Eficácia de LiveSpo Navax no tratamento de suporte de pneumonia em crianças com infecções por RSV e bactérias

A pneumonia é uma doença comum em crianças e uma das principais causas de morte em crianças pequenas, especialmente aquelas com menos de 1 ano de idade, lactentes e crianças desnutridas. Segundo a Organização Mundial da Saúde (OMS), cerca de 12,9 milhões de crianças morrem a cada ano, sendo 4,3 milhões (33,4%) dessas mortes atribuídas à pneumonia. No Vietnã, a taxa de mortalidade por pneumonia é maior entre as doenças respiratórias (75%), em comparação com a taxa de mortalidade geral de 30-35%. As estatísticas mostram que, em média, uma criança pode ter de 3 a 5 episódios de infecções respiratórias agudas por ano, incluindo 1 a 2 episódios de pneumonia. A infecção pelo vírus sincicial respiratório (VSR) e a co-infecção bacteriana são as principais causas de pneumonia grave, e a taxa de co-infecção pode variar de 26,3% a 43,6%. Bactérias comumente associadas incluem Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Staphylococcus aureus e Moraxella catarrhalis. Essas bactérias podem invadir o trato respiratório inferior e causar infecções secundárias, aproveitando os danos respiratórios causados ​​pelo VSR.

Atualmente, não há vacina ou tratamento específico disponível para crianças com infecção por VSR, e a oxigenoterapia é geralmente recomendada para crianças com insuficiência respiratória. O uso do anticorpo monoclonal palivizumabe e do nucleotídeo antiviral ribavirina é considerado muito caro ou arriscado para crianças e só é recomendado para pacientes de alto risco. Co-infecções bacterianas geralmente requerem tratamento com antibióticos com base em patógenos suspeitos ou conhecidos, mas o uso de antibióticos tem efeitos colaterais significativos e levanta preocupações sobre o desenvolvimento de resistência.

Nos últimos anos, os probióticos ganharam popularidade como candidatos promissores e seguros para terapias preventivas e de suporte em infecções respiratórias, visando auxiliar no tratamento e redução de infecções do trato respiratório. Os probióticos, que são microrganismos vivos que fornecem benefícios à saúde quando consumidos em quantidades adequadas, têm sido tradicionalmente usados ​​para promover a saúde intestinal. No entanto, seu papel potencial em infecções respiratórias, especificamente pneumonia por RSV, não foi amplamente explorado. Alguns estudos sugerem que certas cepas de probióticos podem interagir diretamente com os vírus, capturando-os, induzindo o crescimento secundário para inibir a entrada e o crescimento do vírus, ou modulando a resposta imune para reduzir o risco de infecções respiratórias. No entanto, o impacto dos probióticos orais no trato respiratório de bebês geralmente é retardado (geralmente em torno de 3 a 12 meses) e usado principalmente para profilaxia, e não como adjuvante no tratamento de ARTI. Portanto, há uma necessidade de rotas alternativas de entrega de probióticos no tratamento de ARTI. Em nosso estudo recente, provamos que os probióticos de forma líquida de esporos de Bacillus em spray nasal (LiveSpo Navax contendo > 5 bilhões de B. subtilis ANA4 e B. clausii ANA39/ampola de 5 mL) podem aliviar de forma rápida e eficaz os sintomas de ARTIs devido a infecção pelo vírus sincicial respiratório (VSR), exibindo fortes impactos na redução da carga viral e inflamação. Esta descoberta é a primeira demonstração de que a pulverização de probióticos diretamente no nariz pode ser um tratamento sintomático rápido e eficaz para ARTIs.

Neste estudo a seguir, conduzimos o ensaio clínico duplo-cego, randomizado e controlado para examinar mais detalhadamente a eficácia do LiveSpo Navax no suporte ao tratamento de crianças com pneumonia grave que requerem oxigenoterapia devido a RSV e co-infecções bacterianas.

