Przedwczesna choroba wieńcowa - kliniczne i molekularne aspekty genetyczne (PIHS)

Cele Badanie część 1: Kwantyfikacja występowania czynników ryzyka miażdżycy u pacjentów z bardzo przedwczesną chorobą wieńcową w Regionie Centralnej Danii i zbadanie, w jakim stopniu pacjenci są leczeni zgodnie z krajowymi wytycznymi.

Badanie część 2: Zbadanie występowania CAD wśród krewnych pierwszego stopnia w średnim wieku u ustalonych pacjentów z bardzo przedwczesną CAD.

Badanie część 3: Ocena możliwych genetycznych „czynników ryzyka” w rodzinach o wysokiej częstości występowania CAD przy użyciu analizy sekwencjonowania egzomu.

Hipotezy Hipoteza 1: Pacjenci z bardzo przedwczesną CAD mają modyfikowalne czynniki ryzyka, które są leczone nieodpowiednio w stosunku do aktualnych wytycznych krajowych.

Hipoteza 2: Występowanie bardzo przedwczesnej CAD wiąże się z rodzinną kumulacją choroby.

Hipoteza 3: Zastosowanie sekwencjonowania egzomu w wybranych rodzinach z fenotypową ciężką przedwczesną CAD pozwoli zidentyfikować warianty genetyczne powodujące chorobę.

Metoda Badanie część 1. Pacjenci cierpiący na przedwczesną CAD, którzy przeszli przezskórną interwencję wieńcową (PCI) lub operację pomostowania aortalno-wieńcowego (CABG) wykonaną przed 40 rokiem życia, zostaną wybrani z Rejestru Serca w Zachodniej Danii (VDHD). W szczególności pacjenci leczeni w Szpitalu Uniwersyteckim Aarhus (AUH) w Skejby z powodu zawału mięśnia sercowego (MI), stabilnej lub niestabilnej dusznicy bolesnej w okresie od 1 stycznia 2007 do 31 grudnia 2013 będą rekrutowani i oceniani pod kątem występowania zarejestrowanych czynników ryzyka (próba wskazuje aplikację. 170 pacjentów rocznie). Po uzyskaniu świadomej zgody wezmą udział w tym badaniu. Uczestnicy zostaną przesłuchani w poradni kardiologicznej przy ul. Kardiologii, AUH, Skejby. Zostaną zebrane następujące informacje o czynnikach ryzyka sercowo-naczyniowego; wywiad rodzinny w kierunku miażdżycy (zostanie przeprowadzona analiza rodowodowa i rozpoznanie przypadków CVD), wcześniejszy wywiad chorobowy (tj. nadciśnienie, dyslipidemia, cukrzyca, przewlekła choroba nerek, choroba naczyniowa), palenie tytoniu i liczba paczkolat, spożycie alkoholu i objawy naczyniowe (tj. dusznica bolesna, chromanie przestankowe). Zebrane informacje zostaną porównane z informacjami zarejestrowanymi w dokumentacji pacjentów i VDHD. Ponadto gromadzone będą informacje o lokalizacji leczenia inwazyjnego, stopniu zaawansowania choroby wieńcowej oraz najnowszym oszacowaniu frakcji wyrzutowej lewej komory (LVEF). Wszyscy pacjenci zostaną zbadani pod kątem wzrostu i wagi, obwodu brzucha oraz pobrane zostaną próbki krwi. Zostanie wykonany automatyczny pomiar ciśnienia tętniczego w gabinecie (aparatem Bp-TRU). Zmierzone zostaną poziomy kreatyniny (e-GFR), cholesterolu całkowitego, cholesterolu LDL, cholesterolu HDL, trójglicerydów i HbA1c. Ponadto próbka krwi zostanie zapisana do prospektywnej analizy DNA (poniżej). Badacze ocenią, w jakim stopniu cele leczenia zostały osiągnięte zgodnie z krajowymi wytycznymi. Analiza zostanie poprawiona, aby odzwierciedlić zmiany w tych wytycznych dotyczących leczenia, które miały miejsce w ostatnich latach.

Badanie część 2. Pacjenci z badania 1 (pacjenci indeksowi) proszeni są o nawiązanie kontaktu z krewnymi I stopnia w wieku od 30 do 65 lat w celu udziału w badaniu część 2. Forma kontaktu jest zgodna z wytycznymi oddziału dotyczącymi kontaktu z rodziną członkowie. Krewni pierwszego stopnia, którzy wyrażą świadomą zgodę, zostaną włączeni do badania część 2 (uczestnicy). Zostaną uzyskane dane pacjentów od uczestników, u których zdiagnozowano miażdżycę. Kryteriami wykluczenia będą wcześniejsze rozpoznanie CAD za pomocą CTCA lub przezskórnej angiografii wieńcowej, przewlekłe migotanie przedsionków, niewydolność nerek (e-GFR < 30 ml/min), otyłość (BMI > 30 jest wskaźnikiem, ale geometria ciała odgrywa rolę), wcześniejszy alergiczny środek kontrastowy Reakcja a ciąża. Tradycyjny profil ryzyka i próbki krwi zostaną pobrane jak w części 1 badania. Przed CTCA ocenia się LVEF za pomocą echokardiografii. CTCA wykonuje się zgodnie ze standardowym protokołem obowiązującym w oddziale. Początkowo wykonuje się tomografię komputerową bez kontrastu w celu oceny zwapnienia tętnicy wieńcowej metodą Agatstona. Następnie wykonuje się badanie z użyciem 70 ml kontrastu zawierającego jod. Zastosowane zostaną protokoły modulacji EKG i redukcji promieniowania, tak aby przeciętny uczestnik (70 kg) mógł spodziewać się dawki promieniowania poniżej 3 mSv. Analiza badania kontrastowego skupi się na zautomatyzowanej i półautomatycznej ocenie ilościowej płytki nazębnej. Zmiany niezwiązane z sercem zostaną opisane zgodnie ze standardowymi procedurami oddziału przez Dep. Radiologii, AUH, Skejby oraz interwencja medyczna wykonywana zgodnie ze wskazaniami klinicznymi.

