Efficacité de LiveSpo Navax dans le traitement de soutien de la pneumonie chez les enfants atteints de VRS et de co-infections bactériennes

La pneumonie est une maladie courante chez les enfants et l'une des principales causes de décès chez les jeunes enfants, en particulier ceux de moins d'un an, les nourrissons et les enfants malnutris. Selon l'Organisation mondiale de la santé (OMS), environ 12,9 millions d'enfants meurent chaque année, dont 4,3 millions (33,4 %) sont attribués à la pneumonie. Au Vietnam, le taux de mortalité par pneumonie est le plus élevé parmi les maladies respiratoires (75 %), par rapport au taux de mortalité global de 30 à 35 %. Les statistiques montrent qu'en moyenne, un enfant peut connaître 3 à 5 épisodes d'infections respiratoires aiguës par an, dont 1 à 2 épisodes de pneumonie. L'infection par le virus respiratoire syncytial (VRS) et la co-infection bactérienne sont les principales causes de pneumonie grave, et le taux de co-infection peut varier de 26,3 % à 43,6 %. Les bactéries couramment associées comprennent Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Staphylococcus aureus et Moraxella catarrhalis. Ces bactéries peuvent envahir les voies respiratoires inférieures et provoquer des infections secondaires, profitant des dommages respiratoires causés par le VRS.

Actuellement, il n'existe aucun vaccin ou traitement spécifique disponible pour les enfants infectés par le VRS, et l'oxygénothérapie est généralement recommandée pour les enfants souffrant d'insuffisance respiratoire. L'utilisation de l'anticorps monoclonal palivizumab et de la ribavirine, un médicament antiviral nucléotidique, est considérée comme trop coûteuse ou risquée pour les enfants et n'est recommandée que pour les patients à haut risque. Les co-infections bactériennes nécessitent souvent un traitement antibiotique basé sur des agents pathogènes suspectés ou connus, mais l'utilisation d'antibiotiques a des effets secondaires importants et soulève des inquiétudes quant au développement de résistances.

Ces dernières années, les probiotiques ont gagné en popularité en tant que candidats prometteurs et sûrs pour les thérapies préventives et de soutien des infections respiratoires, visant à aider au traitement et à la réduction des infections des voies respiratoires. Les probiotiques, qui sont des micro-organismes vivants procurant des bienfaits pour la santé lorsqu'ils sont consommés en quantités adéquates, ont traditionnellement été utilisés pour promouvoir la santé intestinale. Cependant, leur rôle potentiel dans les infections respiratoires, en particulier la pneumonie à VRS, n'a pas été largement exploré. Certaines études suggèrent que certaines souches de probiotiques peuvent interagir directement avec les virus, en les capturant, en induisant une croissance secondaire pour inhiber l'entrée et la croissance du virus, ou en modulant la réponse immunitaire pour réduire le risque d'infections respiratoires. Néanmoins, l'impact des probiotiques oraux sur les voies respiratoires des nourrissons est généralement retardé (généralement autour de 3 à 12 mois) et principalement utilisé pour la prophylaxie plutôt que comme complément au traitement ARTI. Par conséquent, il existe un besoin pour des voies d'administration alternatives de probiotiques dans le traitement ARTI. Dans notre étude récente, nous avons prouvé que les probiotiques sous forme liquide de spores de Bacillus à pulvérisation nasale (LiveSpo Navax contenant > 5 milliards de B. subtilis ANA4 et B. clausii ANA39/ampoule de 5 ml) peuvent soulager rapidement et efficacement les symptômes des IRA dus à infection par le virus respiratoire syncytial (VRS) tout en présentant de forts impacts sur la réduction de la charge virale et de l'inflammation. Cette découverte est la première démonstration que la pulvérisation de probiotiques directement dans le nez pourrait être un traitement symptomatique rapide et efficace des IRA.

Dans cette étude suivante, nous avons mené l'essai clinique en double aveugle, randomisé et contrôlé pour examiner plus en détail l'efficacité de LiveSpo Navax dans le soutien du traitement des enfants atteints de pneumonie sévère qui nécessitent une oxygénothérapie en raison du VRS et des co-infections bactériennes.

