Doença Arterial Coronária Prematura - Aspectos Genéticos Clínicos e Moleculares (PIHS)

Objetivos Estudo parte 1: Quantificar a ocorrência de fatores de risco de aterosclerose entre pacientes com DAC muito prematura na região da Dinamarca Central e investigar até que ponto os pacientes são tratados de acordo com as diretrizes nacionais.

Parte 2 do estudo: Investigar a ocorrência de DAC entre parentes de 1º grau de meia-idade de pacientes estabelecidos com DAC muito prematura.

Estudo parte 3: Avalie possíveis "fatores de risco" genéticos em famílias com alta prevalência de DAC usando análise de sequenciamento de exoma.

Hipóteses Hipótese 1: Pacientes com DAC muito prematura têm fatores de risco modificáveis, que são tratados inadequadamente em relação às diretrizes nacionais atuais.

Hipótese 2: A ocorrência de DAC muito precoce está associada ao acúmulo familiar da doença.

Hipótese 3: O uso do sequenciamento do exoma em famílias selecionadas com DAC prematura grave fenotípica identificará variantes genéticas causadoras de doenças.

Método Estudo parte 1. Os pacientes que sofrem de DAC prematura que tiveram uma intervenção coronária percutânea (ICP) ou operação de revascularização do miocárdio (CABG) realizada antes dos 40 anos de idade serão selecionados do Registro Cardíaco da Dinamarca Ocidental (VDHD). Especificamente, pacientes tratados no Aarhus University Hospital (AUH) em Skejby para infarto do miocárdio (IM), angina pectoris estável ou instável no período de 1º de janeiro de 2007 a 31 de dezembro de 2013 serão recrutados e a ocorrência de fatores de risco registrados será avaliada (amostra indica ap. 170 pacientes por ano). Depois que o consentimento informado for obtido, eles participarão deste estudo de pesquisa. Os participantes serão entrevistados no ambulatório cardiológico do Dep. de Cardiologia, AUH, Skejby. As seguintes informações sobre fatores de risco cardiovascular serão coletadas; histórico familiar de aterosclerose (uma análise de pedigree será realizada e os casos de DCV diagnosticados serão identificados), histórico médico anterior (ou seja, hipertensão, dislipidemia, diabetes, doença renal crónica, doença vascular), tabagismo e número de maços anos, consumo de álcool e sintomas vasculares (i.e. angina pectoris, claudicação intermitente). As informações coletadas serão comparadas com as informações registradas nos prontuários e VDHD. Além disso, serão coletadas informações sobre a localização do tratamento invasivo, o grau de DAC e a última estimativa da fração de ejeção do ventrículo esquerdo (LVEF). Todos os pacientes serão examinados quanto à altura e peso, circunferência abdominal e uma amostra de sangue será coletada. Será realizada uma medição automatizada da pressão arterial no consultório (dispositivo Bp-TRU). Serão medidos os níveis de creatinina (e-GFR), colesterol total, colesterol LDL, colesterol HDL, triglicerídeos e HbA1c. Além disso, uma amostra de sangue será salva para análise prospectiva de DNA (abaixo). Os investigadores avaliarão até que ponto os objetivos do tratamento foram alcançados de acordo com as diretrizes nacionais. A análise será corrigida para refletir as mudanças nessas diretrizes de tratamento, que ocorreram nos últimos anos.

Parte 2 do estudo. Solicita-se aos pacientes do estudo 1 (pacientes índices) que estabeleçam contato com parentes de 1º grau entre 30 e 65 anos de idade com o objetivo de participar da parte 2 do estudo. A forma de contato segue as diretrizes regulares do departamento para contato com a família membros. Os parentes de 1º grau que derem seu consentimento informado serão incluídos na parte 2 do estudo (participantes). Os registros dos pacientes dos participantes diagnosticados com aterosclerose serão obtidos. Os critérios de exclusão serão diagnóstico anterior de DAC por CTCA ou angiografia coronária transluminal percutânea, fibrilação atrial crônica, insuficiência renal (e-GFR < 30ml/min), obesidade (IMC > 30 é indicativo, mas a geometria corporal desempenha um papel), contraste alérgico anterior reação e gravidez. Um perfil de risco tradicional e amostras de sangue serão coletados como na parte 1 do estudo. Antes da CTCA, a FEVE é estimada por ecocardiografia. A CTCA é realizada de acordo com o protocolo padrão do departamento. Inicialmente a tomografia computadorizada é realizada sem contraste para estimar a calcificação coronariana pelo método de Agatston. Depois, uma varredura é realizada com 70 ml de contraste contendo iodo. Modulação de ECG e protocolos de redução de radiação serão usados ​​para que um participante médio (70 kg) possa esperar receber uma dose de radiação abaixo de 3 mSv. A análise do estudo de contraste se concentrará na quantificação automática e semiautomática da placa. Achados não cardíacos serão descritos de acordo com os procedimentos padrão do departamento pelo Dep. of Radiology, AUH, Skejby, e intervenção médica realizada conforme indicação clínica.

