Maladie coronarienne prématurée - Aspects génétiques cliniques et moléculaires (PIHS)

Objectifs Partie 1 de l'étude : Quantifier l'apparition de facteurs de risque d'athérosclérose chez les patients atteints de coronaropathie très prématurée dans la région centrale du Danemark et étudier dans quelle mesure les patients sont traités conformément aux directives nationales.

Partie 2 de l'étude : Enquêter sur la survenue d'une coronaropathie chez des parents d'âge moyen au 1er degré de patients établis ayant une coronaropathie très prématurée.

Partie 3 de l'étude : Évaluer les "facteurs de risque" génétiques possibles dans les familles à forte prévalence de coronaropathie à l'aide d'une analyse de séquençage de l'exome.

Hypothèses Hypothèse 1 : Les patients atteints de coronaropathie très prématurée présentent des facteurs de risque modifiables, insuffisamment traités par rapport aux recommandations nationales en vigueur.

Hypothèse 2 : La survenue d'une coronaropathie très précoce est associée à une accumulation familiale de la maladie.

Hypothèse 3 : L'utilisation du séquençage de l'exome dans des familles sélectionnées atteintes de coronaropathie prématurée sévère phénotypique permettra d'identifier les variantes génétiques responsables de la maladie.

Méthode Étude partie 1. Les patients souffrant de coronaropathie prématurée qui ont subi une intervention coronarienne percutanée (ICP) ou un pontage aorto-coronarien (CABG) avant l'âge de 40 ans seront sélectionnés à partir du West Denmark Heart Registry (VDHD). Plus précisément, les patients traités à l'hôpital universitaire d'Aarhus (AUH) à Skejby pour un infarctus du myocarde (IM), une angine de poitrine stable ou instable entre le 1er janvier 2007 et le 31 décembre 2013 seront recrutés et la survenue de facteurs de risque enregistrés sera évaluée (échantillon indique l'application. 170 patients par an). Une fois le consentement éclairé obtenu, ils participeront à cette étude de recherche. Les participants seront interviewés à la clinique externe de cardiologie du Dep. de cardiologie, AUH, Skejby. Les informations suivantes sur les facteurs de risque cardiovasculaire seront collectées ; antécédents familiaux d'athérosclérose (une analyse généalogique sera effectuée et les cas de MCV diagnostiqués seront identifiés), antécédents médicaux (c.-à-d. hypertension, dyslipidémie, diabète, maladie rénale chronique, maladie vasculaire), statut tabagique et nombre de paquets-années, consommation d'alcool et symptômes vasculaires (c.-à-d. angine de poitrine, claudication intermittente). Les informations recueillies seront comparées aux informations enregistrées dans les dossiers des patients et VDHD. En outre, des informations sur la localisation du traitement invasif, le degré de coronaropathie et la dernière estimation de la fraction d'éjection ventriculaire gauche (FEVG) seront rassemblées. Tous les patients seront examinés en ce qui concerne la taille et le poids, la circonférence abdominale et un échantillon de sang est prélevé. Une mesure automatisée de la tension artérielle en cabinet (appareil Bp-TRU) sera effectuée. Les niveaux de créatinine (e-GFR), de cholestérol total, de cholestérol LDL, de cholestérol HDL, de triglycérides et d'HbA1c seront mesurés. De plus, un échantillon de sang sera conservé pour une analyse prospective de l'ADN (ci-dessous). Les enquêteurs évalueront dans quelle mesure les objectifs de traitement ont été atteints conformément aux directives nationales. L'analyse sera corrigée pour refléter les changements apportés à ces directives de traitement, qui se sont produits au cours des dernières années.

Partie 2 de l'étude. Les patients de l'étude 1 (patients index) sont priés d'établir un contact avec des parents au 1er degré âgés de 30 à 65 ans dans le but de participer à la partie 2 de l'étude. La forme de contact suit les directives régulières du département pour le contact avec la famille membres. Les parents au 1er degré qui donnent leur consentement éclairé seront inclus dans la partie 2 de l'étude (participants). Les dossiers des patients des participants qui ont reçu un diagnostic d'athérosclérose seront obtenus. Les critères d'exclusion seront l'ancien diagnostic de CAD par CTCA ou angiographie coronarienne transluminale percutanée, la fibrillation auriculaire chronique, l'insuffisance rénale (e-GFR < 30 ml/min), l'obésité (IMC > 30 est indicatif mais la géométrie corporelle joue un rôle), l'ancien contraste allergique réaction et grossesse. Un profil de risque traditionnel et des échantillons de sang seront prélevés comme dans la partie 1 de l'étude. Avant le CTCA, la FEVG est estimée par échocardiographie. Un CTCA est réalisé selon le protocole standard du service. Dans un premier temps le scanner est réalisé sans produit de contraste afin d'estimer la calcification coronarienne par la méthode d'Agatstons. Ensuite, un scan est effectué avec 70 ml de produit de contraste iodé. Des protocoles de modulation ECG et de réduction de rayonnement seront utilisés afin qu'un participant moyen (70 kg) puisse s'attendre à recevoir une dose de rayonnement inférieure à 3 mSv. L'analyse de l'étude de contraste portera sur la quantification automatisée et semi-automatisée de la plaque. Les résultats non cardiaques seront décrits conformément aux procédures standard du département par le Dep. de radiologie, AUH, Skejby, et intervention médicale effectuée selon les indications cliniques.

