Effekten av LiveSpo Navax vid stödjande behandling av lunginflammation hos barn med RSV och bakteriella samtidiga infektioner

Lunginflammation är en vanlig sjukdom hos barn och en av de vanligaste dödsorsakerna hos små barn, särskilt de under 1 år gamla, spädbarn och undernärda barn. Enligt Världshälsoorganisationen (WHO) dör uppskattningsvis 12,9 miljoner barn varje år, varav 4,3 miljoner (33,4%) av dessa dödsfall beror på lunginflammation. I Vietnam är dödligheten i lunginflammation högst bland luftvägssjukdomar (75 %), jämfört med den totala dödligheten på 30-35 %. Statistik visar att ett barn i genomsnitt kan uppleva 3 till 5 episoder av akuta luftvägsinfektioner per år, inklusive 1 till 2 episoder av lunginflammation. Infektion med respiratoriskt syncytialvirus (RSV) och bakteriell samtidig infektion är de främsta orsakerna till svår lunginflammation, och frekvensen av samtidig infektion kan variera från 26,3 % till 43,6 %. Vanligt associerade bakterier inkluderar Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Staphylococcus aureus och Moraxella catarrhalis. Dessa bakterier kan invadera de nedre luftvägarna och orsaka sekundära infektioner och dra nytta av andningsskador orsakade av RSV.

För närvarande finns det inget vaccin eller specifik behandling tillgänglig för barn med RSV-infektion, och syrgasbehandling rekommenderas generellt för barn som upplever andningssvikt. Användningen av den monoklonala antikroppen palivizumab och det antivirala nukleotidläkemedlet ribavirin anses vara för dyrt eller riskabelt för barn och rekommenderas endast för högriskpatienter. Bakteriella samtidiga infektioner kräver ofta antibiotikabehandling baserad på misstänkta eller kända patogener, men användningen av antibiotika har betydande biverkningar och väcker oro för utvecklingen av resistens.

Under de senaste åren har probiotika vunnit popularitet som lovande och säkra kandidater för förebyggande och stödjande behandlingar vid luftvägsinfektioner, som syftar till att hjälpa till med behandling och minskning av luftvägsinfektioner. Probiotika, som är levande mikroorganismer som ger hälsofördelar när de konsumeras i tillräckliga mängder, har traditionellt använts för att främja tarmhälsa. Deras potentiella roll vid luftvägsinfektioner, speciellt RSV-lunginflammation, har dock inte undersökts i stor omfattning. Vissa studier tyder på att vissa stammar av probiotika direkt kan interagera med virus, fånga upp dem, inducera sekundär tillväxt för att hämma virusinträde och tillväxt, eller modulera immunsvaret för att minska risken för luftvägsinfektioner. Icke desto mindre är effekten av orala probiotika på luftvägarna hos spädbarn vanligtvis försenad (vanligtvis cirka 3-12 månader) och används främst som profylax snarare än som ett komplement till ARTI-behandling. Därför finns det ett behov av alternativa tillförselvägar av probiotika vid ARTI-behandling. I vår senaste studie har vi bevisat att de nässprayande Bacillus spore probiotika i flytande form (LiveSpo Navax innehållande > 5 miljarder B. subtilis ANA4 och B. clausii ANA39/ 5 mL ampull) snabbt och effektivt kan lindra symtom på ARTIs p.g.a. respiratoriskt syncytialvirus (RSV)-infektion samtidigt som den uppvisar starka effekter för att minska virusbelastningen och inflammation. Detta fynd är den första demonstrationen av att sprejning av probiotika direkt i näsan kan vara en snabb och effektiv symtomatisk behandling av ARTI.

I denna följande studie genomförde vi den dubbelblinda, randomiserade och kontrollerade kliniska prövningen för att ytterligare undersöka effekten av LiveSpo Navax för att stödja behandlingen av barn med svår lunginflammation som behöver syrgasbehandling på grund av RSV och bakteriella samtidiga infektioner.

Metoder: En randomiserad, blind och kontrollerad klinisk prövning kommer att genomföras. Föräldrarna till patienterna kommer att behöva tillhandahålla olika uppgifter om sina barn, inklusive deras fullständiga namn, kön, ålder, obstetrisk historia, vaccinationshistorik och antibiotikaanvändning. Efter att ha erhållit informerat samtycke kommer 100 patienter med svår lunginflammation på grund av RSV och bakteriell samtidig infektion att slumpmässigt fördelas till två grupper (n = 50/grupp): kontrollgruppen (kallad "Kontrollgruppen") kommer att få 0,9 % NaCl fysiologisk saltlösning, och experimentgruppen (kallad "Navax"-gruppen) kommer att få probiotika LiveSpo Navax. Patienterna kommer att ges en kodad spray i form av ett blindprov för att säkerställa studiens objektivitet. Klinisk uppföljning kommer att utföras i 7 dagar eller mer, och nasofaryngeala prover kommer att samlas in på dag 0 och dag 3 för att utvärdera potentiella minskningar av virusmängd, samtidiga infektionsbakterier, modulering av överreagerad cytokinfrisättning och närvaron av probiotiska sporer i patientens nässlemhinna.

