Effekten av LiveSpo Navax i støttende behandling av lungebetennelse hos barn med RSV og bakterielle samtidige infeksjoner

Lungebetennelse er en vanlig sykdom hos barn og en av de viktigste dødsårsakene hos små barn, spesielt de under 1 år, spedbarn og underernærte barn. Ifølge Verdens helseorganisasjon (WHO) dør anslagsvis 12,9 millioner barn hvert år, med 4,3 millioner (33,4%) av dødsfallene tilskrevet lungebetennelse. I Vietnam er dødeligheten av lungebetennelse høyest blant luftveissykdommer (75 %), sammenlignet med den totale dødeligheten på 30-35 %. Statistikk viser at i gjennomsnitt kan et barn oppleve 3 til 5 episoder med akutte luftveisinfeksjoner per år, inkludert 1 til 2 episoder med lungebetennelse. Respiratorisk syncytialvirus (RSV)-infeksjon og bakteriell ko-infeksjon er de viktigste årsakene til alvorlig lungebetennelse, og frekvensen av samtidig infeksjon kan variere fra 26,3 % til 43,6 %. Vanlige assosierte bakterier inkluderer Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Staphylococcus aureus og Moraxella catarrhalis. Disse bakteriene kan invadere de nedre luftveiene og forårsake sekundære infeksjoner, og dra nytte av luftveisskader forårsaket av RSV.

Foreløpig er det ingen vaksine eller spesifikk behandling tilgjengelig for barn med RSV-infeksjon, og oksygenbehandling anbefales generelt for barn som opplever respirasjonssvikt. Bruk av det monoklonale antistoffet palivizumab og det antivirale nukleotidmiddelet ribavirin anses for dyrt eller risikabelt for barn og anbefales kun for høyrisikopasienter. Bakterielle koinfeksjoner krever ofte antibiotikabehandling basert på mistenkte eller kjente patogener, men bruk av antibiotika har betydelige bivirkninger og gir bekymring for utvikling av resistens.

De siste årene har probiotika vunnet popularitet som lovende og trygge kandidater for forebyggende og støttende behandlinger ved luftveisinfeksjoner, med sikte på å hjelpe til med behandling og reduksjon av luftveisinfeksjoner. Probiotika, som er levende mikroorganismer som gir helsemessige fordeler når de konsumeres i tilstrekkelige mengder, har tradisjonelt blitt brukt for å fremme tarmhelsen. Imidlertid har deres potensielle rolle i luftveisinfeksjoner, spesielt RSV-lungebetennelse, ikke blitt grundig utforsket. Noen studier tyder på at visse stammer av probiotika kan samhandle direkte med virus, fange dem, indusere sekundær vekst for å hemme virusinntrengning og -vekst, eller modulere immunresponsen for å redusere risikoen for luftveisinfeksjoner. Likevel er virkningen av orale probiotika på luftveiene til spedbarn vanligvis forsinket (vanligvis rundt 3-12 måneder) og brukes primært til profylakse i stedet for som et tillegg til ARTI-behandling. Derfor er det behov for alternative leveringsveier for probiotika i ARTI-behandling. I vår nylige studie har vi bevist at de nesesprayende Bacillus-spore-probiotika i flytende form (LiveSpo Navax som inneholder > 5 milliarder B. subtilis ANA4 og B. clausii ANA39/ 5 mL ampulle) raskt og effektivt kan lindre symptomer på ARTIs pga. infeksjon med respiratorisk syncytialvirus (RSV) mens de viser sterke effekter for å redusere virusmengden og betennelsen. Dette funnet er den første demonstrasjonen av at spraying av probiotika direkte inn i nesen kan være en rask og effektiv symptomatisk behandling for ARTIs.

I denne følgende studien gjennomførte vi den dobbeltblinde, randomiserte og kontrollerte kliniske studien for å undersøke effekten av LiveSpo Navax ytterligere for å støtte behandlingen av barn med alvorlig lungebetennelse som trenger oksygenbehandling på grunn av RSV og bakterielle samtidige infeksjoner.

Metoder: En randomisert, blind og kontrollert klinisk studie vil bli utført. Foreldrene til pasientene vil bli pålagt å gi ulike opplysninger om barna sine, inkludert fullt navn, kjønn, alder, fødselshistorie, vaksinasjonshistorie og antibiotikabrukshistorie. Etter å ha innhentet informert samtykke, vil 100 pasienter med alvorlig lungebetennelse på grunn av RSV og bakteriell samtidig infeksjon bli tilfeldig fordelt i to grupper (n = 50/gruppe): kontrollgruppen (referert til som «Kontroll»-gruppen) vil få 0,9 % NaCl fysiologisk saltvann, og den eksperimentelle gruppen (referert til som "Navax"-gruppen) vil motta probiotika LiveSpo Navax. Pasientene vil få en kodet spray i form av en blindprøve for å sikre objektiviteten til studien. Klinisk oppfølging vil bli utført i 7 dager eller mer, og nasofaryngeale prøver vil bli samlet inn på dag 0 og dag 3 for å evaluere potensielle reduksjoner i viral belastning, samtidige infeksjonsbakterier, modulering av overreagert cytokinfrigjøring og tilstedeværelsen av probiotiske sporer i pasientens neseslimhinne.