Partie 3 de l'étude. Les familles des parties 1 et 2 de l'étude, considérées comme gravement touchées par l'athérosclérose, évaluées sur la base de la taille de la famille, du nombre de personnes touchées et de la gravité de la maladie, seront sélectionnées. Les membres de la famille (patients index, parents au 1er degré et, le cas échéant, leurs parents au 1er degré) qui y consentent seront inclus dans la partie 3 de l'étude. Le contact avec les proches qui n'ont pas encore participé au projet sera tenté comme dans la partie 2 de l'étude. profil de risque traditionnel et un prélèvement sanguin pour analyse ADN (séquençage de l'exome) seront demandés s'il n'a pas déjà été obtenu. L'analyse a lieu au Département de médecine moléculaire (MOMA), AUH, Skejby, qui dispose de l'équipement, des logiciels et de l'expertise de laboratoire nécessaires pour effectuer les tests ainsi que l'analyse bioinformatique. Tout d'abord, l'ADN génomique est purifié et fragmenté à une taille de 200 à 500 paires de bases. Les bibliothèques Illumina TruSeq (à utiliser avec le séquençage de l'exome) seront produites sur un robot Caliper Sciclone où l'enrichissement de l'exome avec Nimblegens EZ dans le kit Exome v3 en solution aura également lieu. L'analyse des données aura lieu au MOMA sous la direction du personnel du MOMA. Les premières séquences seront coupées et alignées sur le génome humain. Deuxièmement, les alignements seront affinés avant que les variants ne soient appelés, y compris les variants à un seul nucléotide et les insertions/délétions de différentes tailles. L'interprétation des données se fera dans le logiciel Cartagenia, qui donne accès à une multitude de bases de données publiques et commerciales et offre également la possibilité d'intégrer des bases de données privées. Les variants seront filtrés sur la base de la fréquence, de la position des gènes, des connaissances existantes et des différents outils de prédiction in silico. Les éventuelles découvertes significatives seront validées par séquençage Sanger.

Analyse statistique Au niveau des génotypes trouvés dans la partie 3 de l'étude, une analyse de couplage est effectuée pour identifier les régions du génome partagées par les individus affectés par la maladie. L'utilisation de l'analyse généalogique et de l'analyse de couplage réduit considérablement les intervalles candidats dans le génome, augmentant ainsi la puissance statistique pour identifier les variantes pathogènes, même dans les petites familles. Étant donné que l'architecture génétique précise et la structure familiale des familles incluses ne sont pas connues, le calcul exact de la puissance statistique ne sera pas possible. En cas de maladie monogénétique dominante, une filtration uniquement basée sur la localisation (couplage) réduit les variantes potentielles d'env. 80 % au sein d'un couple de frères et sœurs atteint et de plus de 95 % pour les maladies monogéniques récessives, s'il s'agit d'individus issus de familles consanguines.

Biobanque de recherche Une biobanque de recherche sera créée dans le cadre de l'Institut de médecine clinique, santé, Université d'Aarhus. Un échantillon de 2x4 ml (BD Vacutainer K3E 7,2 mg Réf. 368860) et 1x4 ml (BD Vacutainer SST II Advance, Réf. 367957) de sang de tous les participants aux études 1-3 sera soumis à la biobanque pour une analyse plus approfondie. Le prélèvement est effectué à l'AUH, à Skejby ou à un verre et une enveloppe retour sera envoyée au patient pour la prise de sang par son médecin de famille. L'échantillon est cryoconservé et un séquençage de l'exome est effectué sur les participants de la partie 3 de l'étude. La biobanque sera poursuivie après la fin du projet pour les besoins de recherches futures. En cas d'analyse future sur le matériel conservé Le comité d'éthique de la recherche et le participant (s'il est encore en vie) seront avisés au préalable. L'autorisation de stocker le matériel biologique sera appliquée en continu selon des intervalles spécifiés par l'Agence danoise de protection des données. Tous les participants peuvent exiger la destruction de leur matériel biologique à tout moment.