Преждевременная ишемическая болезнь сердца - клинические и молекулярно-генетические аспекты (PIHS)

Цели Часть исследования 1: Количественное определение встречаемости факторов риска атеросклероза среди пациентов с очень ранней ИБС в регионе Центральной Дании и исследование того, в какой степени пациенты лечатся в соответствии с национальными рекомендациями.

Часть исследования 2: Изучить возникновение ИБС среди родственников 1-й степени родства среднего возраста пациентов с очень ранней ИБС.

Часть исследования 3: Оценка возможных генетических «факторов риска» в семьях с высокой распространенностью ИБС с использованием анализа секвенирования экзома.

Гипотезы Гипотеза 1: Пациенты с очень ранней ИБС имеют модифицируемые факторы риска, которые не лечатся неадекватно по сравнению с текущими национальными рекомендациями.

Гипотеза 2. Возникновение очень ранней ИБС связано с семейным накоплением заболевания.

Гипотеза 3: Использование экзомного секвенирования в отдельных семьях с фенотипически тяжелой преждевременной ИБС позволит выявить генетические варианты, вызывающие заболевание.

Метод Исследование, часть 1. Пациенты, страдающие преждевременной ИБС, перенесшие чрескожное коронарное вмешательство (ЧКВ) или операцию аортокоронарного шунтирования (АКШ) в возрасте до 40 лет, будут отобраны из Регистра сердца Западной Дании (VDHD). В частности, будут набраны пациенты, проходившие лечение в больнице Орхусского университета (AUH) в Скейби по поводу инфаркта миокарда (ИМ), стабильной или нестабильной стенокардии в период с 1 января 2007 г. по 31 декабря 2013 г., и будет оцениваться возникновение зарегистрированных факторов риска (образец указывает приложение. 170 пациентов в год). После получения информированного согласия они будут участвовать в этом исследовании. Участники будут опрошены в кардиологической поликлинике при отд. кардиологии, AUH, Скейбы. Будет собрана следующая информация о сердечно-сосудистых факторах риска; семейный анамнез атеросклероза (будет проведен анализ родословной и будут выявлены случаи диагностированных ССЗ), предшествующий анамнез (т. артериальная гипертензия, дислипидемия, диабет, хроническая болезнь почек, сосудистые заболевания), статус курения и количество пачек в год, потребление алкоголя и сосудистые симптомы (т. стенокардия, перемежающаяся хромота). Собранная информация будет сравниваться с зарегистрированной информацией в картах пациентов и на VDHD. Кроме того, будет сопоставлена ​​информация о локализации инвазивного лечения, степени ИБС и последней оценке фракции выброса левого желудочка (ФВЛЖ). Всех пациентов обследуют на предмет роста и веса, обхвата живота и берут образец крови. Будет выполнено автоматизированное измерение артериального давления в офисе (устройство Bp-TRU). Будут измеряться уровни креатинина (рСКФ), общего холестерина, холестерина ЛПНП, холестерина ЛПВП, триглицеридов и HbA1c. Далее образец крови будет сохранен для предполагаемого анализа ДНК (ниже). Исследователи оценят, в какой степени цели лечения были достигнуты в соответствии с национальными рекомендациями. Анализ будет скорректирован, чтобы отразить изменения в этих руководствах по лечению, произошедшие за последние годы.

Часть 2 исследования. Пациентов из исследования 1 (показательные пациенты) просят установить контакт с родственниками 1-й степени родства в возрасте от 30 до 65 лет с целью участия в части 2 исследования. Форма контакта соответствует обычным руководящим принципам отделения для контактов с семьей. члены. Родственники 1-й степени родства, давшие информированное согласие, будут включены во вторую часть исследования (участники). Будут получены истории болезни участников, у которых диагностирован атеросклероз. Критериями исключения будут прежний диагноз ИБС с помощью CTCA или чрескожной транслюминальной коронарографии, хроническая фибрилляция предсердий, почечная недостаточность (рСКФ < 30 мл/мин), ожирение (показательно ИМТ > 30, но играет роль геометрия тела), прежнее аллергическое контрастирование реакции и беременности. Традиционный профиль риска и образцы крови будут собраны, как и в части исследования 1. До CTCA ФВ ЛЖ оценивается с помощью эхокардиографии. CTCA выполняется по стандартному протоколу в отделении. Первоначально КТ проводится без контраста, чтобы оценить коронарную кальцификацию по методу Агатстона. Затем проводят сканирование с 70 мл йодсодержащего контраста. Будут использоваться модуляция ЭКГ и протоколы со сниженным уровнем радиации, так что средний участник (70 кг) может рассчитывать на получение дозы облучения ниже 3 мЗв. Анализ контрастного исследования будет сосредоточен на автоматизированном и полуавтоматическом количественном определении бляшек. Некардиальные находки будут описаны в соответствии со стандартными процедурами отделения зам. радиологии, AUH, Skejby и медикаментозное вмешательство проводят по клиническим показаниям.

