th2 Modulação CRSwNP

Propósito:

A SRC é uma doença pouco compreendida, com estratégias terapêuticas abaixo do ideal e uma alta carga de doença. A imunidade adaptativa na forma de respostas de células T polarizadas Th2 e troca de classe IgE de células B e infiltração de células plasmáticas são um componente central da RSC eosinofílica e da asma, mas nossa compreensão da imunidade adaptativa na RSC permanece limitada. A modulação da resposta Th2, através do bloqueio da IL-5, leva a resultados mistos para pacientes com RSCcPN. Há uma série de pacientes que conseguem um melhor controle da asma com terapias de bloqueio de IL-5 que não conseguem ver as mesmas melhorias em sua doença nasal, delineando a compreensão atualmente limitada dos fatores envolvidos na atividade da doença, nos endotipos da doença e nos efeitos da modulação do Resposta Th2 neste ambiente tecidual. A melhor compreensão da modulação da imunidade do tecido nasal pelo bloqueio da IL-5 a nível celular é um passo essencial para a seleção adequada dos pacientes e o desenvolvimento de novas terapêuticas direcionadas. A transcriptômica unicelular é uma ferramenta poderosa para caracterizar paisagens imunes teciduais e variações funcionais, mas ainda tem sido pouco utilizada além dos estudos do epitélio nasal na RSC

Hipótese

• O bloqueio da IL-5 estimula o aumento da atividade das células T do tecido nasal> células T do sangue periférico e promove o aumento da polarização Th2 das células T do tecido
• O bloqueio de IL-5 estimula o aumento da atividade do centro germinativo das células B nas estruturas linfoides nasais secundárias e terciárias, através do aumento das interações das células Tfh-B e do aumento da maturação das células secretoras de anticorpos teciduais através da regulação positiva de BLIMP1 nas células B do Centro Germinal.

Objetivos

1. Caracterizar a resposta local das células B da mucosa em órgãos linfóides terciários (nasais) e secundários (espaço pós-nasal) na RSCcPN, em comparação com a imunidade circulante, através da visualização e modelagem da atividade do centro germinativo, suporte celular para a atividade do centro germinativo e avaliação da seleção clonal de células B , troca de classe, destino e hipermutação somática usando transcriptômica unicelular, sequenciamento BCR unicelular (receptor de células B) e resolução espacial por meio de microscopia confocal.
2. Use transcriptômica unicelular e análise de repertório VDJ (variável, diversidade e junção) para caracterizar os efeitos da modulação Th2, por meio do bloqueio de IL-5, na formação e manutenção da memória imunológica adaptativa de células T e B nasais.
3. Localize fontes nasais de sinalização pró-inflamatória em CRSwNP na presença de bloqueio de IL-5, usando transcriptômica unicelular, microscopia confocal e análise de citocinas nasais.
4. Compare subconjuntos de células pró-inflamatórias nasais com amostras de sangue periférico pareadas por transcriptômica de célula única, para correlacionar a atividade com candidatos a biomarcadores.

Projeto de pesquisa

O estudo proposto é um estudo prospectivo de medicina experimental usando o bloqueio de IL-5 como forma de investigar os efeitos da modulação Th2 na geração de imunidade adaptativa tecidual local na RSCcNP. Os participantes serão classificados em:

• Grupo de tratamento:20 indivíduos com RSCcPN e asma que iniciarão tratamento com Mepolizumabe
• Grupo de controle da doença: 10 indivíduos com CRSsNP sem asma que não iniciarão Mepolizumabe e continuarão seu tratamento padrão.
• Grupo controle: 10 indivíduos saudáveis ​​sem qualquer doença sinusal

Este estudo envolve três visitas de estudo para o braço de tratamento (linha de base, semanas 6 e 30), duas visitas para indivíduos com controle de doença e uma visita (linha de base) para indivíduos de controle saudáveis.

Os participantes que tomarem a medicação do estudo receberão 100 mg de mepolizumabe a cada 4 semanas por via subcutânea.

Braço de Tratamento:

RSCcPN (NPS 1-8) e asma submetida a bloqueio de IL-5 (Mepolizumab)

• Semana 0: Recrutamento, triagem e início da terapia padrão

o Amostras nasais e de sangue Semana 6 - Início pré-Mepolizumabe (Pré-tratamento) Semana 30 - Após início de Mepolizumabe (Em tratamento)

Braço de controle:

1. Controle de doenças:

   CRSsNP sem asma

   • Semana 0: Recrutamento, triagem e início da terapia padrão

   o Amostras nasais e de sangue Semana 6 - Após 6 semanas de terapia padrão

2. Controle saudável • Semana 0: Recrutamento e triagem, amostras nasais e de sangue

Análise estatística Dados de sequenciamento de RNA de célula única Os dados sequenciados serão alinhados com CellRanger v7.0. Os arquivos de saída resultantes serão processados ​​usando uma filtragem padrão e pipeline de controle de qualidade no Scanpy. A correção do lote será realizada usando scVI e o agrupamento de Leiden será realizado. Os rótulos de cluster serão atribuídos usando genes marcadores canônicos e assinaturas genéticas publicadas, com validação usando um conjunto de dados publicado de células imunes classificadas por meio do pacote SingleR. A análise downstream incluirá, mas não se limitará a, análise de expressão de conjunto de genes (GSEA) de conjuntos de genes Hallmark e Gene Ontology, testes de abundância diferencial, análise de rede de coexpressão gênica ponderada e imputação de interação célula-célula usando CellphoneDB. A análise TCR será realizada usando Scirpy e a análise BCR com as suítes Dandelion e Immcantation