Méthodes : Un essai clinique randomisé, en aveugle et contrôlé sera mené. Les parents des patients seront tenus de fournir diverses informations sur leurs enfants, notamment leur nom complet, leur sexe, leur âge, leurs antécédents obstétricaux, leurs antécédents de vaccination et leurs antécédents d'utilisation d'antibiotiques. Après obtention du consentement éclairé, 100 patients atteints de pneumonie sévère due au VRS et à une co-infection bactérienne seront randomisés en deux groupes (n = 50/groupe) : le groupe témoin (appelé groupe « Témoin ») recevra 0,9 % NaCl sérum physiologique, et le groupe expérimental (appelé groupe « Navax ») recevra les probiotiques LiveSpo Navax. Les patients recevront un spray codé sous forme d'échantillon à l'aveugle pour garantir l'objectivité de l'étude. Un suivi clinique sera effectué pendant 7 jours ou plus, et des échantillons nasopharyngés seront prélevés au jour 0 et au jour 3 pour évaluer les réductions potentielles de la charge virale, les bactéries co-infectées, la modulation de la libération de cytokines ayant réagi de manière excessive et la présence de spores probiotiques dans la muqueuse nasale du patient.

La PCR en temps réel sera utilisée pour détecter les micro-organismes dans les échantillons nasopharyngés. Des tests semi-quantitatifs seront effectués pour mesurer les changements dans la charge de VRS et les concentrations bactériennes de co-infection à l'aide du protocole de routine PCR en temps réel, qui a été normalisé selon les critères ISO 15189: 2012 et est couramment utilisé à l'hôpital national pour enfants du Vietnam. La détection des souches de Bacillus appartenant à B. subtilis et B. clausii sera effectuée à l'aide du test PCR SYBR Green en temps réel, qui est régulièrement effectué au Spobiotic Research Center à Hanoï, au Vietnam.

Des tests ELISA seront utilisés pour quantifier les niveaux de cytokines pro-inflammatoires (par exemple, IL-6, IL-8, TNF-alpha...) et les niveaux d'immunoglobuline A (IgA). Les dosages seront effectués à l'aide d'un kit ELISA selon les instructions du fabricant.

L'analyse du microbiome nasal sera effectuée à l'aide du séquençage de nouvelle génération (NGS) du gène de l'ARNr 16S chez Macrogen à Séoul, en Corée, sur la plateforme Illumina MiSeq avec une configuration d'exécution de 2 x 250 pb.

Pendant le traitement, les patients seront surveillés quotidiennement pour détecter les symptômes cliniques typiques d'une pneumonie sévère due au VRS et à une co-infection bactérienne, notamment écoulement nasal, dépression thoracique, râles secs, râles humides, oxymétrie (SpO2) (%), pouls (battements/ min), et respiration (battements/min), ainsi que le nombre de jours nécessitant une oxygénothérapie... jusqu'à la sortie. L'état de santé des patients sera observé par des médecins et des infirmières, et leurs informations seront consignées dans des dossiers médicaux. Tout au long de l'étude, il sera demandé aux parents de s'abstenir d'administrer d'autres probiotiques, que ce soit par pulvérisation nasale ou par voie orale, et d'utiliser d'autres sprays salins physiologiques à 0,9 % de NaCl pour le nettoyage nasal.

La collecte de données et l'analyse statistique impliqueront la collecte de dossiers médicaux individuels et l'organisation systématique des informations du patient dans un ensemble de données. L'efficacité de LiveSpo Navax sera évaluée et comparée à une solution saline physiologique NaCl à 0,9 % sur la base de divers critères cliniques et sous-cliniques obtenus auprès des groupes Navax et Contrôle. Ces critères comprennent le nombre de jours jusqu'au soulagement des symptômes, les niveaux de réduction (2^△Ct) de la charge de VRS et les concentrations bactériennes de co-infection. Le △Ct pour les gènes cibles sera calculé comme Ct (cycle seuil) au jour 3 - Ct au jour 0, tandis que le Ct du contrôle interne sera ajusté pour être égal parmi tous les échantillons. De plus, les niveaux réduits de cytokines (par ex. IL-6, IL-8, TNF-alpha...), et IgA seront évalués. L'analyse tabulaire sera effectuée à l'aide du test χ2 ou du test exact de Fisher pour les variables dichotomiques avec des valeurs de cellule attendues inférieures à cinq. Les variables continues seront comparées à l'aide du test de Wilcoxon, du test t ou du test de Mann-Whitney lorsque les données ne sont pas distribuées normalement. Les corrélations entre les variables seront évaluées à l'aide de l'analyse de corrélation de Spearman. Des analyses statistiques et graphiques seront effectuées à l'aide du logiciel GraphPad Prism v8.4.3 (GraphPad Software, CA, USA). Le seuil de signification pour toutes les analyses sera fixé à p < 0,05.

Résultats attendus : (i) LiveSpo Navax devrait atténuer les symptômes d'infection par le VRS d'environ 25 % plus efficacement, 90 % des patients du groupe Navax étant asymptomatiques au jour 3-7 de l'intervention (selon les symptômes), contre 65 % de patients du groupe témoin ; (ii) Les patients du groupe Navax devraient connaître des réductions plus importantes (> 10 fois) de la charge de VRS par rapport aux patients du groupe témoin au jour 3 de l'intervention.