Modulation th2 CRSwNP

But:

Le SRC est une maladie mal comprise, avec des stratégies thérapeutiques sous-optimales et une charge de morbidité élevée. L'immunité adaptative sous la forme de réponses des lymphocytes T polarisés Th2, de commutation de classe d'IgE des lymphocytes B et d'infiltration de plasmocytes est un élément essentiel du SRC éosinophile et de l'asthme, mais notre compréhension de l'immunité adaptative dans le SRC reste limitée. La modulation de la réponse Th2, via le blocage de l'IL-5, conduit à des résultats mitigés pour les patients CRSwNP. Un certain nombre de patients qui parviennent à mieux contrôler leur asthme grâce aux traitements bloquant l'IL-5 ne parviennent pas à constater les mêmes améliorations de leur maladie nasale, ce qui souligne la compréhension actuellement limitée des facteurs impliqués dans l'activité de la maladie, des endotypes de la maladie et des effets de la modulation de l'asthme. Réponse Th2 dans cet environnement tissulaire. Une meilleure compréhension de la modulation de l’immunité des tissus nasaux par le blocage de l’IL-5 au niveau cellulaire constitue une étape essentielle vers la sélection appropriée des patients et le développement de nouveaux traitements ciblés. La transcriptomique unicellulaire est un outil puissant pour caractériser les paysages immunitaires tissulaires et les variations fonctionnelles, mais elle a jusqu'à présent été peu utilisée au-delà des études sur l'épithélium nasal dans le SRC.

Hypothèse

• Le blocage de l'IL-5 stimule une activité accrue des cellules T des tissus nasaux > des cellules T du sang périphérique et favorise une polarisation accrue des cellules T Th2 des tissus.
• Le blocage de l'IL-5 stimule l'activité accrue du centre germinal des cellules B dans les structures lymphoïdes nasales secondaires et tertiaires, grâce à une augmentation des interactions cellulaires Tfh-B et à une maturation accrue des cellules sécrétant des anticorps tissulaires grâce à la régulation positive de BLIMP1 dans les cellules B du centre germinal.

Objectifs

1. Caractériser la réponse locale des lymphocytes B de la muqueuse dans les organes lymphoïdes tertiaires (nasaux) et secondaires (espace postnasal) du CRSwNP, par rapport à l'immunité circulante, par la visualisation et la modélisation de l'activité du centre germinal, le soutien cellulaire à l'activité du centre germinal et l'évaluation de la sélection clonale des lymphocytes B. , le changement de classe, le destin et l'hypermutation somatique à l'aide de la transcriptomique unicellulaire, du séquençage du BCR (récepteur des cellules B) unicellulaire et de la résolution spatiale par microscopie confocale.
2. Utiliser la transcriptomique unicellulaire et l’analyse du répertoire VDJ (variable, diversité et jonction) pour caractériser les effets de la modulation Th2, via le blocage de l’IL-5, sur la formation et le maintien de la mémoire immunitaire adaptative des lymphocytes T et B nasaux.
3. Localisez les sources nasales de signalisation pro-inflammatoire dans CRSwNP en présence d’un blocage de l’IL-5, à l’aide de la transcriptomique unicellulaire, de la microscopie confocale et de l’analyse nasale des cytokines.
4. Comparez les sous-ensembles de cellules pro-inflammatoires nasales avec des échantillons de sang périphérique appariés par transcriptomique unicellulaire, pour corréler l'activité avec les candidats biomarqueurs.

Conception de la recherche

L'étude proposée est une étude prospective de médecine expérimentale utilisant le blocage de l'IL-5 comme moyen d'étudier les effets de la modulation Th2 sur la génération d'immunité adaptative tissulaire locale dans CRSwNP. Les participants seront classés en :

• Groupe de traitement : 20 sujets atteints de CRSwNP et d'asthme qui commenceront le traitement par mépolizumab
• Groupe témoin de la maladie : 10 sujets atteints de CRSsNP sans asthme qui ne commenceront pas le mépolizumab et poursuivront leur traitement standard.
• Groupe témoin : 10 sujets sains sans aucune maladie des sinus

Cette étude comprend trois visites d'étude pour le bras de traitement (référence, semaines 6 et 30), deux visites pour les sujets témoins de la maladie et une visite (référence) pour les sujets témoins sains.

Les participants prenant le médicament à l'étude recevront 100 mg de mépolizumab toutes les 4 semaines par voie sous-cutanée.

Bras de traitement :

CRSwNP (NPS 1-8) et asthme soumis à un blocage de l'IL-5 (Mépolizumab)

• Semaine 0 : recrutement, sélection et début du traitement standard.

o Prélèvements nasaux et sanguins Semaine 6 - Début avant le mépolizumab (prétraitement) Semaine 30 - Après le début du mépolizumab (sous traitement)

Bras de commande:

1. Contrôle des maladies :

   CRSsNP sans asthme

   • Semaine 0 : recrutement, sélection et début du traitement standard.

   o Prélèvements nasaux et sanguins Semaine 6 - Après 6 semaines de traitement standard

2. Contrôle sain • Semaine 0 : Recrutement et dépistage, Prélèvements nasaux et sanguins

Analyse statistique Données de séquençage d'ARN unicellulaire Les données séquencées seront alignées sur CellRanger v7.0. Les fichiers de sortie résultants seront traités à l'aide d'un filtrage standard et d'un pipeline QC dans Scanpy. La correction par lots sera effectuée à l'aide de scVI et le clustering de Leiden sera effectué. Les étiquettes de cluster seront attribuées à l'aide de gènes marqueurs canoniques et de signatures génétiques publiées, avec validation à l'aide d'un ensemble de données publié de cellules immunitaires triées via le package SingleR. L'analyse en aval comprendra, sans toutefois s'y limiter, l'analyse de l'expression des ensembles génétiques (GSEA) des ensembles génétiques Hallmark et Gene Ontology, les tests d'abondance différentielle, l'analyse pondérée du réseau de co-expression génique et l'imputation de l'interaction cellule-cellule à l'aide de CellphoneDB. L'analyse TCR sera effectuée à l'aide de Scirpy et l'analyse BCR avec les suites Dandelion et Immcantation.