Effekten af ​​LiveSpo Navax til understøttende behandling af lungebetændelse hos børn med RSV og bakterielle co-infektioner

Lungebetændelse er en almindelig sygdom hos børn og en af ​​de hyppigste dødsårsager hos små børn, især børn under 1 år, spædbørn og underernærede børn. Ifølge Verdenssundhedsorganisationen (WHO) dør anslået 12,9 millioner børn hvert år, hvoraf 4,3 millioner (33,4%) af disse dødsfald skyldes lungebetændelse. I Vietnam er dødeligheden af ​​lungebetændelse højest blandt luftvejssygdomme (75 %), sammenlignet med den samlede dødelighed på 30-35 %. Statistikker viser, at et barn i gennemsnit kan opleve 3 til 5 episoder af akutte luftvejsinfektioner om året, inklusive 1 til 2 episoder med lungebetændelse. Respiratorisk syncytial virus (RSV) infektion og bakteriel co-infektion er de førende årsager til alvorlig lungebetændelse, og frekvensen af ​​co-infektion kan variere fra 26,3% til 43,6%. Almindeligt associerede bakterier omfatter Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Staphylococcus aureus og Moraxella catarrhalis. Disse bakterier kan invadere de nedre luftveje og forårsage sekundære infektioner ved at drage fordel af luftvejsskader forårsaget af RSV.

I øjeblikket er der ingen vaccine eller specifik behandling tilgængelig for børn med RSV-infektion, og iltbehandling anbefales generelt til børn, der oplever respirationssvigt. Brugen af ​​det monoklonale antistof palivizumab og det antivirale nukleotidlægemiddel ribavirin anses for at være for dyrt eller risikabelt for børn og anbefales kun til højrisikopatienter. Bakterielle co-infektioner kræver ofte antibiotikabehandling baseret på mistænkte eller kendte patogener, men brugen af ​​antibiotika har betydelige bivirkninger og giver anledning til bekymring for udvikling af resistens.

I de senere år har probiotika vundet popularitet som lovende og sikre kandidater til forebyggende og understøttende behandlinger ved luftvejsinfektioner, med det formål at hjælpe med behandling og reduktion af luftvejsinfektioner. Probiotika, som er levende mikroorganismer, der giver sundhedsmæssige fordele, når de indtages i tilstrækkelige mængder, er traditionelt blevet brugt til at fremme tarmsundheden. Imidlertid er deres potentielle rolle i luftvejsinfektioner, specifikt RSV-lungebetændelse, ikke blevet grundigt undersøgt. Nogle undersøgelser tyder på, at visse stammer af probiotika kan interagere direkte med vira, fange dem, inducere sekundær vækst for at hæmme virusindtrængning og vækst eller modulere immunresponset for at reducere risikoen for luftvejsinfektioner. Ikke desto mindre er virkningen af ​​orale probiotika på spædbørns luftveje typisk forsinket (normalt omkring 3-12 måneder) og bruges primært til profylakse snarere end som et supplement til ARTI-behandling. Derfor er der behov for alternative leveringsveje for probiotika i ARTI-behandling. I vores nylige undersøgelse har vi bevist, at de næsesprayende Bacillus spore probiotika i flydende form (LiveSpo Navax indeholdende > 5 milliarder B. subtilis ANA4 og B. clausii ANA39/ 5 mL ampul) hurtigt og effektivt kan lindre symptomer på ARTIs pga. respiratorisk syncytial virus (RSV) infektion, mens den udviser stærke virkninger for at reducere virusbelastningen og inflammation. Dette fund er den første demonstration af, at sprøjtning af probiotika direkte ind i næsen kunne være en hurtig og effektiv symptomatisk behandling af ARTI'er.

I denne følgende undersøgelse gennemførte vi det dobbeltblindede, randomiserede og kontrollerede kliniske forsøg for yderligere at undersøge effektiviteten af ​​LiveSpo Navax til at understøtte behandlingen af ​​børn med svær lungebetændelse, som kræver iltbehandling på grund af RSV og bakterielle co-infektioner.

Metoder: Et randomiseret, blindt og kontrolleret klinisk forsøg vil blive udført. Patienternes forældre vil blive bedt om at give forskellige oplysninger om deres børn, herunder deres fulde navn, køn, alder, obstetrisk historie, vaccinationshistorie og antibiotikabrugshistorie. Efter indhentet informeret samtykke vil 100 patienter med svær lungebetændelse på grund af RSV og bakteriel co-infektion blive tilfældigt fordelt i to grupper (n = 50/gruppe): kontrolgruppen (benævnt "Kontrol"-gruppen) vil modtage 0,9 % NaCl fysiologisk saltvand, og forsøgsgruppen (benævnt "Navax"-gruppen) vil modtage probiotika LiveSpo Navax. Patienterne vil få en kodet spray i form af en blindprøve for at sikre undersøgelsens objektivitet. Klinisk opfølgning vil blive udført i 7 dage eller mere, og nasopharyngeale prøver vil blive indsamlet på dag 0 og dag 3 for at evaluere potentielle reduktioner i viral belastning, co-infektionsbakterier, modulering af overreageret cytokinfrigivelse og tilstedeværelsen af ​​probiotiske sporer i patientens næseslimhinde.

