th2 moduláció CRSwNP

Célja:

A CRS egy rosszul ismert betegség, szuboptimális terápiás stratégiákkal és magas betegségteherrel. Az adaptív immunitás a Th2 polarizált T-sejt-válaszok és a B-sejtes IgE osztályváltás, valamint a plazmasejt-infiltráció formájában az eozinofil CRS és az asztma alapvető összetevője, de a CRS adaptív immunitásával kapcsolatos ismereteink továbbra is korlátozottak. A Th2 válasz modulálása az IL-5 blokádon keresztül vegyes eredményekhez vezet a CRSwNP betegek esetében. Számos olyan beteg van, aki jobb asztmakontrollt ér el az IL-5 blokkoló terápiákkal, és nem tapasztalják ugyanilyen javulást orrbetegségükben, ami felvázolja a betegség aktivitásában szerepet játszó tényezők, a betegség endotípusainak és a kóros állapot modulálásának hatásainak jelenleg korlátozott megértését. Th2 válasz ebben a szöveti környezetben. Az IL-5 blokád által a nazális szövet immunitásának sejtszintű modulációjának jobb megértése alapvető lépés a betegek megfelelő kiválasztása és új célzott terápiák kifejlesztése felé. Az egysejtes transzkriptomika hatékony eszköz a szöveti immunrendszerek és a funkcionális variációk jellemzésére, és a CRS-ben végzett orrhám vizsgálatain túl még gyengén hasznosították.

Hipotézis

• Az IL-5 blokád serkenti az orrszöveti T-sejtek > perifériás vér T-sejtek fokozott aktivitását, és elősegíti a szöveti T-sejtek Th2 polarizációjának növekedését
• Az IL-5 blokád a megnövekedett B-sejt csíracentrum aktivitását serkenti az orr másodlagos és harmadlagos limfoid struktúráiban a megnövekedett Tfh-B sejt kölcsönhatásokon és a szöveti antitest-kiválasztó sejtekké való fokozott érésen keresztül a BLIMP1 upreguláció révén a Germinal Center B sejtekben.

Célok

1. Jellemezze a helyi nyálkahártya B-sejtes választ a tercier (nazális) és másodlagos (postnazális tér) limfoid szervekben a CRSwNP-ben, összehasonlítva a keringő immunitással, a csíraközpont aktivitásának vizualizálásával és modellezésével, a csíraközpont aktivitásának sejtes támogatásával és a B-sejt klonális szelekciójának értékelésével , osztályváltás, sors és szomatikus hipermutáció egysejtes transzkriptomika, egysejtes BCR (B-sejt receptor) szekvenálás és konfokális mikroszkópos térbeli felbontás segítségével.
2. Használjon egysejtes transzkriptomikát és VDJ (variable, diverzitás és csatlakozás) repertoárelemzést, hogy jellemezze a Th2-moduláció hatását az IL-5 blokádon keresztül a nazális T- és B-sejtes adaptív immunmemória kialakulására és fenntartására.
3. Lokalizálja a pro-inflammatorikus jelátvitel nazális forrásait a CRSwNP-ben IL-5 blokád jelenlétében, egysejtes transzkriptomika, konfokális mikroszkópia és nazális citokinanalízis segítségével.
4. Hasonlítsa össze az orr-gyulladást elősegítő sejtalcsoportokat párosított perifériás vérmintákkal egysejtes transzkriptomika segítségével, hogy korrelálja az aktivitást a biomarker jelöltekkel.

Kutatási terv

A javasolt tanulmány egy prospektív kísérleti orvostudományi vizsgálat, amely IL-5 blokádot használ a Th2 moduláció hatásainak vizsgálatára a helyi szöveti adaptív immunitás létrehozására CRSwNP-ben. A résztvevők osztályozása:

• Kezelési csoport: 20 CRSwNP-s és asztmás alany, akik elkezdik a mepolizumab-kezelést
• Betegségkontroll csoport: 10 asztma nélküli CRSsNP-ben szenvedő alany, akik nem kezdik el a mepolizumabot, és folytatják a szokásos gondozási kezelést.
• Kontroll csoport: 10 egészséges alany, akiknek nincs melléküreg-betegsége

Ez a vizsgálat három vizsgálati látogatást foglal magában a kezelési ágon (alapállapot, 6. és 30. hét), két látogatást a betegségkontroll alanyoknál és egy (alapvonal) látogatást az egészséges kontroll alanyoknál.

A vizsgálati gyógyszeres kezelés alatt álló résztvevők 4 hetente 100 mg mepolizumabot kapnak szubkután.

Kezelő kar:

CRSwNP (NPS 1-8) és az IL-5 blokádon átesett asztma (Mepolizumab)

• 0. hét: Toborzás, szűrés és a standard ellátási terápia megkezdése

o Orr- és vérminták 6. hét – Mepolizumab előtti kezelés (előkezelés) 30. hét – Mepolizumab-kezelés megkezdése után (kezelés alatt)

Irányító kar:

1. Betegségkontroll:

   CRSsNP asztma nélkül

   • 0. hét: Toborzás, szűrés és a standard ellátási terápia megkezdése

   o Orr- és vérminták 6. hét – 6 hét standard gondozási terápia után

2. Egészséges kontroll • 0. hét: Toborzás és szűrés, Orr- és vérminták

Statisztikai elemzés Egysejtű RNS szekvenálási adatok A szekvenált adatok a CellRanger v7.0-hoz lesznek igazítva. Az eredményül kapott kimeneti fájlokat a Scanpy szabványos szűrési és minőségellenőrzési folyamata segítségével dolgozza fel. A kötegelt korrekciót scVI-vel hajtják végre, és Leiden klaszterezést hajtanak végre. A klasztercímkék hozzárendelése kanonikus markergének és közzétett génaláírások felhasználásával történik, az érvényesítés pedig a SingleR csomagon keresztül rendezett immunsejtek publikált adatkészletével történik. A downstream elemzés magában foglalja, de nem kizárólagosan, a Hallmark és Gene Ontology genekészletek génkészlet-expressziós elemzését (GSEA), a differenciális abundancia tesztelését, a súlyozott génkoexpressziós hálózat elemzését és a sejt-sejt kölcsönhatás imputálását a CellphoneDB segítségével. A TCR analízist Scirpy, a BCR analízist pedig a Dandelion és Immcantation suite segítségével végzik el.