Эффективность LiveSpo Navax при поддерживающем лечении пневмонии у детей с РСВ и бактериальными коинфекциями

Пневмония является распространенным заболеванием у детей и одной из ведущих причин смерти детей раннего возраста, особенно детей в возрасте до 1 года, младенцев и детей с истощением. По данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), ежегодно умирает около 12,9 миллиона детей, причем 4,3 миллиона (33,4%) из этих смертей связаны с пневмонией. Во Вьетнаме смертность от пневмонии самая высокая среди болезней органов дыхания (75%), по сравнению с общей смертностью 30-35%. Статистика показывает, что в среднем у ребенка может быть от 3 до 5 эпизодов ОРЗ в год, в том числе от 1 до 2 эпизодов пневмонии. Инфекция респираторно-синцитиального вируса (RSV) и бактериальная коинфекция являются ведущими причинами тяжелой пневмонии, а частота коинфекции может варьироваться от 26,3% до 43,6%. Обычно ассоциированные бактерии включают Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Staphylococcus aureus и Moraxella catarrhalis. Эти бактерии могут проникать в нижние дыхательные пути и вызывать вторичные инфекции, используя поражение органов дыхания, вызванное РСВ.

В настоящее время не существует вакцины или специального лечения для детей с РСВ-инфекцией, и кислородная терапия обычно рекомендуется детям с дыхательной недостаточностью. Использование моноклонального антитела паливизумаба и противовирусного нуклеотидного препарата рибавирина считается слишком дорогим или рискованным для детей и рекомендуется только для пациентов с высоким риском. Бактериальные коинфекции часто требуют лечения антибиотиками на основе подозреваемых или известных патогенов, но использование антибиотиков имеет значительные побочные эффекты и вызывает опасения по поводу развития резистентности.

В последние годы пробиотики приобрели популярность как многообещающие и безопасные кандидаты для профилактической и поддерживающей терапии респираторных инфекций, направленные на помощь в лечении и уменьшении инфекций дыхательных путей. Пробиотики, которые представляют собой живые микроорганизмы, приносящие пользу для здоровья при употреблении в адекватных количествах, традиционно использовались для улучшения здоровья кишечника. Однако их потенциальная роль при респираторных инфекциях, в частности пневмонии, вызванной RSV, тщательно не изучалась. Некоторые исследования предполагают, что определенные штаммы пробиотиков могут напрямую взаимодействовать с вирусами, захватывая их, вызывая вторичный рост для подавления проникновения и роста вируса или модулируя иммунный ответ для снижения риска респираторных инфекций. Тем не менее, воздействие пероральных пробиотиков на дыхательные пути младенцев обычно проявляется с задержкой (обычно около 3-12 месяцев) и в основном используется для профилактики, а не в качестве дополнения к лечению ОРВИ. Следовательно, существует потребность в альтернативных путях доставки пробиотиков при лечении ОРВИ. В нашем недавнем исследовании мы доказали, что жидкие пробиотики со спорами Bacillus для назального спрея (LiveSpo Navax, содержащие > 5 миллиардов B. subtilis ANA4 и B. clausii ANA39/ампула 5 мл) могут быстро и эффективно облегчить симптомы ОРВИ, вызванные инфекции респираторно-синцитиального вируса (RSV), оказывая сильное влияние на снижение вирусной нагрузки и воспаления. Это открытие является первой демонстрацией того, что распыление пробиотиков непосредственно в нос может быть быстрым и эффективным симптоматическим лечением ОРВИ.

В следующем исследовании мы провели двойное слепое, рандомизированное и контролируемое клиническое исследование для дальнейшего изучения эффективности LiveSpo Navax в поддержке лечения детей с тяжелой пневмонией, которым требуется кислородная терапия из-за коинфекции РСВ и бактериальных инфекций.

Методы: будет проведено рандомизированное, слепое и контролируемое клиническое исследование. Родители пациентов должны будут предоставить различную информацию о своих детях, включая их полное имя, пол, возраст, акушерский анамнез, историю вакцинации и историю использования антибиотиков. После получения информированного согласия 100 пациентов с тяжелой пневмонией, вызванной РСВ и сочетанной бактериальной инфекцией, будут случайным образом распределены на две группы (n = 50/группа): контрольная группа (называемая «Контрольной группой») получит 0,9% физиологический раствор NaCl, а экспериментальная группа (называемая группой «Навакс») будет получать пробиотики LiveSpo Navax. Пациентам будет выдан закодированный спрей в виде слепого образца для обеспечения объективности исследования. Клиническое наблюдение будет проводиться в течение 7 дней или более, а образцы из носоглотки будут собираться на 0-й и 3-й день для оценки потенциального снижения вирусной нагрузки, коинфицирующих бактерий, модуляции высвобождения сверхреагировавших цитокинов и наличия пробиотических спор. на слизистой оболочке носа больного.

