Eficacia de LiveSpo Navax en el tratamiento de apoyo de la neumonía en niños con VSR y coinfecciones bacterianas

La neumonía es una enfermedad común en los niños y una de las principales causas de muerte en niños pequeños, especialmente en menores de 1 año, bebés y niños desnutridos. Según la Organización Mundial de la Salud (OMS), se estima que 12,9 millones de niños mueren cada año, con 4,3 millones (33,4%) de esas muertes atribuidas a la neumonía. En Vietnam, la tasa de mortalidad por neumonía es la más alta entre las enfermedades respiratorias (75 %), en comparación con la tasa de mortalidad general del 30-35 %. Las estadísticas muestran que, en promedio, un niño puede experimentar de 3 a 5 episodios de infecciones respiratorias agudas por año, incluidos 1 o 2 episodios de neumonía. La infección por el virus respiratorio sincitial (RSV) y la coinfección bacteriana son las principales causas de neumonía grave, y la tasa de coinfección puede oscilar entre el 26,3 % y el 43,6 %. Las bacterias comúnmente asociadas incluyen Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Staphylococcus aureus y Moraxella catarrhalis. Estas bacterias pueden invadir el tracto respiratorio inferior y causar infecciones secundarias, aprovechando el daño respiratorio causado por el RSV.

Actualmente, no existe una vacuna o un tratamiento específico disponible para los niños con infección por RSV y, en general, se recomienda la oxigenoterapia para los niños que experimentan insuficiencia respiratoria. El uso del anticuerpo monoclonal palivizumab y el fármaco antiviral de nucleótidos ribavirina se considera demasiado costoso o riesgoso para los niños y solo se recomienda para pacientes de alto riesgo. Las coinfecciones bacterianas a menudo requieren un tratamiento con antibióticos basado en patógenos sospechosos o conocidos, pero el uso de antibióticos tiene efectos secundarios significativos y genera preocupaciones sobre el desarrollo de resistencia.

En los últimos años, los probióticos han ganado popularidad como candidatos prometedores y seguros para terapias preventivas y de apoyo en infecciones respiratorias, con el objetivo de ayudar en el tratamiento y reducción de infecciones del tracto respiratorio. Los probióticos, que son microorganismos vivos que brindan beneficios para la salud cuando se consumen en cantidades adecuadas, se han utilizado tradicionalmente para promover la salud intestinal. Sin embargo, su papel potencial en las infecciones respiratorias, específicamente en la neumonía por RSV, no se ha explorado ampliamente. Algunos estudios sugieren que ciertas cepas de probióticos pueden interactuar directamente con los virus, capturándolos, induciendo un crecimiento secundario para inhibir la entrada y el crecimiento del virus, o modulando la respuesta inmunitaria para reducir el riesgo de infecciones respiratorias. Sin embargo, el impacto de los probióticos orales en el tracto respiratorio de los bebés generalmente se retrasa (generalmente alrededor de 3 a 12 meses) y se usa principalmente para la profilaxis en lugar de como un complemento del tratamiento de ARTI. Por lo tanto, existe la necesidad de rutas alternativas de administración de probióticos en el tratamiento de ARTI. En nuestro estudio reciente, hemos demostrado que los probióticos en forma líquida de esporas de Bacillus que se pulverizan nasalmente (LiveSpo Navax que contiene > 5 mil millones de B. subtilis ANA4 y B. clausii ANA39/ampolla de 5 ml) pueden aliviar rápida y eficazmente los síntomas de las ARTI debido a infección por el virus respiratorio sincitial (RSV) mientras exhibe fuertes impactos en la reducción de la carga viral y la inflamación. Este hallazgo es la primera demostración de que rociar probióticos directamente en la nariz podría ser un tratamiento sintomático rápido y eficaz para las ARTI.

En el siguiente estudio, llevamos a cabo el ensayo clínico doble ciego, aleatorizado y controlado para examinar más a fondo la eficacia de LiveSpo Navax para respaldar el tratamiento de niños con neumonía grave que requieren oxigenoterapia debido al RSV y las coinfecciones bacterianas.