Badanie część 3. Zostaną wybrane rodziny z badań część 1 i 2, które zostaną uznane za poważnie dotknięte miażdżycą tętnic, ocenione na podstawie wielkości rodziny, liczby chorych i ciężkości choroby. Członkowie rodziny (pacjenci z indeksu, krewni pierwszego stopnia i ewentualnie krewni pierwszego stopnia), którzy wyrażą na to zgodę, zostaną włączeni do części 3 badania. Podjęta zostanie próba kontaktu z krewnymi, którzy nie uczestniczyli jeszcze w projekcie, tak jak w części badania 2. A zostanie poproszony o tradycyjny profil ryzyka i próbkę krwi do analizy DNA (sekwencjonowanie egzomu), jeśli nie została ona jeszcze uzyskana. Analiza odbywa się w Zakładzie Medycyny Molekularnej (MOMA), AUH, Skejby, który dysponuje niezbędnym sprzętem, oprogramowaniem i doświadczeniem laboratoryjnym do wykonywania badań oraz analiz bioinformatycznych. Najpierw genomowe DNA jest oczyszczane i fragmentowane do wielkości 200-500 par zasad. Biblioteki Illumina TruSeq (do użytku z sekwencjonowaniem egzomu) zostaną wyprodukowane w robocie Caliper Sciclone, w którym odbędzie się również wzbogacenie egzomu Nimblegens EZ w roztworze zestawu Exome v3. Analiza danych będzie miała miejsce w MOMA pod kierunkiem personelu MOMA. Pierwsze sekwencje zostaną przycięte i dopasowane do ludzkiego genomu. Po drugie, dopasowania zostaną dostrojone przed wywołaniem wariantów, w tym wariantów pojedynczych nukleotydów i insercji/delecji o różnej wielkości. Interpretacja danych odbywać się będzie w oprogramowaniu Cartagenia, które daje dostęp do wielu publicznych i komercyjnych baz danych, a także daje możliwość integracji prywatnych baz danych. Warianty będą filtrowane na podstawie częstotliwości, pozycji genu, istniejącej wiedzy i różnych narzędzi do przewidywania in silico. Ewentualne znaczące odkrycia zostaną potwierdzone przez sekwencjonowanie Sangera.

Analiza statystyczna W znalezionych genotypach z części 3 badania przeprowadza się analizę sprzęgania w celu zidentyfikowania regionów w genomie wspólnych dla osobników dotkniętych chorobą. Zastosowanie analizy rodowodowej i analizy sprzęgania znacznie zmniejsza kandydujące interwały w genomie, zwiększając w ten sposób moc statystyczną do identyfikacji wariantów powodujących choroby nawet w małych rodzinach. Ponieważ nie jest znana dokładna architektura genetyczna i struktura rodziny włączonych rodzin, dokładne obliczenie mocy statystycznej nie będzie możliwe. W przypadku dominującej choroby monogenetycznej filtracja oparta wyłącznie na lokalizacji (sprzęganiu) zmniejsza potencjalne warianty o ok. 80% w parze dotkniętego rodzeństwa io ponad 95% w przypadku chorób monogenetycznych recesywnych, jeśli dotknięte są osoby z rodzin wsobnych.

Biobank badań Biobank badań zostanie utworzony w ramach Instytutu Medycyny Klinicznej Zdrowia Uniwersytetu w Aarhus. Próbka 2 x 4 ml (BD Vacutainer K3E 7,2 mg ref. 368860) i 1 x 4 ml (BD Vacutainer SST II Advance, ref. 367957) od wszystkich uczestników badań 1-3 zostanie przesłana do biobanku do dalszej analizy. Pobieranie krwi odbywa się w AUH, Skejby lub szklance, a pacjent otrzymuje zwrotną kopertę w celu pobrania krwi przez lekarza rodzinnego. Próbka jest kriokonserwowana i przeprowadzane jest sekwencjonowanie egzomu uczestników części 3 badań. Biobank będzie kontynuowany po zakończeniu projektu na potrzeby przyszłych badań. W przypadku przyszłej analizy zachowanego materiału Komisja Etyki Badań i uczestnik (jeśli jeszcze żyje) zostaną wcześniej zauważeni. Zezwolenie na przechowywanie materiału biologicznego będzie stosowane w sposób ciągły w określonych odstępach czasu przez Duńską Agencję Ochrony Danych. Każdy uczestnik może w każdej chwili zażądać zniszczenia materiału biologicznego.