LiveSpo Navax 支持治疗 RSV 和细菌合并感染儿童肺炎的疗效

肺炎是儿童常见病，也是幼儿特别是1岁以下儿童、婴儿和营养不良儿童死亡的主要原因之一。 据世界卫生组织 (WHO) 统计，每年估计有 1290 万名儿童死亡，其中 430 万人 (33.4%) 死于肺炎。 在越南，肺炎的死亡率是呼吸系统疾病中最高的（75%），而总体死亡率为 30-35%。 统计显示，平均一个孩子每年会经历3至5次急性呼吸道感染，其中肺炎1至2次。 呼吸道合胞病毒（RSV）感染和细菌合并感染是重症肺炎的主要原因，合并感染率为26.3%至43.6%。 常见的相关细菌包括肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌和卡他莫拉菌。 这些细菌可以利用 RSV 引起的呼吸道损伤侵入下呼吸道并引起继发感染。

目前，尚无针对 RSV 感染儿童的疫苗或特效治疗方法，对于出现呼吸衰竭的儿童，通常建议进行氧疗。 使用单克隆抗体帕利珠单抗和抗病毒核苷酸药物利巴韦林被认为对儿童来说太昂贵或有风险，仅建议高危患者使用。 细菌合并感染通常需要根据可疑或已知病原体进行抗生素治疗，但抗生素的使用具有显着的副作用，并引起人们对耐药性发展的担忧。

近年来，益生菌作为呼吸道感染预防和支持疗法的有前景且安全的候选药物而受到欢迎，旨在帮助治疗和减少呼吸道感染。 益生菌是活的微生物，摄入足够量后可提供健康益处，传统上用于促进肠道健康。 然而，它们在呼吸道感染（特别是 RSV 肺炎）中的潜在作用尚未得到广泛探讨。 一些研究表明，某些益生菌菌株可以直接与病毒相互作用，捕获病毒，诱导二次生长以抑制病毒的进入和生长，或调节免疫反应以降低呼吸道感染的风险。 然而，口服益生菌对婴儿呼吸道的影响通常是延迟的（通常大约 3-12 个月），并且主要用于预防，而不是作为 ARTI 治疗的辅助手段。 因此，在 ARTI 治疗中需要益生菌的替代递送途径。 在我们最近的研究中，我们已经证明鼻喷芽孢杆菌液体形式益生菌（LiveSpo Navax 含有超过 50 亿个枯草芽孢杆菌 ANA4 和 B. clausii ANA39/ 5 mL 安瓿）可以快速有效地缓解 ARTI 的症状。呼吸道合胞病毒（RSV）感染，同时在减少病毒载量和炎症方面表现出强大的影响。 这一发现首次证明，将益生菌直接喷入鼻子可能是一种快速有效的 ARTI 症状治疗方法。

在接下来的研究中，我们进行了双盲、随机、对照临床试验，以进一步检验 LiveSpo Navax 在支持治疗因 RSV 和细菌合并感染而需要氧疗的重症肺炎儿童方面的功效。

方法：将进行随机、盲法和对照临床试验。 患者父母将被要求提供有关孩子的各种信息，包括全名、性别、年龄、产科史、疫苗接种史和抗生素使用史。 获得知情同意后，将100名RSV和细菌合并感染的重症肺炎患者随机分为两组（n = 50/组）：对照组（简称“对照”组）将获得0.9% NaCl生理盐水，实验组（简称“Navax”组）将接受益生菌LiveSpo Navax。 将以盲样形式向患者提供编码喷雾，以确保研究的客观性。 将进行7天或更长时间的临床随访，并在第0天和第3天收集鼻咽样本，以评估病毒载量、共感染细菌、过度反应的细胞因子释放的调节以及益生菌孢子的存在的潜在减少在患者的鼻粘膜中。

实时PCR将用于检测鼻咽样本中的微生物。 将使用实时 PCR 常规方案进行半定量测定，以测量 RSV 载量和共感染细菌浓度的变化，该方案已根据 ISO 15189:2012 标准进行标准化，并在越南国家儿童医院常规使用。 属于枯草芽孢杆菌和克劳氏芽孢杆菌的芽孢杆菌菌株的检测将使用实时 PCR SYBR Green 测定进行，该测定通常在越南河内的 Spobiotic 研究中心进行。

ELISA 检测将用于量化促炎细胞因子水平（例如 IL-6、IL-8、TNF-α...）和免疫球蛋白 A (IgA) 水平。 将根据制造商的说明使用 ELISA 试剂盒进行测定。

鼻微生物组分析将在韩国首尔 Macrogen 的 Illumina MiSeq 平台上使用 16S rRNA 基因的新一代测序 (NGS) 进行，运行配置为 2 x 250 bp。

治疗期间，每天监测患者RSV与细菌合并感染所致重症肺炎的典型临床症状，包括流鼻涕、胸部凹陷、干啰音、湿啰音、血氧饱和度（SpO2）（%）、脉搏（次/次）。分钟）和呼吸（次/分钟），以及需要氧疗的天数......直到出院。 医生和护士将观察患者的健康状况，并将其信息记录在病历中。 在整个研究过程中，要求家长不要通过鼻腔喷雾或口服给药其他益生菌，也不要使用其他 0.9% NaCl 生理盐水喷雾剂进行鼻腔清洁。

数据收集和统计分析将涉及收集个人医疗记录并将患者信息系统地组织成数据集。 将根据 Navax 组和对照组获得的各种临床和亚临床标准评估 LiveSpo Navax 的功效，并将其与 0.9% NaCl 生理盐水进行比较。 这些标准包括症状缓解前的天数、RSV 载量的降低水平 (2^△Ct) 以及共感染细菌浓度。 目标基因的△Ct将计算为第3天的Ct（阈值循环）-第0天的Ct，而内参的Ct将被调整为在所有样本中相等。 此外，细胞因子水平降低（例如 将评估 IL-6、IL-8、TNF-α...) 和 IgA。 将使用 χ2 检验或 Fisher 精确检验对预期单元格值低于 5 的二分变量进行表格分析。 当数据不呈正态分布时，将使用 Wilcoxon 检验、t 检验或 Mann-Whitney 检验来比较连续变量。 将使用 Spearman 相关分析来评估变量之间的相关性。 将使用 GraphPad Prism v8.4.3 软件（GraphPad Software，加利福尼亚州，美国）进行统计和图形分析。 所有分析的显着性水平将设置为 p < 0.05。

预期结果：(i) LiveSpo Navax 预计可更有效地缓解 RSV 感染症状约 25%，Navax 组中 90% 的患者在干预第 3-7 天（取决于症状）时没有症状，而 65对照组患者的百分比； (ii) 与对照组患者相比，在干预第 3 天，Navax 组患者的 RSV 负荷预计会出现更显着的减少（>10 倍）。