Sanntids-PCR vil bli brukt til å oppdage mikroorganismer i nesesvelgprøvene. Semikvantitative analyser vil bli utført for å måle endringer i RSV-belastning og samtidige infeksjonsbakteriekonsentrasjoner ved å bruke sanntids PCR-rutineprotokollen, som er standardisert under ISO 15189:2012-kriterier og brukes rutinemessig ved Vietnam National Children's Hospital. Deteksjon av Bacillus-stammer som tilhører B. subtilis og B. clausii vil bli utført ved hjelp av sanntids PCR SYBR Green-analyse, som rutinemessig utføres ved Spobiotic Research Center i Hanoi, Vietnam.

ELISA-analyser vil bli brukt til å kvantifisere pro-inflammatoriske cytokinnivåer (f.eks. IL-6, IL-8, TNF-alfa...) og immunglobulin A (IgA) nivåer. Analysene vil bli utført med et ELISA-sett i henhold til produsentens instruksjoner.

Nasal mikrobiomanalyse vil bli utført ved bruk av neste generasjons sekvensering (NGS) av 16S rRNA-genet ved Macrogen i Seoul, Korea, på Illumina MiSeq-plattformen med en 2 x 250 bp-konfigurasjon.

Under behandlingen vil pasienter daglig overvåkes for typiske kliniske symptomer på alvorlig lungebetennelse på grunn av RSV og bakteriell samtidig infeksjon, inkludert rennende nese, brystdepresjon, tørre bølger, fuktige bølger, oksymetri (SpO2) (%), puls (slag/ min), og pust (slag/min), samt antall dager som krever oksygenbehandling... frem til utskrivning. Pasientenes helsetilstand vil bli observert av leger og sykepleiere, og deres opplysninger vil bli registrert i journal. Gjennom hele studien vil foreldre bli bedt om å avstå fra å administrere andre probiotika, enten via nesespray eller oral administrering, og fra å bruke andre 0,9 % NaCl fysiologiske saltvannssprayer for neserens.

Datainnsamling og statistisk analyse vil innebære innsamling av individuelle journaler og systematisk organisering av pasientens informasjon i et datasett. Effekten av LiveSpo Navax vil bli evaluert og sammenlignet med 0,9 % NaCl fysiologisk saltvann basert på ulike kliniske og subkliniske kriterier hentet fra Navax- og kontrollgruppene. Disse kriteriene inkluderer antall dager til symptomatisk lindring, reduksjonsnivåene (2^△Ct) av RSV-belastning og samtidige infeksjonsbakteriekonsentrasjoner. △Ct for målgener vil bli beregnet som Ct (terskelsyklus) på dag 3 - Ct på ​​dag 0, mens Ct for internkontrollen vil bli justert til å være lik blant alle prøver. I tillegg kan de reduserte nivåene av cytokiner (f.eks. IL-6, IL-8, TNF-alfa...), og IgA vil bli vurdert. Tabellanalysen vil bli utført ved å bruke χ2-testen eller Fishers eksakte test for dikotome variabler med forventede celleverdier under fem. Kontinuerlige variabler vil bli sammenlignet med Wilcoxon-testen, t-testen eller Mann-Whitney-testen når data ikke er normalfordelt. Korrelasjonene mellom variabler vil bli vurdert ved hjelp av Spearmans korrelasjonsanalyse. Statistiske og grafiske analyser vil bli utført med GraphPad Prism v8.4.3 programvare (GraphPad Software, CA, USA). Signifikansnivået for alle analyser vil settes til p < 0,05.

Forventede resultater: (i) LiveSpo Navax forventes å lindre RSV-infeksjonssymptomer omtrent 25 % mer effektivt, med 90 % av pasientene i Navax-gruppen som er symptomfrie på dag 3-7 av intervensjonen (avhengig av symptomer), sammenlignet med 65 % av pasientene i kontrollgruppen; (ii) Pasienter i Navax-gruppen forventes å oppleve mer signifikant reduksjon (>10 ganger) i RSV-belastning sammenlignet med pasienter i kontrollgruppen på dag 3 av intervensjon.