th2 Модуляция CRSwNP

Цель:

СВК — плохо изученное заболевание с неоптимальной терапевтической стратегией и высоким бременем заболевания. Адаптивный иммунитет в виде Th2-поляризованных Т-клеточных ответов и переключения класса IgE В-клеток, а также инфильтрации плазматических клеток являются основным компонентом эозинофильного СВК и астмы, однако наше понимание адаптивного иммунитета при СВК остается ограниченным. Модуляция ответа Th2 посредством блокады IL-5 приводит к неоднозначным результатам для пациентов с CRSwNP. Существует ряд пациентов, которые достигают улучшенного контроля астмы с помощью блокады IL-5, но не видят таких же улучшений при заболеваниях носа, что подчеркивает нынешнее ограниченное понимание факторов, участвующих в активности заболевания, эндотипов заболевания и эффектов модуляции Th2-ответ в этой тканевой среде. Лучшее понимание модуляции иммунитета тканей носа посредством блокады IL-5 на клеточном уровне является важным шагом на пути к соответствующему отбору пациентов и разработке новых таргетных терапевтических средств. Транскриптомика отдельных клеток является мощным инструментом для характеристики тканевого иммунного ландшафта и функциональных вариаций, но пока еще плохо используется за пределами исследований назального эпителия при СВК.

Гипотеза

• Блокада IL-5 стимулирует повышенную активность Т-клеток ткани носа > Т-клеток периферической крови и способствует увеличению поляризации Th2 Т-клеток ткани.
• Блокада IL-5 стимулирует повышенную активность зародышевого центра В-клеток во вторичных и третичных лимфоидных структурах носа за счет усиления взаимодействия Tfh-B-клеток и ускорения созревания клеток, секретирующих тканевые антитела, за счет активации BLIMP1 в В-клетках зародышевого центра.

Цели

1. Охарактеризовать местный ответ В-клеток слизистой оболочки в третичных (носовых) и вторичных (постназальное пространство) лимфоидных органах при CRSwNP по сравнению с циркулирующим иммунитетом посредством визуализации и моделирования активности зародышевого центра, клеточной поддержки активности зародышевого центра и оценки клонального отбора В-клеток. , переключение классов, судьба и соматическая гипермутация с использованием одноклеточной транскриптомики, секвенирования одноклеточного BCR (B-клеточного рецептора) и пространственного разрешения с помощью конфокальной микроскопии.
2. Используйте одноклеточную транскриптомику и анализ репертуара VDJ (переменная, разнообразие и объединение), чтобы охарактеризовать влияние модуляции Th2 посредством блокады IL-5 на формирование и поддержание назальной адаптивной иммунной памяти Т- и В-клеток.
3. Локализуйте назальные источники провоспалительной передачи сигналов в CRSwNP в присутствии блокады IL-5, используя одноклеточную транскриптомику, конфокальную микроскопию и анализ назальных цитокинов.
4. Сравните субпопуляции назальных провоспалительных клеток с парными образцами периферической крови с помощью транскриптомики отдельных клеток, чтобы коррелировать активность с кандидатами в биомаркеры.

Дизайн исследования

Предлагаемое исследование представляет собой проспективное экспериментальное медицинское исследование с использованием блокады IL-5 как способа изучения влияния модуляции Th2 на генерацию местного тканевого адаптивного иммунитета при CRSwNP. Участники будут классифицированы по:

• Группа лечения: 20 субъектов с CRSwNP и астмой, которые начнут лечение меполизумабом.
• Группа контроля заболевания: 10 субъектов с CRSsNP без астмы, которые не начнут прием меполизумаба и продолжат стандартное лечение.
• Контрольная группа: 10 здоровых людей без каких-либо заболеваний носовых пазух.

Это исследование включает три учебных визита для группы лечения (исходный уровень, недели 6 и 30), два визита для субъектов контроля заболевания и один визит (исходный уровень) для здоровых субъектов контрольной группы.

Участники, принимающие исследуемый препарат, будут получать 100 мг меполизумаба каждые 4 недели подкожно.

Лечебная группа:

CRSwNP (NPS 1-8) и астма, подвергающаяся блокаде IL-5 (меполизумаб)

• Неделя 0: набор, скрининг и начало стандартной терапии.

o Образцы из носа и крови. Неделя 6 – начало приема меполизумаба (до лечения). Неделя 30 – после начала лечения меполизумабом (во время лечения).

Рукоятка управления:

1. Контроль заболеваний:

   CRSsNP без астмы

   • Неделя 0: набор, скрининг и начало стандартной терапии.

   o Образцы крови и носа. Неделя 6. Через 6 недель стандартная терапия.

2. Здоровый контроль • Неделя 0: набор и проверка, пробы из носа и крови

Статистический анализ Данные секвенирования одноклеточной РНК Данные секвенирования будут приведены в соответствие с CellRanger v7.0. Полученные выходные файлы будут обработаны с использованием стандартной фильтрации и конвейера контроля качества в Scanpy. Пакетная коррекция будет выполняться с использованием scVI, а также будет выполняться кластеризация Лейдена. Метки кластеров будут присваиваться с использованием канонических маркерных генов и опубликованных сигнатур генов с проверкой с использованием опубликованного набора данных отсортированных иммунных клеток через пакет SingleR. Последующий анализ будет включать, помимо прочего, анализ экспрессии набора генов (GSEA) генных наборов Hallmark и Gene Ontology, дифференциальное тестирование численности, анализ сети взвешенной совместной экспрессии генов и расчет межклеточного взаимодействия с использованием CellphoneDB. Анализ TCR будет выполняться с использованием Scirpy, а анализ BCR — с помощью пакетов Dandelion и Immcantation.