Real-time PCR vil blive brugt til at detektere mikroorganismer i nasopharyngeal prøver. Semi-kvantitative assays vil blive udført for at måle ændringer i RSV-belastning og co-infektion bakterielle koncentrationer ved hjælp af real-time PCR rutine protokol, som er blevet standardiseret under ISO 15189:2012 kriterier og bruges rutinemæssigt på Vietnam National Children's Hospital. Påvisning af Bacillus-stammer tilhørende B. subtilis og B. clausii vil blive udført ved hjælp af real-time PCR SYBR Green assay, som rutinemæssigt udføres på Spobiotic Research Center i Hanoi, Vietnam.

ELISA-assays vil blive brugt til at kvantificere pro-inflammatoriske cytokinniveauer (f.eks. IL-6, IL-8, TNF-alpha...) og Immunoglobulin A (IgA) niveauer. Analyserne vil blive udført ved hjælp af et ELISA-kit i henhold til producentens instruktioner.

Nasal mikrobiomanalyse vil blive udført ved hjælp af næste generations sekventering (NGS) af 16S rRNA-genet ved Macrogen i Seoul, Korea, på Illumina MiSeq-platformen med en 2 x 250 bp run-konfiguration.

Under behandlingen vil patienter dagligt blive overvåget for typiske kliniske symptomer på svær lungebetændelse på grund af RSV og bakteriel samtidig infektion, herunder løbende næse, brystdepression, tørre raser, fugtige raser, oxymetri (SpO2) (%), puls (slag/ min), og åndedræt (slag/min), samt antallet af dage, der kræver iltbehandling... indtil udskrivelsen. Patienternes helbredsforhold vil blive observeret af læger og sygeplejersker, og deres oplysninger vil blive registreret i journaler. Under hele undersøgelsen vil forældre blive bedt om at afstå fra at administrere andre probiotika, enten via næsespray eller oral administration, og fra at bruge andre 0,9 % NaCl fysiologiske saltvandssprays til næserensning.

Dataindsamling og statistisk analyse vil involvere indsamling af individuelle journaler og systematisk organisering af patientens information i et datasæt. Effekten af ​​LiveSpo Navax vil blive evalueret og sammenlignet med 0,9 % NaCl fysiologisk saltvand baseret på forskellige kliniske og subkliniske kriterier opnået fra Navax- og kontrolgrupperne. Disse kriterier inkluderer antallet af dage indtil symptomatisk lindring, reduktionsniveauerne (2^△Ct) af RSV-belastning og samtidige infektionsbakteriekoncentrationer. △Ct for målgener vil blive beregnet som Ct (tærskelcyklus) på dag 3 - Ct på ​​dag 0, mens Ct for den interne kontrol vil blive justeret til at være ens blandt alle prøver. Derudover kan de reducerede niveauer af cytokiner (f.eks. IL-6, IL-8, TNF-alpha...), og IgA vil blive vurderet. Tabelanalysen vil blive udført ved hjælp af χ2-testen eller Fishers eksakte test for dikotome variable med forventede celleværdier under fem. Kontinuerlige variabler vil blive sammenlignet ved hjælp af Wilcoxon-testen, t-testen eller Mann-Whitney-testen, når data ikke er normalfordelt. Korrelationerne mellem variabler vil blive vurderet ved hjælp af Spearmans korrelationsanalyse. Statistiske og grafiske analyser vil blive udført ved hjælp af GraphPad Prism v8.4.3 software (GraphPad Software, CA, USA). Signifikansniveauet for alle analyser sættes til p < 0,05.

Forventede resultater: (i) LiveSpo Navax forventes at lindre RSV-infektionssymptomer omkring 25 % mere effektivt, hvor 90 % af patienterne i Navax-gruppen er symptomfrie på dag 3-7 af interventionen (afhængigt af symptomer), sammenlignet med 65 % af patienterne i kontrolgruppen; (ii) Patienter i Navax-gruppen forventes at opleve mere signifikante reduktioner (>10 gange) i RSV-belastning sammenlignet med patienter i kontrolgruppen på dag 3 af intervention.