Métodos: Se realizará un ensayo clínico aleatorizado, ciego y controlado. Los padres de los pacientes deberán proporcionar diversa información sobre sus hijos, incluido su nombre completo, sexo, edad, historial obstétrico, historial de vacunación e historial de uso de antibióticos. Después de obtener el consentimiento informado, 100 pacientes con neumonía grave debida a RSV y coinfección bacteriana se asignarán al azar a dos grupos (n = 50/grupo): el grupo de control (denominado grupo "Control") recibirá 0,9 % solución salina fisiológica de NaCl, y el grupo experimental (denominado grupo "Navax") recibirá los probióticos LiveSpo Navax. Los pacientes recibirán un spray codificado en forma de muestra ciega para garantizar la objetividad del estudio. Se llevará a cabo un seguimiento clínico durante 7 días o más, y se recolectarán muestras nasofaríngeas el día 0 y el día 3 para evaluar las posibles reducciones en la carga viral, las bacterias de coinfección, la modulación de la liberación de citocinas que reaccionan de forma exagerada y la presencia de esporas probióticas. en la mucosa nasal del paciente.

Se utilizará PCR en tiempo real para detectar microorganismos en las muestras nasofaríngeas. Se realizarán ensayos semicuantitativos para medir los cambios en la carga de RSV y las concentraciones bacterianas de coinfección utilizando el protocolo de rutina de PCR en tiempo real, que ha sido estandarizado según los criterios ISO 15189:2012 y se usa de forma rutinaria en el Hospital Nacional de Niños de Vietnam. La detección de cepas de Bacillus pertenecientes a B. subtilis y B. clausii se realizará mediante el ensayo PCR SYBR Green en tiempo real, que se realiza de forma rutinaria en el Spobiotic Research Center en Hanoi, Vietnam.

Los ensayos ELISA se utilizarán para cuantificar los niveles de citocinas proinflamatorias (p. ej., IL-6, IL-8, TNF-alfa...) y los niveles de inmunoglobulina A (IgA). Los ensayos se realizarán utilizando un kit ELISA de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

El análisis del microbioma nasal se llevará a cabo utilizando la secuenciación de próxima generación (NGS) del gen 16S rRNA en Macrogen en Seúl, Corea, en la plataforma Illumina MiSeq con una configuración de ejecución de 2 x 250 pb.

Durante el tratamiento, los pacientes serán monitoreados diariamente para detectar síntomas clínicos típicos de neumonía grave debido a RSV y coinfección bacteriana, que incluyen secreción nasal, depresión torácica, estertores secos, estertores húmedos, oximetría (SpO2) (%), pulso (latidos/ min), y respiración (latidos/min), así como el número de días que requirió oxigenoterapia... hasta el alta. Las condiciones de salud de los pacientes serán observadas por médicos y enfermeras, y sus datos quedarán registrados en la historia clínica. A lo largo del estudio, se les pedirá a los padres que se abstengan de administrar otros probióticos, ya sea mediante aerosol nasal u oral, y de usar otros aerosoles de solución salina fisiológica con NaCl al 0,9 % para la limpieza nasal.

La recopilación de datos y el análisis estadístico implicarán la recopilación de registros médicos individuales y la organización sistemática de la información del paciente en un conjunto de datos. La eficacia de LiveSpo Navax se evaluará y comparará con la solución salina fisiológica de NaCl al 0,9 % en función de varios criterios clínicos y subclínicos obtenidos de los grupos Navax y Control. Estos criterios incluyen el número de días hasta el alivio sintomático, los niveles de reducción (2^△Ct) de la carga de RSV y las concentraciones bacterianas de coinfección. El △Ct para los genes diana se calculará como Ct (ciclo de umbral) en el día 3 - Ct en el día 0, mientras que el Ct del control interno se ajustará para que sea igual entre todas las muestras. Además, los niveles reducidos de citocinas (p. Se valorará IL-6, IL-8, TNF-alfa...), e IgA. El análisis tabular se realizará utilizando la prueba de χ2 o la prueba exacta de Fisher para variables dicotómicas con valores de celda esperados por debajo de cinco. Las variables continuas se compararán mediante la prueba de Wilcoxon, la prueba t o la prueba de Mann-Whitney cuando los datos no tengan una distribución normal. Las correlaciones entre variables se evaluarán mediante el análisis de correlación de Spearman. Los análisis estadísticos y gráficos se realizarán utilizando el software GraphPad Prism v8.4.3 (GraphPad Software, CA, EE. UU.). El nivel de significación para todos los análisis se establecerá en p < 0,05.

Resultados esperados: (i) se espera que LiveSpo Navax alivie los síntomas de la infección por RSV con un 25 % más de eficacia, con un 90 % de pacientes en el grupo de Navax sin síntomas en los días 3 a 7 de la intervención (dependiendo de los síntomas), en comparación con 65 % de pacientes en el grupo Control; (ii) Se espera que los pacientes del grupo Navax experimenten reducciones más significativas (>10 veces) en la carga de RSV en comparación con los pacientes del grupo Control en el día 3 de la intervención.