustarán antes de que se llamen las variantes, incluidas las variantes de un solo nucleótido y las inserciones/eliminaciones de varios tamaños. La interpretación de los datos se llevará a cabo en el programa de software Cartagenia, que da acceso a una gran cantidad de bases de datos públicas y comerciales y también ofrece la oportunidad de integrar bases de datos privadas. Las variantes se filtrarán en función de la frecuencia, la posición del gen, el conocimiento existente y diferentes herramientas de predicción in-silico. Los posibles hallazgos significativos se validarán mediante la secuenciación de Sanger.

Análisis estadístico En los genotipos encontrados de la parte 3 del estudio, se realiza un análisis de acoplamiento para identificar regiones en el genoma compartidas por individuos afectados por la enfermedad. El uso de análisis de pedigrí y análisis de acoplamiento reduce sustancialmente los intervalos candidatos en el genoma, lo que aumenta el poder estadístico para identificar variantes que causan enfermedades incluso en familias pequeñas. Debido a que no se conoce la arquitectura genética precisa y la estructura familiar de las familias incluidas, no será posible el cálculo exacto del poder estadístico. En caso de una enfermedad monogenética dominante, una filtración basada únicamente en la localización (acoplamiento) reduce las posibles variantes por aplicación. 80% dentro de un par de hermanos afectados y en más de 95% para enfermedades recesivas monogenéticas, si son individuos afectados de familias endogámicas.

Biobanco de investigación Se establecerá un biobanco de investigación bajo el Instituto de Medicina Clínica, Salud, Universidad de Aarhus. Una muestra de 2 x 4 ml (BD Vacutainer K3E 7,2 mg Ref. 368860) y 1 x 4 ml (BD Vacutainer SST II Advance, Ref. 367957) de sangre de todos los participantes en los estudios 1-3 se enviará al biobanco para su posterior análisis. La toma de muestra se realiza en AUH, Skejby o vaso y se envía sobre de retorno al paciente para la extracción de sangre por su médico de familia. La muestra se crioconserva y se realiza la secuenciación del exoma en los participantes de la parte 3 del estudio. El biobanco se llevará a cabo después de que finalice el proyecto con el propósito de futuras investigaciones. En caso de futuros análisis sobre el material preservado, se informará previamente al Comité de Ética de la Investigación y al participante (si aún vive). El permiso para almacenar el material biológico se aplicará continuamente de acuerdo con los intervalos especificados por la Agencia Danesa de Protección de Datos. Todos los participantes podrán exigir la destrucción de su material biológico en cualquier momento.