Métodos: Será realizado um ensaio clínico randomizado, cego e controlado. Os pais dos pacientes deverão fornecer várias informações sobre seus filhos, incluindo nome completo, sexo, idade, histórico obstétrico, histórico de vacinação e histórico de uso de antibióticos. Após obtenção do consentimento informado, 100 pacientes com pneumonia grave por VSR e co-infecção bacteriana serão distribuídos aleatoriamente em dois grupos (n = 50/grupo): o grupo controle (referido como grupo "Controle") receberá 0,9% NaCl salina fisiológica, e o grupo experimental (referido como o grupo "Navax") receberá os probióticos LiveSpo Navax. Os pacientes receberão um spray codificado na forma de uma amostra cega para garantir a objetividade do estudo. O acompanhamento clínico será realizado por 7 dias ou mais, e amostras nasofaríngeas serão coletadas no dia 0 e no dia 3 para avaliar possíveis reduções na carga viral, co-infecção bacteriana, modulação da liberação exagerada de citocinas e presença de esporos probióticos na mucosa nasal do paciente.

A PCR em tempo real será utilizada para detectar microrganismos nas amostras nasofaríngeas. Ensaios semiquantitativos serão realizados para medir mudanças na carga de RSV e concentrações bacterianas de co-infecção usando o protocolo de rotina PCR em tempo real, que foi padronizado sob os critérios ISO 15189:2012 e é usado rotineiramente no Vietnam National Children's Hospital. A detecção de cepas de Bacillus pertencentes a B. subtilis e B. clausii será realizada usando o ensaio SYBR Green de PCR em tempo real, que é realizado rotineiramente no Spobiotic Research Center em Hanói, Vietnã.

Ensaios de ELISA serão usados ​​para quantificar os níveis de citocinas pró-inflamatórias (por exemplo, IL-6, IL-8, TNF-alfa...) e os níveis de Imunoglobulina A (IgA). Os ensaios serão realizados com kit ELISA de acordo com as instruções do fabricante.

A análise do microbioma nasal será realizada usando o sequenciamento de próxima geração (NGS) do gene 16S rRNA na Macrogen em Seul, Coréia, na plataforma Illumina MiSeq com uma configuração de execução de 2 x 250 bp.

Durante o tratamento, os pacientes serão monitorados diariamente quanto a sintomas clínicos típicos de pneumonia grave por VSR e co-infecção bacteriana, incluindo coriza, depressão torácica, estertores secos, estertores úmidos, oximetria (SpO2) (%), pulso (batimentos/ min) e respiração (batimentos/min), bem como o número de dias que necessitaram de oxigenoterapia... até a alta. As condições de saúde dos pacientes serão observadas por médicos e enfermeiras, e suas informações serão registradas em prontuários. Ao longo do estudo, os pais serão solicitados a abster-se de administrar outros probióticos, seja via spray nasal ou administração oral, e de usar outros sprays de solução salina fisiológica de NaCl 0,9% para limpeza nasal.

A coleta de dados e a análise estatística envolverão a coleta de registros médicos individuais e a organização sistemática das informações do paciente em um conjunto de dados. A eficácia de LiveSpo Navax será avaliada e comparada com solução salina fisiológica de NaCl 0,9% com base em vários critérios clínicos e subclínicos obtidos dos grupos Navax e Controle. Esses critérios incluem o número de dias até o alívio sintomático, os níveis de redução (2^△Ct) da carga de VSR e as concentrações bacterianas da co-infecção. O △Ct para genes-alvo será calculado como Ct (ciclo limiar) no dia 3 - Ct no dia 0, enquanto o Ct do controle interno será ajustado para ser igual entre todas as amostras. Além disso, os níveis reduzidos de citocinas (por exemplo, IL-6, IL-8, TNF-alfa...) e IgA serão avaliados. A análise tabular será realizada por meio do teste do χ2 ou teste exato de Fisher para variáveis ​​dicotômicas com valores de célula esperados abaixo de cinco. As variáveis ​​contínuas serão comparadas usando o teste de Wilcoxon, teste t ou teste de Mann-Whitney quando os dados não forem normalmente distribuídos. As correlações entre as variáveis ​​serão avaliadas por meio da análise de correlação de Spearman. As análises estatísticas e gráficas serão realizadas usando o software GraphPad Prism v8.4.3 (GraphPad Software, CA, EUA). O nível de significância para todas as análises será estabelecido em p < 0,05.

Resultados esperados: (i) Espera-se que LiveSpo Navax alivie os sintomas de infecção por RSV com cerca de 25% mais eficácia, com 90% dos pacientes no grupo Navax sem sintomas no dia 3-7 da intervenção (dependendo dos sintomas), em comparação com 65 % de pacientes do grupo Controle; (ii) Espera-se que os pacientes do grupo Navax experimentem reduções mais significativas (>10 vezes) na carga de VSR em comparação com os pacientes do grupo Controle no dia 3 da intervenção.