Иммунный ответ человека на укусы клещей Ixodes Scapularis

Описание исследования:

Это исследование направлено на разработку модели приобретенной устойчивости к клещам у людей, характеристику приобретения кожного иммунитета, связанного с клещами, и мониторинг врожденного и адаптивного иммунного ответа на укусы клещей Ixodes scapularis. Исследование будет проспективным, нерандомизированным, одноцентровым исследованием, проводимым в Клиническом центре Национального института здравоохранения (NIH). Это будет проводиться в соответствии с разрешением на использование исследовательского устройства (IDE) G210153 и будет контролироваться в соответствии с требованиями Национального института аллергии и инфекционных заболеваний.

Болезни (NIAID) и правила NIH. Участники (20 взрослых здоровых добровольцев) будут подвергаться кормлению клещей до 3 раз с интервалом от 2 до 8 недель. Два образца биопсии кожи (2-3 мм) из мест укусов клещей будут взяты на 1 день (ранний) и 3-4 день (поздний) после первой процедуры размещения клеща. Биопсия кожи непораженного участка будет выполняться в качестве контроля. Два образца биопсии кожи (2-3 мм) из мест укусов клещей будут взяты на 2-3 день после процедур размещения 2-го и 3-го клещей. Кроме того, будет взята кровь для оценки системного иммунного ответа на белки слюны клеща. Клещи также будут собираться в каждый момент времени, и будет анализироваться экспрессия генов, чтобы определить влияние реакции кожи человека на клещей.

Изменения устойчивости к укусам клещей будут оцениваться по:

Местная реакция на укус клеща (зуд)

Количество накормленных клещей

Изменения иммунного ответа и рекрутирования клеток в коже будут оцениваться с использованием:

Дифференциальная экспрессия иммунных транскриптов и других транскриптов, связанных с кожей, с использованием RNAseq

Традиционная гистология и иммуногистохимия

Цифровое пространственное профилирование для определения типа клеток и других иммунных маркеров с использованием платформы high-plex

Изменения в системном иммунном ответе будут оцениваться по:

Измерение антител против белков слюны клещей будет оцениваться с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) и

вестерн-блот

Новые современные технологии высокого разрешения для глубокой характеристики иммунного ответа на укусы клещей с течением времени, как фенотипически, так и функционально.

Изменения в транскриптомном профиле клещей будут оцениваться по:

RNAseq: рибонуклеиновая кислота (РНК) будет выделена из клещей после того, как они будут удалены от субъектов и не подвергшихся воздействию клещей.

Профиль дифференциального выражения будет выполняться и проверяться NanoString.

Основные цели:

1. Разработать модель приобретенной устойчивости к клещам у людей
2. Продолжать оценивать безопасность кормления клещей с использованием выращенных в лаборатории личинок Ixodes scapularis у людей.

Исследовательские цели:

1. Сравнение раннего и позднего иммунного ответа в месте укуса Ixodes scapularis на коже после однократного воздействия клеща.
2. Определить влияние многократного кормления клещей на иммунный ответ в месте укуса клеща в коже человека и развитие клещевой устойчивости.
3. Проанализируйте эволюцию системного иммунного ответа на укус клеща у участников после многократного воздействия клеща и подтвердите разработку надежных биомаркеров воздействия клеща.
4. Анализ экспрессии генов личинок Ixodes scapularis, питающихся людьми, и определение эффектов иммунного ответа субъектов

неоднократно укусы на экспрессии гена личинок.

Основные конечные точки:

1. Зуд в месте прикрепления клеща в первые 24 часа размещения клеща в течение трех размещений, измеренный по положительному наклону

   по трем местам в числовом рейтинге. Также будут измеряться наклон других оценок зуда через 24 часа и на 2-4 день, а также количество прикрепившихся клещей, собранных у участников в течение трех размещений.

2. Отслеживайте неблагоприятные события (НЯ) с точки зрения безопасности, используя инструменты отчетности и мониторы безопасности спонсоров.

Исследовательские конечные точки:

1. Сравните результаты биопсии кожи, полученные при первом размещении клеща. Наша гипотеза состоит в том, что между:

   • Открытые (укушенная кожа в 1-й день) и неэкспонированные (неукушенная кожа)
   • Открытые (укушенная кожа на 3-4 день) и неэкспонированные (неукушенная кожа)
   • Открытый (укушенная кожа на 1-й день) и открытый (укушенная кожа на 3-4-й день)

   Измерение изменений будет оцениваться по:

   • Дифференциальная экспрессия иммунных транскриптов и других транскриптов, связанных с кожей, с использованием RNAseq
   • Традиционная гистология и иммуногистохимия
   • Цифровое пространственное профилирование для определения типа клеток и других иммунных маркеров с использованием платформы high-plex

2. Сравните изменения в местном иммунном ответе и рекрутировании клеток между 1-м, 2-м и 3-м воздействием клеща и сопоставьте с показателями зуда и количества прикрепленных клещей и статусом питания.

   Мы предполагаем, что различия между временными точками станут более заметными при многократном воздействии. Мы предполагаем, что будут дифференцированные фенотипические и

   транскриптомные различия между:

   Экспонированные (укушенная кожа на 2-3-й день, экспозиция 2) и экспонированные (укушенная кожа на 2-3-й день, экспозиция 3)

   Соотнесите эти изменения с показателями устойчивости к питанию клещей (зуд, количество и уровень питания прикрепившихся клещей).

3. Сравните развитие гуморального ответа против антигенов белков слюны Ixodes scapularis между 1-м, 2-м и 3-м контактами с клещами и сопоставьте антитела против белков слюны клещей с показателями резистентности (зуд, эритема, количество накормленных клещей).

   Изучите развитие ответа хозяина в крови с использованием технологий высокого разрешения, таких как иммунофенотипирование, протеомика и

   транскриптомику и сравнить ответы между 1-м, 2-м и 3-м воздействиями тика.

4. Используя технологию RNAseq, измерьте изменения в экспрессии генов клещей, которых кормили в ранний момент времени (1 день) по сравнению с поздним моментом времени (3-4 дня) по сравнению с некормленными клещами и клещами, которых кормили на 1-м, 2-м и 3-м местах. Корреляция зуда и изменения экспрессии гена клеща.