Účinnost LiveSpo Navax v podpůrné léčbě pneumonie u dětí s RSV a bakteriálními koinfekcemi

Pneumonie je běžným onemocněním u dětí a jednou z hlavních příčin úmrtí malých dětí, zejména dětí mladších 1 roku, kojenců a podvyživených dětí. Podle Světové zdravotnické organizace (WHO) zemře každý rok odhadem 12,9 milionu dětí, přičemž 4,3 milionu (33,4 %) z těchto úmrtí je připisováno zápalu plic. Ve Vietnamu je úmrtnost na zápal plic nejvyšší mezi respiračními chorobami (75 %) ve srovnání s celkovou úmrtností 30–35 %. Statistiky ukazují, že v průměru může dítě zažít 3 až 5 epizod akutních respiračních infekcí za rok, včetně 1 až 2 epizod zápalu plic. Infekce respiračním syncyciálním virem (RSV) a bakteriální koinfekce jsou hlavními příčinami těžké pneumonie a míra koinfekce se může pohybovat od 26,3 % do 43,6 %. Běžně asociované bakterie zahrnují Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Staphylococcus aureus a Moraxella catarrhalis. Tyto bakterie mohou napadnout dolní dýchací cesty a způsobit sekundární infekce, přičemž využívají poškození dýchacích cest způsobené RSV.

V současné době není k dispozici žádná vakcína ani specifická léčba pro děti s infekcí RSV a pro děti s respiračním selháním se obecně doporučuje oxygenoterapie. Použití monoklonální protilátky palivizumab a antivirového nukleotidového léku ribavirinu je pro děti považováno za příliš drahé nebo rizikové a doporučuje se pouze u vysoce rizikových pacientů. Bakteriální koinfekce často vyžadují antibiotickou léčbu na základě podezřelých nebo známých patogenů, ale užívání antibiotik má významné vedlejší účinky a vyvolává obavy z rozvoje rezistence.

V posledních letech si probiotika získala oblibu jako slibní a bezpeční kandidáti na preventivní a podpůrné terapie respiračních infekcí, jejichž cílem je pomoci při léčbě a redukci infekcí dýchacích cest. Probiotika, což jsou živé mikroorganismy, které při konzumaci v dostatečném množství poskytují zdravotní výhody, se tradičně používají k podpoře zdraví střev. Jejich potenciální role u respiračních infekcí, konkrétně u RSV pneumonie, však nebyla rozsáhle prozkoumána. Některé studie naznačují, že určité kmeny probiotik mohou přímo interagovat s viry, zachycovat je, indukovat sekundární růst k inhibici vstupu viru a růstu nebo modulovat imunitní odpověď, aby se snížilo riziko respiračních infekcí. Nicméně účinek perorálních probiotik na dýchací cesty kojenců je typicky opožděný (obvykle kolem 3-12 měsíců) a primárně se používají k profylaxi spíše než jako doplněk k léčbě ARTI. Proto existuje potřeba alternativních cest dodávání probiotik při léčbě ARTI. V naší nedávné studii jsme prokázali, že tekutá probiotika Bacillus spóry ve formě nosního spreje (LiveSpo Navax obsahující > 5 miliard B. subtilis ANA4 a B. clausii ANA39/ 5 ml ampule) mohou rychle a účinně zmírnit příznaky ARTI způsobené infekce respiračním syncyciálním virem (RSV), přičemž vykazuje silné dopady na snížení virové zátěže a zánětu. Toto zjištění je prvním důkazem toho, že stříkání probiotik přímo do nosu by mohlo být rychlou a účinnou symptomatickou léčbou ARTI.

V této následující studii jsme provedli dvojitě zaslepenou, randomizovanou a kontrolovanou klinickou studii, abychom dále prověřili účinnost LiveSpo Navax při podpoře léčby dětí s těžkou pneumonií, které potřebují kyslíkovou terapii kvůli RSV a bakteriálním koinfekcím.

Metody: Bude provedena randomizovaná, slepá a kontrolovaná klinická studie. Rodiče pacientů budou muset poskytnout různé informace o svých dětech, včetně jejich celého jména, pohlaví, věku, porodnické anamnézy, očkování a historie užívání antibiotik. Po získání informovaného souhlasu bude 100 pacientů s těžkou pneumonií způsobenou RSV a bakteriální koinfekcí náhodně rozděleno do dvou skupin (n = 50/skupina): kontrolní skupina (označovaná jako „kontrolní“ skupina) obdrží 0,9 % NaCl fyziologický solný roztok a experimentální skupina (označovaná jako "Navax") bude dostávat probiotika LiveSpo Navax. Pacientům bude podán kódovaný sprej ve formě slepého vzorku, aby byla zajištěna objektivita studie. Klinické sledování bude prováděno po dobu 7 dnů nebo déle a v den 0 a den 3 budou odebírány vzorky z nosohltanu, aby se vyhodnotilo potenciální snížení virové zátěže, koinfekce bakterií, modulace nadměrného uvolňování cytokinů a přítomnost probiotických spor. v nosní sliznici pacienta.

