Coronaropatia prematura - Aspetti genetici clinici e molecolari (PIHS)

Scopi Parte 1 dello studio: quantificare la presenza di fattori di rischio di aterosclerosi tra i pazienti con CAD molto prematura nella regione della Danimarca centrale e indagare fino a che punto i pazienti vengono trattati secondo le linee guida nazionali.

Studio parte 2: indagare l'insorgenza di CAD tra parenti di 1° grado di mezza età di pazienti con CAD molto prematura.

Parte 3 dello studio: valutare i possibili "fattori di rischio" genetici nelle famiglie con un'elevata prevalenza di CAD utilizzando l'analisi del sequenziamento dell'esoma.

Ipotesi Ipotesi 1: I pazienti con CAD molto prematura hanno fattori di rischio modificabili, che sono trattati in modo inadeguato rispetto alle attuali linee guida nazionali.

Ipotesi 2: l'insorgenza di CAD molto prematura è associata all'accumulo familiare della malattia.

Ipotesi 3: l'uso del sequenziamento dell'esoma in famiglie selezionate con CAD prematura grave fenotipica identificherà le varianti genetiche che causano la malattia.

Metodo Studio parte 1. I pazienti affetti da CAD prematura che hanno subito un intervento coronarico percutaneo (PCI) o un'operazione di bypass coronarico (CABG) prima dell'età di 40 anni saranno selezionati dal West Denmark Heart Registry (VDHD). Nello specifico, verranno reclutati i pazienti trattati presso l'Aarhus University Hospital (AUH) di Skejby per infarto miocardico (IM), angina pectoris stabile o instabile nel periodo 1 gennaio 2007 - 31 dicembre 2013 e verrà valutata l'insorgenza di fattori di rischio registrati (campione indica app. 170 pazienti all'anno). Dopo aver ottenuto il consenso informato, parteciperanno a questo studio di ricerca. I partecipanti saranno intervistati nell'ambulatorio cardiologico del Dip. di Cardiologia, AUH, Skejby. Verranno raccolte le seguenti informazioni sui fattori di rischio cardiovascolare; storia familiare di aterosclerosi (verrà eseguita un'analisi genealogica e verranno identificati i casi di diagnosi di CVD), storia medica precedente (ad es. ipertensione, dislipidemia, diabete, malattia renale cronica, malattie vascolari), abitudine al fumo e numero di pacchetti-anno, consumo di alcol e sintomi vascolari (es. angina pectoris, claudicatio intermittens). Le informazioni raccolte verranno confrontate con le informazioni registrate nelle cartelle dei pazienti e VDHD. Inoltre, verranno raccolte informazioni sulla localizzazione del trattamento invasivo, il grado di CAD e l'ultima stima della frazione di eiezione ventricolare sinistra (LVEF). Tutti i pazienti saranno esaminati per quanto riguarda altezza e peso, circonferenza addominale e verrà raccolto un campione di sangue. Verrà eseguita una misurazione automatica della pressione sanguigna in ufficio (dispositivo Bp-TRU). Saranno misurati i livelli di creatinina (e-GFR), colesterolo totale, colesterolo LDL, colesterolo HDL, trigliceridi e HbA1c. Inoltre, un campione di sangue verrà salvato per l'analisi prospettica del DNA (sotto). Gli investigatori valuteranno fino a che punto gli obiettivi di trattamento sono stati raggiunti in conformità con le linee guida nazionali. L'analisi sarà corretta per riflettere i cambiamenti in queste linee guida di trattamento, che si sono verificati negli ultimi anni.

Studio parte 2. Ai pazienti dello studio 1 (pazienti indice) è richiesto di stabilire un contatto con i parenti di 1° grado di età compresa tra 30 e 65 anni allo scopo di partecipare allo studio parte 2. La forma di contatto segue le normali linee guida del dipartimento per il contatto con la famiglia membri. I parenti di 1° grado che danno il loro consenso informato saranno inclusi nello studio parte 2 (partecipanti). Verranno ottenute le cartelle cliniche dei partecipanti a cui è stata diagnosticata l'aterosclerosi. I criteri di esclusione saranno la precedente diagnosi di CAD mediante CTCA o angiografia coronarica transluminale percutanea, fibrillazione atriale cronica, insufficienza renale (e-GFR <30 ml/min), obesità (BMI> 30 è indicativo ma la geometria del corpo gioca un ruolo), precedente mezzo di contrasto allergico reazione e gravidanza. Verranno raccolti un profilo di rischio tradizionale e campioni di sangue come nella parte 1 dello studio. Prima del CTCA, la LVEF viene stimata mediante ecocardiografia. Un CTCA viene eseguito secondo il protocollo standard nel dipartimento. Inizialmente la TAC viene eseguita senza mezzo di contrasto per stimare la calcificazione coronarica con il metodo di Agatston. Successivamente viene eseguita una scansione con 70 ml di mezzo di contrasto contenente iodio. Verranno utilizzati protocolli di modulazione ECG e di riduzione delle radiazioni in modo che un partecipante medio (70 kg) possa aspettarsi di ricevere una dose di radiazioni inferiore a 3 mSv. L'analisi dello studio di contrasto si concentrerà sulla quantificazione automatizzata e semiautomatica della placca. I reperti non cardiaci saranno descritti secondo le procedure standard dipartimentali a cura del Dip. di Radiologia, AUH, Skejby e intervento medico eseguito come clinicamente indicato.

