RSV と細菌の同時感染を患う小児における肺炎の支持療法における LiveSpo Navax の有効性

肺炎は小児によく見られる病気であり、幼児、特に 1 歳未満、乳児、栄養失調の小児の主な死因の 1 つです。 世界保健機関 (WHO) によると、毎年推定 1,290 万人の子供が死亡しており、そのうち 430 万人 (33.4%) が肺炎が原因とされています。 ベトナムでは、全体の死亡率が30～35％であるのに対し、肺炎による死亡率は呼吸器疾患の中で最も高く（75％）ます。 統計によると、子供は平均して年間 3 ～ 5 回の急性呼吸器感染症を経験し、そのうち 1 ～ 2 回の肺炎が発生する可能性があります。 RS ウイルス (RSV) 感染と細菌の同時感染は重度の肺炎の主な原因であり、同時感染率は 26.3% ～ 43.6% の範囲に及ぶ可能性があります。 一般的に関連する細菌には、肺炎球菌、インフルエンザ菌、黄色ブドウ球菌、モラクセラ・カタルリスなどがあります。 これらの細菌は、RSV による呼吸器損傷を利用して下気道に侵入し、二次感染を引き起こす可能性があります。

現在のところ、RSV 感染症の小児に利用できるワクチンや特別な治療法はなく、呼吸不全を患っている小児には一般に酸素療法が推奨されています。 モノクローナル抗体パリビズマブと抗ウイルスヌクレオチド薬リバビリンの使用は、子供にとっては高価すぎるかリスクが高すぎると考えられており、高リスクの患者にのみ推奨されます。 細菌の同時感染では、疑わしい病原体または既知の病原体に基づいた抗生物質による治療が必要になることがよくありますが、抗生物質の使用には重大な副作用があり、耐性の発現に関する懸念が生じます。

近年、プロバイオティクスは、気道感染症の治療と軽減を目的とした、呼吸器感染症の予防および支持療法の有望かつ安全な候補として人気を集めています。 プロバイオティクスは、適切な量を摂取すると健康上の利点をもたらす生きた微生物であり、伝統的に腸の健康を促進するために使用されてきました。 しかし、呼吸器感染症、特に RSV 肺炎におけるそれらの潜在的な役割は、広く調査されていません。 一部の研究では、プロバイオティクスの特定の株がウイルスと直接相互作用してウイルスを捕捉し、二次増殖を誘導してウイルスの侵入と増殖を阻害したり、免疫応答を調節して呼吸器感染症のリスクを軽減したりできることが示唆されています。 それにもかかわらず、経口プロバイオティクスの乳児の気道への影響は通常遅れて（通常約3～12か月）、ARTI治療の補助としてではなく主に予防のために使用されます。 したがって、ARTI治療におけるプロバイオティクスの代替送達ルートが必要とされています。 私たちの最近の研究では、鼻腔噴霧型バチルス胞子液状プロバイオティクス（50億個を超えるB. subtilis ANA4およびB. clausii ANA39を含むLiveSpo Navax / 5 mLアンプル）が、次のような原因によるARTIの症状を迅速かつ効果的に軽減できることを証明しました。 RSウイルス（RSV）感染を抑制し、ウイルス量と炎症の軽減に強い効果を示します。 この発見は、プロバイオティクスを鼻に直接スプレーすることが、ARTIに対する迅速かつ効果的な対症療法となり得ることを初めて証明したものである。

この次の研究では、RSV と細菌の同時感染により酸素療法を必要とする重度の肺炎の小児の治療をサポートする LiveSpo Navax の有効性をさらに調べるために、二重盲検ランダム化対照臨床試験を実施しました。

