th2 调制 CRSwNP

目的：

CRS 是一种人们知之甚少的疾病，其治疗策略不佳且疾病负担较高。 Th2 极化 T 细胞反应和 B 细胞 IgE 类别转换以及浆细胞浸润形式的适应性免疫是嗜酸性 CRS 和哮喘的核心组成部分，但我们对 CRS 适应性免疫的了解仍然有限。 通过 IL-5 阻断来调节 Th2 反应会给 CRSwNP 患者带来好坏参半的结果。 许多患者通过 IL-5 阻断疗法实现了哮喘控制的改善，但他们的鼻部疾病却没有得到同样的改善，概述了目前对疾病活动、疾病内型以及调节鼻腔疾病的影响因素的了解有限。该组织环境中的 Th2 反应。 在细胞水平上提高对 IL-5 阻断对鼻组织免疫调节的理解是正确选择患者和开发新的靶向疗法的重要一步。 单细胞转录组学是表征组织免疫景观和功能变异的强大工具，但除了 CRS 中鼻上皮的研究外，尚未得到充分利用

假设

• IL-5阻断刺激鼻组织T细胞>外周血T细胞活性增加，并促进组织T细胞Th2极化增加
• IL-5 阻断可通过增加 Tfh-B 细胞相互作用以及通过上调生发中心 B 细胞中的 BLIMP1 来促进组织抗体分泌细胞的成熟，从而刺激鼻二级和三级淋巴结构中 B 细胞生发中心活性的增加。

目标

1. 通过生发中心活动的可视化和建模、生发中心活动的细胞支持以及 B 细胞克隆选择的评估，与循环免疫相比，表征 CRSwNP 中三级（鼻）和二级（鼻后空间）淋巴器官的局部粘膜 B 细胞反应使用单细胞转录组学、单细胞 BCR（B 细胞受体）测序和通过共聚焦显微镜的空间分辨率进行类别转换、命运和体细胞超突变。
2. 使用单细胞转录组学和 VDJ（可变、多样性和连接）谱分析来表征通过 IL-5 阻断进行 Th2 调节对鼻 T 和 B 细胞适应性免疫记忆的形成和维持的影响。
3. 使用单细胞转录组学、共聚焦显微镜和鼻细胞因子分析，在存在 IL-5 阻断的情况下定位 CRSwNP 中促炎信号传导的鼻源。
4. 通过单细胞转录组学将鼻促炎细胞亚群与配对外周血样本进行比较，以将活性与候选生物标志物相关联。

研究设计

拟议的研究是一项前瞻性实验医学研究，使用 IL-5 阻断作为研究 Th2 调节对 CRSwNP 局部组织适应性免疫生成的影响的方法。 参与者将被分为：

• 治疗组：20 名患有 CRSwNP 和哮喘的受试者将开始美泊利单抗治疗
• 疾病对照组：10 名患有 CRSsNP 且无哮喘的受试者，不会开始美泊利单抗治疗，并将继续其标准护理治疗。
• 对照组：10名无任何鼻窦疾病的健康受试者

这项研究涉及治疗组的 3 次研究访视（基线、第 6 周和第 30 周）、疾病控制受试者的两次访视以及健康对照受试者的一次（基线）访视。

接受研究药物治疗的参与者将每 4 周皮下注射 100 毫克美泊利单抗。

治疗臂：

CRSwNP (NPS 1-8) 和接受 IL-5 阻断的哮喘（美泊利单抗）

• 第 0 周：招募、筛选和启动标准护理治疗

o 鼻腔和血液样本 第 6 周 - 美泊利单抗开始前（治疗前） 第 30 周 - 美泊利单抗开始后（治疗中）

控制臂：

1. 病害控制：

   不伴有哮喘的 CRSsNP

   • 第 0 周：招募、筛选和启动标准护理治疗

   o 第 6 周鼻腔和血液样本 - 标准护理治疗 6 周后

2. 健康控制 • 第 0 周：招募和筛查、鼻腔和血液样本

统计分析 单细胞RNA测序数据 测序数据将与CellRanger v7.0进行比对。 生成的输出文件将使用 Scanpy 中的标准过滤和 QC 管道进行处理。 将使用 scVI 执行批量校正，并执行 Leiden 聚类。 将使用规范标记基因和已发布的基因签名来分配簇标签，并通过 SingleR 包使用已发布的排序免疫细胞数据集进行验证。 下游分析将包括但不限于 Hallmark 和基因本体基因集的基因集表达分析 (GSEA)、差异丰度测试、加权基因共表达网络分析以及使用 CellphoneDB 对细胞间相互作用进行插补。 TCR 分析将使用 Scirpy 进行，BCR 分析将使用 Dandelion 和 Immcantation 套件进行