Studio parte 3. Saranno selezionate le famiglie dello studio parte 1 e 2, che sono considerate gravemente affette da aterosclerosi, valutate in base alla dimensione della famiglia, al numero di persone colpite e alla gravità della malattia. I familiari (pazienti indice, parenti di 1° grado e se del caso anche i loro parenti di 1° grado) che acconsentono, saranno inclusi nella parte 3 dello studio. Si tenterà il contatto con i parenti che non hanno ancora partecipato al progetto come nella parte 2 dello studio. verrà richiesto il profilo di rischio tradizionale e un campione di sangue per l'analisi del DNA (sequenziamento dell'esoma) se non è già stato ottenuto. L'analisi si svolge presso il Dipartimento di Medicina Molecolare (MOMA), AUH, Skejby, che dispone delle attrezzature, del software e delle competenze di laboratorio necessarie per eseguire i test e l'analisi bioinformatica. Innanzitutto, il DNA genomico viene purificato e frammentato a una dimensione di 200-500 paia di basi. Le librerie Illumina TruSeq (da utilizzare con il sequenziamento dell'esoma) saranno prodotte presso un robot Caliper Sciclone dove avrà luogo anche l'arricchimento dell'esoma con il kit Nimblegens EZ in soluzione Exome v3. L'analisi dei dati si svolgerà al MOMA sotto la guida dello staff del MOMA. Le prime sequenze saranno ritagliate e allineate al genoma umano. In secondo luogo, gli allineamenti saranno messi a punto prima che vengano chiamate le varianti, comprese le varianti a singolo nucleotide e le inserzioni/delezioni di varie dimensioni. L'interpretazione dei dati avverrà nel programma software Cartagenia, che dà accesso a numerosi database pubblici e commerciali e offre anche l'opportunità di integrare database privati. Le varianti saranno filtrate in base a frequenza, posizione del gene, conoscenza esistente e diversi strumenti di predizione in-silico. Eventuali risultati significativi saranno convalidati dal sequenziamento di Sanger.

Analisi statistica Ai genotipi trovati dalla parte 3 dello studio, viene eseguita un'analisi di accoppiamento per identificare le regioni nel genoma condivise da individui affetti dalla malattia. L'uso dell'analisi del pedigree e dell'analisi dell'accoppiamento riduce sostanzialmente gli intervalli candidati nel genoma, aumentando così il potere statistico di identificare varianti che causano malattie anche in piccole famiglie. Poiché l'architettura genetica precisa e la struttura familiare delle famiglie incluse non sono note, non sarà possibile un calcolo esatto del potere statistico. In caso di malattia monogenetica dominante, un filtraggio basato solo sulla localizzazione (accoppiamento) riduce le potenziali varianti per app. 80% all'interno di una coppia di fratelli affetti e di oltre il 95% per malattie monogenetiche recessive, se individui affetti da famiglie consanguinee.

Biobanca di ricerca Sarà istituita una biobanca di ricerca presso l'Istituto di Medicina Clinica, Salute, Università di Aarhus. Un campione di 2x4 ml (BD Vacutainer K3E 7,2mg Rif. 368860) e 1x4 ml (BD Vacutainer SST II Advance, Rif. 367957) di sangue di tutti i partecipanti agli studi 1-3 sarà inviato alla biobanca per ulteriori analisi. Il campionamento viene eseguito presso AUH, Skejby o un bicchiere e una busta di ritorno verrà inviata al paziente per il prelievo di sangue dal proprio medico di famiglia. Il campione viene crioconservato e il sequenziamento dell'esoma viene eseguito sui partecipanti della parte 3 dello studio. La biobanca verrà portata avanti dopo la conclusione del progetto ai fini della ricerca futura. In caso di future analisi sul materiale conservato verranno preventivamente avvertiti il ​​Comitato Etico della Ricerca e il partecipante (se ancora in vita). L'autorizzazione a conservare il materiale biologico verrà applicata continuamente secondo intervalli specificati dall'Agenzia danese per la protezione dei dati. Tutti i partecipanti possono richiedere in qualsiasi momento la distruzione del proprio materiale biologico.