人体对肩突硬蜱叮咬的免疫反应

研究说明：

本研究旨在开发一种人类获得性蜱抗性模型，表征蜱相关皮肤免疫的获得，并监测肩突硬蜱叮咬的先天性和适应性免疫反应。 该研究将是一项前瞻性、非随机、单中心研究，在美国国立卫生研究院 (NIH) 临床中心进行。 它将根据研究设备豁免 (IDE) G210153 进行，并将根据美国国家过敏和传染病研究所进行监测

疾病 (NIAID) 和 NIH 法规。 参与者（20 名成年健康志愿者）将接受最多 3 次蜱喂食，间隔 2 至 8 周。 在第一个蜱虫放置程序后的 1 天（早）和 3-4 天（晚）收集蜱虫叮咬部位的两次穿孔皮肤活检（2-3 毫米）。 未受影响部位的皮肤活检将作为对照进行。 在第 2 次和第 3 次蜱虫放置程序后的第 2-3 天，将收集来自蜱虫叮咬部位的两个钻孔皮肤活检组织（2-3 毫米）。 此外，将收集血液以评估对蜱唾液蛋白的全身免疫反应。 还将在每个时间点收集蜱虫，并分析基因表达以确定人类皮肤反应对蜱虫的影响。

将通过以下方式评估对蜱虫叮咬的抵抗力的变化：

对蜱叮咬的局部反应（瘙痒）

喂食的蜱虫数量

将使用以下方法评估皮肤中免疫反应和细胞募集的变化：

使用 RNAseq 差异表达免疫转录物和其他皮肤相关转录物

常规组织学和免疫组织化学

数字空间分析使用高复杂度平台确定细胞类型和其他免疫标记

全身免疫反应的变化将通过以下方式评估：

将通过酶联免疫吸附测定 (ELISA) 和

免疫印迹

新颖的最先进的高分辨率技术，可以在表型和功能上深入表征随着时间的推移对蜱虫叮咬的免疫反应。

蜱转录组学概况的变化将通过以下方式评估：

RNAseq：核糖核酸 (RNA) 在从受试者和未暴露的蜱虫身上移除后，将从蜱虫中分离出来。

差异表达谱将由 NanoString 执行和验证

主要目标：

1. 建立人类获得性蜱抗性模型
2. 继续使用实验室饲养的肩胛硬蜱幼虫评估蜱喂养人类的安全性

探索目标：

1. 单次蜱暴露后肩突硬蜱叮咬皮肤部位早期和晚期免疫反应的比较。
2. 确定蜱虫反复进食对人体皮肤蜱虫叮咬部位免疫反应和蜱虫抗性发展的影响。
3. 分析多次暴露于蜱虫后参与者对蜱虫叮咬的全身免疫反应的演变，并验证可靠的蜱虫暴露生物标志物的发展。
4. 分析取食人类的肩胛硬蜱幼虫的基因表达并确定受试者免疫反应的影响

反复咬伤幼虫的基因表达。

主要终点：

1. 在蜱虫放置的前 24 小时内，在三个位置上的蜱虫附着部位的瘙痒，以正斜率测量

   在数字评分的三个位置上。 其他瘙痒评分在 24 小时和第 2-4 天的斜率，以及从参与者那里收集到的三个放置的蜱虫数量也将被测量。

2. 使用报告工具和发起人安全监控器监控安全不良事件 (AE)。

探索性终点：

1. 将获得的皮肤活检结果与第一次刻度放置进行比较。 我们的假设是，以下各项之间将存在差异表型、转录组学和免疫组织化学差异：

   • 暴露（第 1 天被咬伤的皮肤）和未暴露（未被咬伤的皮肤）
   • 暴露（第 3-4 天被咬伤的皮肤）和未暴露（未被咬伤的皮肤）
   • 暴露（第 1 天咬伤皮肤）和暴露（第 3-4 天咬伤皮肤）

   变化的衡量将通过以下方式评估：

   • 使用 RNAseq 差异表达免疫转录物和其他皮肤相关转录物
   • 常规组织学和免疫组织化学
   • 数字空间分析使用高复杂度平台确定细胞类型和其他免疫标记

2. 比较第 1、2 和 3 次蜱暴露之间局部免疫反应和细胞募集的变化，并与瘙痒和附着蜱的数量以及进食状态的测量相关联。

   我们假设时间点之间的差异将随着多次曝光而变得更加明显。 我们假设会有不同的表型和

   之间的转录组学差异：

   暴露（2-3天咬伤皮肤，暴露2）和暴露（2-3天咬伤皮肤，暴露3）

   将这些变化与对蜱虫进食的抵抗措施相关联（瘙痒、附着的蜱虫的数量和进食水平）。

3. 比较第 1、2 和 3 次蜱暴露之间针对肩突硬蜱唾液蛋白抗原的抗体反应的发展，并将针对蜱唾液蛋白的抗体与抵抗措施（瘙痒、红斑、喂食蜱的数量）相关联。

   使用免疫分型、蛋白质组学等高分辨率技术探索血液中宿主反应的发展

   转录组学并比较第 1、第 2 和第 3 次滴答暴露之间的反应。

4. 使用 RNAseq 技术，测量在早期时间点（1 天）与晚期时间点（3-4 天）喂食的蜱虫与未喂食的蜱虫以及在第 1、第 2 和第 3 个位置喂食的蜱虫的基因表达变化。 瘙痒症与蜱基因表达变化的相关性。