ПЦР в реальном времени будет использоваться для обнаружения микроорганизмов в образцах из носоглотки. Будут проводиться полуколичественные анализы для измерения изменений нагрузки RSV и концентраций бактерий коинфекции с использованием рутинного протокола ПЦР в реальном времени, который был стандартизирован в соответствии с критериями ISO 15189: 2012 и обычно используется во Вьетнамской национальной детской больнице. Обнаружение штаммов Bacillus, принадлежащих к B. subtilis и B. clausii, будет проводиться с использованием ПЦР в реальном времени SYBR Green assay, который обычно проводится в Исследовательском центре Spobiotic в Ханое, Вьетнам.

Анализы ELISA будут использоваться для количественного определения уровней провоспалительных цитокинов (например, IL-6, IL-8, TNF-альфа...) и уровней иммуноглобулина A (IgA). Анализы будут проводиться с использованием набора ELISA в соответствии с инструкциями производителя.

Анализ назального микробиома будет проводиться с использованием секвенирования следующего поколения (NGS) гена 16S рРНК в Macrogen в Сеуле, Корея, на платформе Illumina MiSeq с конфигурацией запуска 2 x 250 п.н.

Во время лечения пациентов будут ежедневно контролировать на наличие типичных клинических симптомов тяжелой пневмонии, вызванной RSV и бактериальной коинфекцией, включая насморк, депрессию грудной клетки, сухие хрипы, влажные хрипы, оксиметрию (SpO2) (%), пульс (уд/ мин) и дыхание (уд/мин), а также количество дней, требующих оксигенотерапии... до выписки. За состоянием здоровья пациентов будут следить врачи и медсестры, а их информация будет фиксироваться в медицинских картах. На протяжении всего исследования родителей попросят воздержаться от введения других пробиотиков в виде назального спрея или перорального введения, а также от использования других спреев с физиологическим раствором 0,9% NaCl для очистки носа.

Сбор данных и статистический анализ будут включать в себя сбор индивидуальных медицинских записей и систематическую организацию информации о пациенте в набор данных. Эффективность LiveSpo Navax будет оцениваться и сравниваться с 0,9% физиологическим раствором NaCl на основе различных клинических и субклинических критериев, полученных в группах Navax и Control. Эти критерии включают количество дней до облегчения симптомов, уровни снижения (2 ^ △ Ct) нагрузки RSV и концентрации бактерий коинфекции. △Ct для целевых генов будет рассчитываться как Ct (пороговый цикл) на 3-й день - Ct на 0-й день, в то время как Ct внутреннего контроля будет скорректирован так, чтобы он был одинаковым для всех образцов. Кроме того, сниженные уровни цитокинов (например, Будут оцениваться ИЛ-6, ИЛ-8, ФНО-альфа...) и IgA. Табличный анализ будет выполняться с использованием критерия χ2 или точного критерия Фишера для дихотомических переменных с ожидаемыми значениями ячеек ниже пяти. Непрерывные переменные будут сравниваться с использованием критерия Уилкоксона, t-критерия или критерия Манна-Уитни, когда данные не распределены нормально. Корреляции между переменными будут оцениваться с помощью корреляционного анализа Спирмена. Статистический и графический анализы будут выполняться с использованием программного обеспечения GraphPad Prism v8.4.3 (GraphPad Software, Калифорния, США). Уровень значимости для всех анализов будет установлен на уровне p < 0,05.

Ожидаемые результаты: (i) Ожидается, что LiveSpo Navax облегчит симптомы инфекции RSV примерно на 25% более эффективно, при этом 90% пациентов в группе Navax не будут иметь симптомов на 3-7 день вмешательства (в зависимости от симптомов) по сравнению с 65 % пациентов в группе контроля; (ii) Ожидается, что у пациентов в группе Навакса будет наблюдаться более значительное снижение (более чем в 10 раз) нагрузки RSV по сравнению с пациентами в контрольной группе на 3-й день вмешательства.