Werkzaamheid van LiveSpo Navax bij ondersteunende behandeling van longontsteking bij kinderen met RSV en bacteriële co-infecties

Longontsteking is een veel voorkomende ziekte bij kinderen en een van de belangrijkste doodsoorzaken bij jonge kinderen, vooral kinderen jonger dan 1 jaar, zuigelingen en ondervoede kinderen. Volgens de Wereldgezondheidsorganisatie (WHO) sterven jaarlijks naar schatting 12,9 miljoen kinderen, waarvan 4,3 miljoen (33,4%) aan longontsteking. In Vietnam is het sterftecijfer door longontsteking het hoogst onder luchtwegaandoeningen (75%), vergeleken met het totale sterftecijfer van 30-35%. Statistieken tonen aan dat een kind gemiddeld 3 tot 5 episoden van acute luchtweginfecties per jaar kan ervaren, waaronder 1 tot 2 episoden van longontsteking. Infectie met respiratoir syncytieel virus (RSV) en bacteriële co-infectie zijn de belangrijkste oorzaken van ernstige longontsteking, en het percentage co-infectie kan variëren van 26,3% tot 43,6%. Vaak geassocieerde bacteriën zijn Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Staphylococcus aureus en Moraxella catarrhalis. Deze bacteriën kunnen de onderste luchtwegen binnendringen en secundaire infecties veroorzaken, gebruikmakend van door RSV veroorzaakte ademhalingsschade.

Momenteel is er geen vaccin of specifieke behandeling beschikbaar voor kinderen met een RSV-infectie, en zuurstoftherapie wordt over het algemeen aanbevolen voor kinderen met respiratoire insufficiëntie. Het gebruik van het monoklonale antilichaam palivizumab en het antivirale nucleotide-geneesmiddel ribavirine wordt als te duur of te riskant beschouwd voor kinderen en wordt alleen aanbevolen voor patiënten met een hoog risico. Bacteriële co-infecties vereisen vaak een behandeling met antibiotica op basis van vermoedelijke of bekende pathogenen, maar het gebruik van antibiotica heeft aanzienlijke bijwerkingen en geeft aanleiding tot bezorgdheid over de ontwikkeling van resistentie.

In de afgelopen jaren hebben probiotica aan populariteit gewonnen als veelbelovende en veilige kandidaten voor preventieve en ondersteunende therapieën bij luchtweginfecties, met als doel te helpen bij de behandeling en vermindering van luchtweginfecties. Probiotica, levende micro-organismen die gezondheidsvoordelen bieden als ze in voldoende hoeveelheden worden geconsumeerd, worden van oudsher gebruikt om de darmgezondheid te bevorderen. Hun potentiële rol bij luchtweginfecties, met name RSV-pneumonie, is echter niet uitgebreid onderzocht. Sommige onderzoeken suggereren dat bepaalde soorten probiotica rechtstreeks kunnen interageren met virussen, ze vangen, secundaire groei induceren om het binnendringen en de groei van virussen te remmen, of de immuunrespons moduleren om het risico op luchtweginfecties te verminderen. Desalniettemin is de impact van orale probiotica op de luchtwegen van zuigelingen meestal vertraagd (meestal rond 3-12 maanden) en wordt deze voornamelijk gebruikt voor profylaxe in plaats van als aanvulling op ARTI-behandeling. Daarom is er behoefte aan alternatieve toedieningsroutes van probiotica bij ARTI-behandeling. In onze recente studie hebben we bewezen dat de probiotica in vloeibare vorm van Bacillus-sporen die via de neus worden gespoten (LiveSpo Navax met > 5 miljard B. subtilis ANA4 en B. clausii ANA39/5 ml ampul) de symptomen van ARTI's als gevolg van respiratoir syncytieel virus (RSV) infectie terwijl het sterke effecten vertoont bij het verminderen van de virale belasting en ontsteking. Deze bevinding is de eerste demonstratie dat het rechtstreeks in de neus spuiten van probiotica een snelle en effectieve symptomatische behandeling van ARTI's zou kunnen zijn.

In deze volgende studie hebben we de dubbelblinde, gerandomiseerde en gecontroleerde klinische studie uitgevoerd om de werkzaamheid van LiveSpo Navax verder te onderzoeken bij de ondersteuning van de behandeling van kinderen met ernstige longontsteking die zuurstoftherapie nodig hebben vanwege RSV en bacteriële co-infecties.