Часть 3 исследования. Будут отобраны семьи из частей исследования 1 и 2, которые считаются сильно пораженными атеросклерозом, оцениваемыми на основе размера семьи, числа пораженных и тяжести заболевания. Члены семьи (показательные пациенты, родственники 1-й степени родства и, если применимо, также их родственники 1-й степени родства), давшие согласие, будут включены в часть 3 исследования. Будет предпринята попытка установить контакт с родственниками, которые еще не участвовали в проекте, как и в части 2 исследования. будет запрошен традиционный профиль риска и образец крови для анализа ДНК (секвенирование экзома), если он еще не был получен. Анализ проводится в Департаменте молекулярной медицины (MOMA), AUH, Скейби, где есть необходимое оборудование, программное обеспечение и лабораторные знания для проведения тестов, а также биоинформатического анализа. Во-первых, геномная ДНК очищается и фрагментируется до размера 200-500 пар оснований. Библиотеки Illumina TruSeq (которые будут использоваться при секвенировании экзома) будут производиться на роботе Caliper Sciclone, где также будет происходить обогащение экзома с помощью Nimblegens EZ в наборе Exome v3 в растворе. Анализ данных будет проводиться в MOMA под руководством сотрудников MOMA. Первые последовательности будут обрезаны и приведены в соответствие с человеческим геномом. Во-вторых, выравнивания будут точно настроены до того, как будут названы варианты, включая однонуклеотидные варианты и вставки/делеции различного размера. Интерпретация данных будет осуществляться в программе Cartagenia, которая дает доступ к большому количеству общедоступных и коммерческих баз данных, а также дает возможность интеграции частных баз данных. Варианты будут фильтроваться на основе частоты, положения гена, существующих знаний и различных инструментов прогнозирования in-silico. Возможные важные результаты будут подтверждены секвенированием по Сэнгеру.

Статистический анализ Для найденных генотипов из части 3 исследования проводится анализ сопряжения для выявления областей в геноме, общих для больных людей. Использование анализа родословной и анализа сцепления существенно сокращает интервалы-кандидаты в геноме, тем самым увеличивая статистическую мощность для выявления вариантов, вызывающих заболевание, даже в небольших семьях. Поскольку точная генетическая архитектура и семейная структура включенных семей неизвестны, точный расчет статистической мощности невозможен. В случае доминантного моногенетического заболевания фильтрация только на основе локализации (связывания) уменьшает количество потенциальных вариантов на прим. 80% в паре пораженных братьев и сестер и более чем на 95% при моногенетических рецессивных заболеваниях, если поражены особи из инбредных семей.

Исследовательский биобанк Будет создан исследовательский биобанк при Институте клинической медицины и здравоохранения Орхусского университета. Образцы 2x4 мл (BD Vacutainer K3E 7,2 мг, арт. 368860) и 1x4 мл (BD Vacutainer SST II Advance, арт. 367957) крови всех участников исследований 1–3 будут отправлены в биобанк для дальнейшего анализа. Забор крови проводится в AUH, Skejby или стакане, а обратный конверт отправляется пациенту для забора крови семейным врачом. Образец криоконсервируется, и у участников третьей части исследования проводится секвенирование экзома. Биобанк будет продолжен после завершения проекта для целей будущих исследований. В случае дальнейшего анализа сохранившегося материала Комитет по этике исследований и участник (если он еще жив) будут уведомлены заранее. Разрешение на хранение биологического материала будет применяться непрерывно в соответствии с установленными интервалами Датским агентством по защите данных. Все участники могут потребовать уничтожения своего биологического материала в любое время.