Realtids-PCR kommer att användas för att detektera mikroorganismer i nasofarynxproverna. Semi-kvantitativa analyser kommer att utföras för att mäta förändringar i RSV-belastning och samtidiga infektionsbakteriekoncentrationer med hjälp av realtids-PCR-rutinprotokollet, som har standardiserats enligt ISO 15189:2012-kriterierna och som rutinmässigt används på Vietnam National Children's Hospital. Detektion av Bacillus-stammar som tillhör B. subtilis och B. clausii kommer att utföras med hjälp av realtids-PCR SYBR Green-analys, som rutinmässigt utförs vid Spobiotic Research Center i Hanoi, Vietnam.

ELISA-analyser kommer att användas för att kvantifiera pro-inflammatoriska cytokinnivåer (t.ex. IL-6, IL-8, TNF-alfa...) och immunglobulin A (IgA) nivåer. Analyserna kommer att utföras med ett ELISA-kit enligt tillverkarens instruktioner.

Nasal mikrobiomanalys kommer att utföras med hjälp av nästa generations sekvensering (NGS) av 16S rRNA-genen vid Macrogen i Seoul, Korea, på Illumina MiSeq-plattformen med en 2 x 250 bp körkonfiguration.

Under behandlingen kommer patienter att övervakas dagligen med avseende på typiska kliniska symtom på svår lunginflammation på grund av RSV och bakteriell samtidig infektion, inklusive rinnande näsa, depression i bröstet, torra raser, fuktiga raser, oxymetri (SpO2) (%), puls (slag/ min), och andetag (slag/min), samt antalet dagar som kräver syrgasbehandling... fram till utskrivning. Patienternas hälsotillstånd kommer att observeras av läkare och sjuksköterskor och deras uppgifter kommer att registreras i journaler. Under hela studien kommer föräldrar att bli ombedda att avstå från att administrera andra probiotika, antingen via nässpray eller oral administrering, och från att använda andra 0,9% NaCl fysiologiska saltlösningssprayer för näsrengöring.

Datainsamling och statistisk analys kommer att innebära att man samlar in individuella journaler och systematiskt organiserar patientens information i en datauppsättning. Effekten av LiveSpo Navax kommer att utvärderas och jämföras med 0,9 % NaCl fysiologisk saltlösning baserat på olika kliniska och subkliniska kriterier erhållna från Navax- och kontrollgrupperna. Dessa kriterier inkluderar antalet dagar till symptomatisk lindring, minskningsnivåerna (2^△Ct) av RSV-belastning och samtidiga infektionsbakteriekoncentrationer. △Ct för målgener kommer att beräknas som Ct (tröskelcykel) på dag 3 - Ct på ​​dag 0, medan Ct för den interna kontrollen kommer att justeras för att vara lika bland alla prover. Dessutom kan de reducerade nivåerna av cytokiner (t.ex. IL-6, IL-8, TNF-alfa...), och IgA kommer att bedömas. Tabellanalysen kommer att utföras med χ2-testet eller Fishers exakta test för dikotoma variabler med förväntade cellvärden under fem. Kontinuerliga variabler kommer att jämföras med Wilcoxon-testet, t-testet eller Mann-Whitney-testet när data inte är normalfördelade. Korrelationerna mellan variabler kommer att bedömas med hjälp av Spearmans korrelationsanalys. Statistiska och grafiska analyser kommer att utföras med programvaran GraphPad Prism v8.4.3 (GraphPad Software, CA, USA). Signifikansnivån för alla analyser sätts till p < 0,05.

Förväntade resultat: (i) LiveSpo Navax förväntas lindra RSV-infektionssymtom cirka 25 % mer effektivt, med 90 % av patienterna i Navax-gruppen som är symtomfria dag 3-7 av interventionen (beroende på symtom), jämfört med 65 % av patienterna i kontrollgruppen; (ii) Patienter i Navax-gruppen förväntas uppleva mer signifikanta minskningar (>10 gånger) i RSV-belastning jämfört med patienter i kontrollgruppen på dag 3 av interventionen.