Modulación th2 CRSwNP

Objetivo:

El RSC es una enfermedad poco conocida con estrategias terapéuticas subóptimas y una alta carga de enfermedad. La inmunidad adaptativa en forma de respuestas de células T polarizadas Th2 y el cambio de clase de IgE de células B, y la infiltración de células plasmáticas, son un componente central de la RSC eosinófila y el asma, pero nuestra comprensión de la inmunidad adaptativa en la RSC sigue siendo limitada. La modulación de la respuesta Th2, mediante el bloqueo de la IL-5, produce resultados mixtos en los pacientes con CRSwNP. Hay una serie de pacientes que logran un mejor control del asma con terapias de bloqueo de IL-5 pero no logran ver las mismas mejoras en su enfermedad nasal, lo que resalta la comprensión actualmente limitada de los factores involucrados en la actividad de la enfermedad, los endotipos de la enfermedad y los efectos de la modulación del Respuesta Th2 en este entorno tisular. Una mejor comprensión de la modulación de la inmunidad del tejido nasal mediante el bloqueo de la IL-5 a nivel celular es un paso esencial hacia la selección adecuada de pacientes y el desarrollo de nuevas terapias dirigidas. La transcriptómica unicelular es una herramienta poderosa para caracterizar los paisajes inmunes de los tejidos y las variaciones funcionales; hasta ahora se ha utilizado poco más allá de los estudios del epitelio nasal en el RSC.

Hipótesis

• El bloqueo de IL-5 estimula una mayor actividad de las células T del tejido nasal > células T de la sangre periférica y promueve una mayor polarización Th2 de las células T del tejido
• El bloqueo de IL-5 estimula una mayor actividad del centro germinal de células B en las estructuras linfoides secundarias y terciarias nasales, a través de un aumento de las interacciones de las células Tfh-B y una mayor maduración de las células secretoras de anticuerpos tisulares a través de la regulación positiva de BLIMP1 en las células B del centro germinal.

Objetivos

1. Caracterizar la respuesta local de las células B de la mucosa en órganos linfoides terciarios (nasales) y secundarios (espacio posnasal) en CRSwNP, en comparación con la inmunidad circulante, mediante la visualización y el modelado de la actividad del centro germinal, el soporte celular para la actividad del centro germinal y la evaluación de la selección clonal de células B. , cambio de clase, destino e hipermutación somática mediante transcriptómica unicelular, secuenciación BCR (receptor de células B) unicelular y resolución espacial mediante microscopía confocal.
2. Utilice la transcriptómica unicelular y el análisis de repertorio VDJ (variable, diversidad y unión) para caracterizar los efectos de la modulación Th2, a través del bloqueo de IL-5, en la formación y el mantenimiento de la memoria inmune adaptativa de las células T y B nasales.
3. Localice las fuentes nasales de señalización proinflamatoria en CRSwNP en presencia de bloqueo de IL-5, mediante transcriptómica unicelular, microscopía confocal y análisis de citoquinas nasales.
4. Compare subconjuntos de células proinflamatorias nasales con muestras de sangre periférica pareadas mediante transcriptómica unicelular, para correlacionar la actividad con los candidatos a biomarcadores.

Diseño de la investigación

El estudio propuesto es un estudio prospectivo de medicina experimental que utiliza el bloqueo de IL-5 como forma de investigar los efectos de la modulación Th2 en la generación de inmunidad adaptativa del tejido local en CRSwNP. Los participantes se clasificarán en:

• Grupo de tratamiento: 20 sujetos con RSCcNP y asma que iniciarán tratamiento con Mepolizumab
• Grupo de control de enfermedades: 10 sujetos con CRSsNP sin asma que no comenzarán con Mepolizumab y continuarán con su tratamiento estándar.
• Grupo de control: 10 sujetos sanos sin ninguna enfermedad de los senos nasales.

Este estudio implica tres visitas de estudio para el grupo de Tratamiento (línea de base, semanas 6 y 30), dos visitas para sujetos con control de enfermedades y una visita (línea de base) para sujetos de control sanos.

Los participantes que tomen la medicación del estudio recibirán 100 mg de mepolizumab cada 4 semanas por vía subcutánea.

Grupo de tratamiento:

CRSwNP (NPS 1-8) y asma sometidos a bloqueo de IL-5 (Mepolizumab)

• Semana 0: Reclutamiento, selección e inicio de la terapia de atención estándar

o Muestras nasales y de sangre Semana 6: inicio previo a Mepolizumab (pretratamiento) Semana 30: después del inicio de Mepolizumab (en tratamiento)

Brazo de control:

1. Control de enfermedades:

   CRSsNP sin asma

   • Semana 0: Reclutamiento, selección e inicio de la terapia de atención estándar

   o Muestras nasales y de sangre Semana 6: después de 6 semanas de tratamiento estándar

2. Control saludable • Semana 0: Reclutamiento y screening, Muestras nasales y de sangre

Análisis estadístico Datos de secuenciación de ARN unicelular Los datos secuenciados se alinearán con CellRanger v7.0. Los archivos de salida resultantes se procesarán utilizando un filtrado estándar y un proceso de control de calidad en Scanpy. La corrección por lotes se realizará utilizando scVI y se realizará la agrupación de Leiden. Las etiquetas de grupo se asignarán utilizando genes marcadores canónicos y firmas genéticas publicadas, con validación utilizando un conjunto de datos publicado de células inmunes clasificadas a través del paquete SingleR. El análisis posterior incluirá, entre otros, análisis de expresión de conjuntos de genes (GSEA) de conjuntos de genes de Hallmark y Gene Ontology, pruebas de abundancia diferencial, análisis de redes de coexpresión de genes ponderados e imputación de la interacción célula-célula utilizando CellphoneDB. El análisis TCR se realizará utilizando Scirpy y el análisis BCR con las suites Dandelion e Immcantation.