方法: 無作為化、盲検、対照臨床試験が実施されます。 患者の親は、氏名、性別、年齢、出産歴、ワクチン接種歴、抗生物質の使用歴など、子供に関するさまざまな情報の提供を求められる。 インフォームドコンセントを得た後、RSV と細菌の同時感染による重度の肺炎患者 100 人が 2 つのグループ (n = 50/グループ) に無作為に割り当てられます。対照グループ (「対照」グループと呼ばれます) には 0.9% が投与されます。 NaCl生理食塩水、および実験グループ（「Navax」グループと呼ばれる）にはプロバイオティクスLiveSpo Navaxが投与されます。 研究の客観性を確保するために、患者にはブラインドサンプルの形でコード化されたスプレーが投与される。 臨床追跡調査は7日間以上実施され、ウイルス量、共感染細菌、過剰反応したサイトカイン放出の調節、およびプロバイオティクス胞子の存在の減少の可能性を評価するために、鼻咽頭サンプルが0日目と3日目に収集されます。患者の鼻粘膜にある。

リアルタイム PCR は、鼻咽頭サンプル中の微生物を検出するために使用されます。 半定量アッセイは、ISO 15189:2012 基準に基づいて標準化されており、ベトナム国立小児病院で日常的に使用されているリアルタイム PCR ルーチンプロトコルを使用して、RSV 負荷と同時感染細菌濃度の変化を測定するために実行されます。 B. subtilis および B. clausii に属するバチルス菌株の検出は、ベトナムのハノイにある Spobiotic Research Center で日常的に行われているリアルタイム PCR SYBR Green アッセイを使用して行われます。

ELISA アッセイは、炎症誘発性サイトカイン レベル (IL-6、IL-8、TNF-α など) および免疫グロブリン A (IgA) レベルを定量するために使用されます。 アッセイは、メーカーの指示に従って ELISA キットを使用して実行されます。

鼻マイクロバイオーム解析は、韓国ソウルの Macrogen で 16S rRNA 遺伝子の次世代シークエンシング (NGS) を使用し、2 x 250 bp ラン構成の Illumina MiSeq プラットフォーム上で行われます。

治療中、患者は、鼻水、胸の落ち込み、乾いたラ音、湿ったラ音、酸素濃度（SpO2）（％）、脈拍（拍動/心拍数など）を含む、RSVと細菌の同時感染による重度の肺炎の典型的な臨床症状がないか毎日監視されます。分）、呼吸数（心拍数/分）、および退院までの酸素療法が必要な日数。 患者の健康状態は医師や看護師が観察し、医療記録に記録する。 研究期間中、両親は鼻腔スプレーまたは経口投与による他のプロバイオティクスの投与、および鼻洗浄のための他の0.9% NaCl生理食塩水スプレーの使用を控えるよう求められます。

データ収集と統計分析には、個々の医療記録を収集し、患者の情報をデータセットに体系的に編成することが含まれます。 LiveSpo Navax の有効性は、Navax グループと対照グループから得られたさまざまな臨床基準および亜臨床基準に基づいて評価され、0.9% NaCl 生理食塩水と比較されます。 これらの基準には、症状が軽減するまでの日数、RSV 負荷の減少レベル (2^△Ct)、および共感染細菌濃度が含まれます。 標的遺伝子の△Ctは、3日目のCt（閾値サイクル）-0日目のCtとして計算されますが、内部対照のCtはすべてのサンプル間で等しくなるように調整されます。 さらに、サイトカインのレベルが低下します（例、 IL-6、IL-8、TNF-α...)、および IgA が評価されます。 表形式の分析は、期待されるセル値が 5 未満である二分変数に対して χ2 検定またはフィッシャーの直接確率検定を使用して実行されます。 データが正規分布していない場合、連続変数はウィルコクソン検定、t 検定、またはマンホイットニー検定を使用して比較されます。 変数間の相関関係は、スピアマンの相関分析を使用して評価されます。 統計分析およびグラフ分析は、GraphPad Prism v8.4.3 ソフトウェア (GraphPad Software、カリフォルニア州、米国) を使用して実行されます。 すべての分析の有意水準は p < 0.05 に設定されます。

期待される結果: (i) LiveSpo Navax は、RSV 感染症の症状を約 25% 効果的に軽減すると期待されており、Navax グループの患者の 90% は介入後 3 ～ 7 日目には症状がなくなっています (症状による)。対照群の患者の割合。 (ii) Navax グループの患者は、介入 3 日目に対照グループの患者と比較して RSV 負荷のより大幅な減少 (>10 倍) を経験すると予想されます。