Parte 3 do estudo. Serão selecionadas as famílias das partes 1 e 2 do estudo, consideradas gravemente afetadas pela aterosclerose, avaliadas com base no tamanho da família, número de afetados e gravidade da doença. Os membros da família (pacientes indexados, parentes de 1º grau e, se relevante, também seus parentes de 1º grau) que consentirem, serão incluídos na parte 3 do estudo. O contato com parentes que ainda não participaram do projeto será tentado como na parte 2 do estudo. perfil de risco tradicional e uma amostra de sangue para análise de DNA (sequenciamento do exoma) serão solicitados caso ainda não tenham sido obtidos. A análise ocorre no Departamento de Medicina Molecular (MOMA), AUH, Skejby, que possui o equipamento, software e experiência de laboratório necessários para realizar os testes, bem como a análise bioinformática. Primeiro, o DNA genômico é purificado e fragmentado em um tamanho de 200 a 500 pares de bases. As bibliotecas Illumina TruSeq (para serem usadas com o sequenciamento do exoma) serão produzidas em um robô Caliper Sciclone, onde também ocorrerá o enriquecimento do exoma com Nimblegens EZ em solução Exome v3 kit. A análise de dados será realizada no MOMA sob a orientação da equipe do MOMA. As primeiras sequências serão cortadas e alinhadas ao genoma humano. Em segundo lugar, os alinhamentos serão ajustados antes que as variantes sejam chamadas, incluindo variantes de nucleotídeo único e inserções/exclusões de vários tamanhos. A interpretação dos dados será realizada no programa de software Cartagenia, que dá acesso a uma abundância de bases de dados públicas e comerciais e também oferece a oportunidade de integrar bases de dados privadas. As variantes serão filtradas com base na frequência, posição do gene, conhecimento existente e diferentes ferramentas de previsão in silico. Possíveis achados significativos serão validados pelo sequenciamento de Sanger.

Análise estatística Nos genótipos encontrados na parte 3 do estudo, a análise de acoplamento é realizada para identificar regiões no genoma compartilhadas por indivíduos afetados pela doença. O uso de análise de pedigree e análise de acoplamento reduz substancialmente os intervalos candidatos no genoma, aumentando assim o poder estatístico para identificar variantes causadoras de doenças mesmo em famílias pequenas. Como a arquitetura genética precisa e a estrutura familiar das famílias incluídas não são conhecidas, o cálculo exato do poder estatístico não será possível. No caso de uma doença monogenética dominante, uma filtragem baseada apenas na localização (acoplamento) reduz as variantes potenciais por app. 80% dentro de um par de irmãos afetados e em mais de 95% para doenças recessivas monogenéticas, se indivíduos afetados de famílias endogâmicas.

Biobanco de pesquisa Um biobanco de pesquisa será estabelecido no Instituto de Medicina Clínica, Saúde da Universidade de Aarhus. Uma amostra de 2x4 ml (BD Vacutainer K3E 7,2mg Ref. 368860) e 1x4ml (BD Vacutainer SST II Advance, Ref. 367957) de sangue de todos os participantes nos estudos 1-3 será submetida ao biobanco para análise posterior. A amostragem é realizada no AUH, Skejby ou em um copo e um envelope de retorno será enviado ao paciente para coleta de sangue pelo médico de família. A amostra é criopreservada e o sequenciamento do exoma é realizado nos participantes da parte 3 do estudo. O biobanco será mantido após o término do projeto para fins de pesquisas futuras. Em caso de futura análise do material preservado, o Comitê de Ética em Pesquisa e o participante (se ainda estiver vivo) serão previamente notificados. A permissão para armazenar o material biológico será aplicada continuamente de acordo com intervalos especificados pela Agência Dinamarquesa de Proteção de Dados. Todos os participantes poderão exigir a destruição de seu material biológico a qualquer momento.