Lidská imunitní reakce na kousnutí klíštětem Ixodes Scapularis

Popis studie:

Tato studie si klade za cíl vyvinout model získané rezistence klíšťat u lidí, charakterizovat získání kožní imunity související s klíšťaty a monitorovat vrozenou a adaptivní imunitní odpověď kousnutí klíštětem Ixodes scapularis. Studie bude prospektivní, nerandomizovaná, jednocentrická studie provedená v klinickém centru Národního institutu zdraví (NIH). Bude prováděna v rámci Investigational Device Exemption (IDE) G210153 a bude monitorována podle Národního institutu pro alergie a infekční choroby.

Nemoci (NIAID) a předpisy NIH. Účastníci (20 dospělých zdravých dobrovolníků) podstoupí až 3 krmení klíšťat s odstupem 2 až 8 týdnů. Dvě biopsie kůže (2–3 mm) z míst kousnutí klíštětem budou odebrány 1 den (brzy) a 3–4 dny (pozdně) po prvním umístění klíštěte. Jako kontrola budou provedeny kožní biopsie z nepostiženého místa. Dvě biopsie kůže (2–3 mm) z míst kousnutí klíštětem budou odebrány 2.–3. den po 2. a 3. postupu umístění klíštěte. Kromě toho bude odebrána krev k vyhodnocení systémové imunitní odpovědi na proteiny slin klíšťat. Klíšťata budou také odebrána v každém časovém bodě a bude analyzována genová exprese, aby se určil účinek reakce lidské kůže na klíšťata.

Změny odolnosti vůči kousnutí klíštětem budou hodnoceny:

Místní reakce na kousnutí klíštěte (pruritus)

Počet krmených klíšťat

Změny v imunitní odpovědi a náboru buněk v kůži budou hodnoceny pomocí:

Diferenciální exprese imunitních transkriptů a dalších transkriptů spojených s kůží pomocí RNAseq

Konvenční histologie a imunohistochemie

Digitální prostorové profilování k určení typu buněk a dalších imunitních markerů pomocí platformy s vysokým plexem

Změny v systémové imunitní odpovědi budou hodnoceny:

Měření protilátek proti proteinům slin klíšťat bude hodnoceno enzymatickou imunoanalýzou (ELISA) a

western blot

Nové nejmodernější technologie s vysokým rozlišením, které hluboce charakterizují imunitní odpověď na kousnutí klíštětem v průběhu času, a to jak fenotypově, tak funkčně.

Změny v transkriptomickém profilu klíšťat budou hodnoceny:

RNAseq: Ribonukleová kyselina (RNA) bude izolována z klíšťat poté, co byla odstraněna ze subjektů a neexponovaných klíšťat.

Profil diferenciální exprese bude proveden a ověřen pomocí NanoString

Primární cíle:

1. Vyvinout model získané rezistence klíšťat u lidí
2. Pokračovat v hodnocení bezpečnosti krmení klíšťat pomocí laboratorně odchované larvy Ixodes scapularis u lidí

Průzkumné cíle:

1. Srovnání časné a pozdní imunitní odpovědi v místě kůže kousnutí Ixodes scapularis po jednorázové expozici klíštěte.
2. Určete účinky opakovaného krmení klíšťaty na imunitní odpověď v místě kousnutí klíštětem v lidské kůži a vývoj rezistence klíšťat.
3. Analyzujte vývoj systémové imunitní odpovědi na kousnutí klíštětem u účastníků po vícenásobné expozici klíšťatům a ověřte vývoj spolehlivých biomarkerů expozice klíšťatům.
4. Analyzujte genovou expresi larev Ixodes scapularis živící se lidmi a určete účinky imunitní odpovědi subjektů

opakovaně kousnutý na expresi genu larev.

Primární koncové body:

1. Svědění v místě přisátí klíštěte během prvních 24 hodin umístění klíštěte přes tři umístění, měřeno kladným sklonem

   přes tři umístění číselného hodnocení skóre. Bude také měřen sklon ostatních skóre svědění za 24 hodin a v den 2-4 a počet přisátých klíšťat získaných od účastníků během tří umístění.

2. Monitorujte bezpečnostní nežádoucí události (AE) pomocí nástrojů pro hlášení a Sponzor bezpečnostních monitorů.

Průzkumné koncové body:

1. Porovnejte výsledky z kožních biopsií získaných při prvním umístění klíštěte. Naše hypotéza je, že budou existovat rozdílné fenotypové, transkriptomické a imunohistochemické rozdíly mezi:

   • Odkrytá (pokousaná kůže 1. den) a neexponovaná (nepokousaná kůže)
   • Odkrytá (pokousaná kůže 3-4 den) a neexponovaná (nepokousaná kůže)
   • Odkrytá (pokousaná kůže 1. den) a exponovaná (pokousaná kůže 3.–4. den)

   Měření změn posoudí:

   • Diferenciální exprese imunitních transkriptů a dalších transkriptů spojených s kůží pomocí RNAseq
   • Konvenční histologie a imunohistochemie
   • Digitální prostorové profilování k určení typu buněk a dalších imunitních markerů pomocí platformy s vysokým plexem

2. Porovnejte změny v lokální imunitní odpovědi a náboru buněk mezi 1., 2. a 3. expozicí klíšťat a korelujte s mírami svědění a počtu přisátých klíšťat a stavem krmení.

   Předpokládáme, že rozdíly mezi časovými body budou při vícenásobné expozici výraznější. Předpokládáme, že budou existovat diferenciální fenotypové a

   transkriptomické rozdíly mezi:

   Exponovaná (pokousaná kůže 2.–3. den, expozice 2.) a exponovaná (kousnutá kůže 2.–3. den, expozice 3.)

   Korelujte tyto změny s mírami odolnosti vůči krmení klíšťaty (svědění, počet a úroveň krmení přisátých klíšťat).

3. Porovnejte vývoj protilátkových odpovědí proti antigenům slinných proteinů Ixodes scapularis mezi 1., 2. a 3. expozicí klíšťat a korelujte protilátky proti proteinům slin klíšťat s mírami rezistence (svědění, erytém, počet nakrmených klíšťat).

   Prozkoumejte vývoj reakce hostitele v krvi pomocí technologií s vysokým rozlišením, jako je imunofenotypizace, proteomika a

   transkriptomiky a porovnejte odezvy mezi 1., 2. a 3. expozicí klíštěte.

4. Pomocí technologie RNAseq měřte změny v genové expresi klíšťat krmených v časném časovém bodě (1 den) oproti pozdnímu časovému bodu (3-4 dny) vs. nekrmených klíšťat a klíšťat krmených v 1., 2. a 3. umístění. Korelace svědění a změn v expresi genu klíšťat.