Methoden: Er zal een gerandomiseerde, blinde en gecontroleerde klinische studie worden uitgevoerd. De ouders van de patiënten zullen verschillende informatie over hun kinderen moeten verstrekken, waaronder hun volledige naam, geslacht, leeftijd, verloskundige geschiedenis, vaccinatiegeschiedenis en geschiedenis van antibioticagebruik. Na verkregen geïnformeerde toestemming zullen 100 patiënten met ernstige longontsteking als gevolg van RSV en bacteriële co-infectie willekeurig worden toegewezen aan twee groepen (n = 50/groep): de controlegroep (de "controle"-groep genoemd) krijgt 0,9% NaCl fysiologische zoutoplossing, en de experimentele groep (de "Navax"-groep genoemd) zal de probiotica LiveSpo Navax ontvangen. De patiënten krijgen een gecodeerde spray in de vorm van een blind monster om de objectiviteit van het onderzoek te waarborgen. Klinische follow-up zal gedurende 7 dagen of langer worden uitgevoerd en er zullen nasofaryngeale monsters worden verzameld op dag 0 en dag 3 om mogelijke verminderingen van de virale belasting, co-infectiebacteriën, modulatie van overreagerende cytokine-afgifte en de aanwezigheid van probiotische sporen te evalueren in het neusslijmvlies van de patiënt.

Real-time PCR zal worden gebruikt om micro-organismen in de nasofaryngeale monsters te detecteren. Semi-kwantitatieve assays zullen worden uitgevoerd om veranderingen in RSV-belasting en co-infectie bacteriële concentraties te meten met behulp van het real-time PCR-routineprotocol, dat is gestandaardiseerd volgens ISO 15189:2012-criteria en routinematig wordt gebruikt in het Vietnam National Children's Hospital. Detectie van Bacillus-stammen die behoren tot B. subtilis en B. clausii zal worden uitgevoerd met behulp van real-time PCR SYBR Green-assay, die routinematig wordt uitgevoerd in het Spobiotic Research Center in Hanoi, Vietnam.

ELISA-assays zullen worden gebruikt om pro-inflammatoire cytokineniveaus (bijv. IL-6, IL-8, TNF-alfa...) en immunoglobuline A (IgA)-niveaus te kwantificeren. De assays worden uitgevoerd met behulp van een ELISA-kit volgens de instructies van de fabrikant.

Nasale microbioomanalyse zal worden uitgevoerd met behulp van next-generation sequencing (NGS) van het 16S rRNA-gen bij Macrogen in Seoul, Korea, op het Illumina MiSeq-platform met een 2 x 250 bp run-configuratie.

Tijdens de behandeling zullen patiënten dagelijks worden gecontroleerd op typische klinische symptomen van ernstige pneumonie als gevolg van RSV en bacteriële co-infectie, waaronder loopneus, depressie van de borst, droog geratel, vochtig geratel, oxymetrie (SpO2) (%), pols (slagen/ min), en adem (slagen/min), evenals het aantal dagen dat zuurstoftherapie nodig is... tot ontslag. De gezondheidstoestand van de patiënten zal worden geobserveerd door artsen en verpleegkundigen, en hun informatie zal worden vastgelegd in medische dossiers. Gedurende het hele onderzoek zullen ouders worden gevraagd af te zien van het toedienen van andere probiotica, hetzij via neusspray of orale toediening, en van het gebruik van andere 0,9% NaCl fysiologische zoutoplossing sprays voor neusreiniging.

Gegevensverzameling en statistische analyse omvatten het verzamelen van individuele medische dossiers en het systematisch organiseren van de informatie van de patiënt in een dataset. De werkzaamheid van LiveSpo Navax zal worden geëvalueerd en vergeleken met 0,9% NaCl fysiologische zoutoplossing op basis van verschillende klinische en subklinische criteria verkregen van de Navax- en controlegroepen. Deze criteria omvatten het aantal dagen tot verlichting van de symptomen, de reductieniveaus (2^△Ct) van de RSV-belasting en bacteriële concentraties bij co-infectie. De △Ct voor doelgenen zal worden berekend als Ct (drempelcyclus) op dag 3 - Ct op dag 0, terwijl de Ct van de interne controle zal worden aangepast om gelijk te zijn voor alle monsters. Bovendien zijn de verlaagde niveaus van cytokines (bijv. IL-6, IL-8, TNF-alpha...), en IgA worden beoordeeld. De analyse in tabelvorm wordt uitgevoerd met behulp van de χ2-test of Fisher's exact-test voor dichotome variabelen met verwachte celwaarden onder de vijf. Continue variabelen worden vergeleken met behulp van de Wilcoxon-test, t-test of Mann-Whitney-test wanneer gegevens niet normaal verdeeld zijn. De correlaties tussen variabelen zullen worden beoordeeld met behulp van Spearman's correlatieanalyse. Statistische en grafische analyses zullen worden uitgevoerd met behulp van GraphPad Prism v8.4.3-software (GraphPad Software, CA, VS). Het significantieniveau voor alle analyses wordt vastgesteld op p < 0,05.

Verwachte resultaten: (i) LiveSpo Navax zal naar verwachting de RSV-infectiesymptomen ongeveer 25% effectiever verlichten, waarbij 90% van de patiënten in de Navax-groep symptoomvrij is op dag 3-7 van de interventie (afhankelijk van de symptomen), vergeleken met 65 % patiënten in de controlegroep; (ii) Patiënten in de Navax-groep zullen naar verwachting meer significante reducties (>10-voudig) in RSV-belasting ervaren in vergelijking met patiënten in de controlegroep op dag 3 van de interventie.