th2 Modulacja CRSwNP

Zamiar:

CRS jest chorobą słabo poznaną, charakteryzującą się nieoptymalnymi strategiami terapeutycznymi i dużym obciążeniem chorobowym. Odporność nabyta w postaci odpowiedzi limfocytów T spolaryzowanych Th2 i zmiany klasy IgE komórek B oraz nacieku komórek plazmatycznych są głównymi składnikami eozynofilowego CRS i astmy, jednak nasza wiedza na temat odporności nabytej w CRS pozostaje ograniczona. Modulowanie odpowiedzi Th2 poprzez blokadę IL-5 prowadzi do mieszanych wyników u pacjentów z CRSwNP. Jest wielu pacjentów, którzy osiągają lepszą kontrolę astmy dzięki terapii blokadą IL-5, ale nie zauważają takiej samej poprawy w zakresie choroby nosa, co podkreśla obecnie ograniczone zrozumienie czynników związanych z aktywnością choroby, endotypami choroby i wpływem modulowania Odpowiedź Th2 w tym środowisku tkankowym. Lepsze zrozumienie modulacji odporności tkanki nosa przez blokadę IL-5 na poziomie komórkowym jest istotnym krokiem w kierunku właściwej selekcji pacjentów i opracowania nowych terapii celowanych. Transkryptomika pojedynczych komórek jest potężnym narzędziem do charakteryzowania krajobrazów odpornościowych tkanek i zmian funkcjonalnych, jak dotąd została słabo wykorzystana poza badaniami nabłonka nosa w CRS

Hipoteza

• Blokada IL-5 stymuluje zwiększoną aktywność limfocytów T tkanki nosa > limfocytów T krwi obwodowej i sprzyja zwiększonej polaryzacji Th2 limfocytów T tkanki
• Blokada IL-5 stymuluje zwiększoną aktywność ośrodków rozrodczych komórek B w drugorzędowych i trzeciorzędowych strukturach limfoidalnych nosa, poprzez zwiększone interakcje komórek Tfh-B i zwiększone dojrzewanie do komórek wydzielających przeciwciała tkankowe poprzez regulację w górę BLIMP1 w komórkach B Centrum rozrodu.

Cele

1. Scharakteryzować lokalną odpowiedź komórek B błony śluzowej w trzeciorzędowych (nosowych) i wtórnych (przestrzeń podnosowa) narządach limfatycznych w CRSwNP, w porównaniu z odpornością krążącą, poprzez wizualizację i modelowanie aktywności ośrodka rozrodczego, wsparcie komórkowe dla aktywności ośrodka rozrodczego i ocenę selekcji klonalnej limfocytów B , przełączanie klas, los i hipermutacja somatyczna przy użyciu transkryptomiki pojedynczych komórek, sekwencjonowania BCR (receptorów komórek B) pojedynczych komórek i rozdzielczości przestrzennej za pomocą mikroskopii konfokalnej.
2. Użyj transkryptomiki pojedynczych komórek i analizy repertuaru VDJ (zmiennej, różnorodności i łączenia), aby scharakteryzować wpływ modulacji Th2, poprzez blokadę IL-5, na tworzenie i utrzymywanie adaptacyjnej pamięci immunologicznej komórek T i B nosa.
3. Zlokalizuj nosowe źródła sygnalizacji prozapalnej w CRSwNP w obecności blokady IL-5, stosując transkryptomię pojedynczych komórek, mikroskopię konfokalną i analizę cytokin nosowych.
4. Porównaj podzbiory komórek prozapalnych nosa z sparowanymi próbkami krwi obwodowej za pomocą transkryptomiki pojedynczych komórek, aby skorelować aktywność z kandydatami na biomarkery.

Projekt badawczy

Proponowane badanie jest prospektywnym badaniem medycyny eksperymentalnej wykorzystującym blokadę IL-5 jako sposób zbadania wpływu modulacji Th2 na wytwarzanie lokalnej odporności nabytej tkanki w CRSwNP. Uczestnicy będą klasyfikowani w kategoriach:

• Grupa terapeutyczna: 20 pacjentów z CRSwNP i astmą, którzy rozpoczną leczenie mepolizumabem
• Grupa kontrolna choroby: 10 pacjentów z CRSsNP bez astmy, którzy nie rozpoczną leczenia mepolizumabem i będą kontynuować standardowe leczenie.
• Grupa kontrolna: 10 zdrowych osób, bez chorób zatok

Badanie to obejmuje trzy wizyty studyjne dla ramienia terapeutycznego (punkt wyjściowy, tygodnie 6 i 30), dwie wizyty dla osób z grupy kontrolnej choroby i jedną wizytę (początkową) dla zdrowych osób z grupy kontrolnej.

Uczestnicy przyjmujący badany lek będą otrzymywać podskórnie 100 mg mepolizumabu co 4 tygodnie.

Ramię lecznicze:

CRSwNP (NPS 1-8) i astma poddawana blokadzie IL-5 (Mepolizumab)

• Tydzień 0: Rekrutacja, badania przesiewowe i rozpoczęcie standardowej terapii

o Próbki nosa i krwi Tydzień 6 – Przed rozpoczęciem leczenia mepolizumabem (Przed leczeniem) Tydzień 30 – Po rozpoczęciu leczenia mepolizumabem (W trakcie leczenia)

Ramię sterujące:

1. Kontrola chorych:

   CRSsNP bez astmy

   • Tydzień 0: Rekrutacja, badanie przesiewowe i rozpoczęcie standardowej terapii

   o Próbki nosa i krwi Tydzień 6 – Po 6 tygodniach standardowej terapii

2. Zdrowa kontrola • Tydzień 0: Rekrutacja i badania przesiewowe, Próbki nosa i krwi

Analiza statystyczna Dane sekwencjonowania RNA pojedynczej komórki Dane zsekwencjonowane zostaną dopasowane do CellRanger v7.0. Wynikowe pliki wyjściowe zostaną przetworzone przy użyciu standardowego filtrowania i potoku kontroli jakości w Scanpy. Korekta wsadowa zostanie przeprowadzona przy użyciu scVI i zostanie przeprowadzone grupowanie Leiden. Etykiety klastrów zostaną przypisane przy użyciu kanonicznych genów markerowych i opublikowanych sygnatur genów, a walidacja zostanie dokonana przy użyciu opublikowanego zbioru danych posortowanych komórek odpornościowych za pośrednictwem pakietu SingleR. Dalsza analiza będzie obejmować między innymi analizę ekspresji zestawu genów (GSEA) zestawów genów Hallmark i Gene Ontology, różnicowe badanie obfitości, ważoną analizę sieci koekspresji genów i przypisanie interakcji komórka-komórka za pomocą CellphoneDB. Analiza TCR zostanie przeprowadzona przy użyciu Scirpy, a analiza BCR przy użyciu pakietów Dandelion i Immcantation