K detekci mikroorganismů ve vzorcích z nosohltanu bude použita PCR v reálném čase. Semikvantitativní testy budou prováděny za účelem měření změn v zátěži RSV a koinfekčních bakteriálních koncentracích pomocí rutinního protokolu PCR v reálném čase, který byl standardizován podle kritérií ISO 15189:2012 a je rutinně používán ve Vietnamské národní dětské nemocnici. Detekce kmenů Bacillus patřících k B. subtilis a B. clausii bude prováděna pomocí testu SYBR Green v reálném čase PCR, který se rutinně provádí ve Spobiotic Research Center v Hanoji ve Vietnamu.

Testy ELISA budou použity ke kvantifikaci hladin prozánětlivých cytokinů (např. IL-6, IL-8, TNF-alfa...) a hladin imunoglobulinu A (IgA). Testy budou prováděny pomocí soupravy ELISA podle pokynů výrobce.

Analýza nosního mikrobiomu bude provedena pomocí sekvenování nové generace (NGS) genu 16S rRNA v Macrogen v Soulu v Koreji na platformě Illumina MiSeq s konfigurací běhu 2 x 250 bp.

Během léčby budou pacienti denně sledováni na typické klinické příznaky těžké pneumonie způsobené RSV a bakteriální koinfekcí, včetně rýmy, deprese hrudníku, suchého chrochtání, vlhkého chrochtání, oxymetrie (SpO2) (%), pulsu (tepy/ min) a dech (údery/min), stejně jako počet dní vyžadujících kyslíkovou terapii... do propuštění. Zdravotní stav pacientů bude sledován lékaři a zdravotními sestrami a jejich informace budou zaznamenány do zdravotnické dokumentace. V průběhu studie budou rodiče požádáni, aby se zdrželi podávání jiných probiotik, ať už prostřednictvím nosního spreje nebo perorálního podávání, a používání jiných sprejů s 0,9% NaCl fyziologickým roztokem pro čištění nosu.

Sběr dat a statistická analýza bude zahrnovat sběr jednotlivých lékařských záznamů a systematické uspořádání informací o pacientovi do souboru dat. Účinnost LiveSpo Navax bude vyhodnocena a porovnána s 0,9% fyziologickým roztokem NaCl na základě různých klinických a subklinických kritérií získaných od skupin Navax a kontrolní skupiny. Tato kritéria zahrnují počet dní do zmírnění symptomů, úrovně snížení (2^△Ct) zátěže RSV a koncentrace koinfekce bakterií. △Ct pro cílové geny se vypočítá jako Ct (prahový cyklus) v den 3 – Ct v den 0, zatímco Ct vnitřní kontroly bude upraveno tak, aby bylo stejné pro všechny vzorky. Navíc snížené hladiny cytokinů (např. IL-6, IL-8, TNF-alfa...) a IgA budou hodnoceny. Tabulková analýza bude provedena pomocí χ2 testu nebo Fisherova exaktního testu pro dichotomické proměnné s očekávanými hodnotami buněk pod pět. Spojité proměnné budou porovnávány pomocí Wilcoxonova testu, t-testu nebo Mann-Whitneyho testu, pokud data nejsou normálně distribuována. Korelace mezi proměnnými budou hodnoceny pomocí Spearmanovy korelační analýzy. Statistické a grafické analýzy budou provedeny pomocí softwaru GraphPad Prism v8.4.3 (GraphPad Software, CA, USA). Hladina významnosti pro všechny analýzy bude nastavena na p < 0,05.

Očekávané výsledky: (i) Očekává se, že LiveSpo Navax zmírní příznaky infekce RSV asi o 25 % účinněji, přičemž 90 % pacientů ve skupině Navax je bez příznaků v den 3-7 zásahu (v závislosti na příznacích), ve srovnání s 65. % pacientů v kontrolní skupině; (ii) Očekává se, že pacienti ve skupině Navax zaznamenají významnější snížení (>10násobek) zátěže RSV ve srovnání s pacienty v kontrolní skupině 3. den intervence.