th2 Modulace CRSwNP

Účel:

CRS je špatně pochopené onemocnění se suboptimálními terapeutickými strategiemi a vysokou nemocí. Adaptivní imunita ve formě Th2 polarizovaných odpovědí T lymfocytů a přepínání třídy IgE B lymfocytů a infiltrace plazmatických buněk jsou základní složkou eozinofilního CRS a astmatu, naše chápání adaptivní imunity u CRS však zůstává omezené. Modulace Th2 odpovědi prostřednictvím blokády IL-5 vede u pacientů s CRSwNP ke smíšeným výsledkům. Existuje řada pacientů, kteří dosáhnou zlepšené kontroly astmatu pomocí terapií blokády IL-5, kteří nedokážou vidět stejná zlepšení u jejich nosního onemocnění, což naznačuje v současnosti omezené chápání faktorů ovlivňujících aktivitu onemocnění, endotypů onemocnění a účinků modulace Th2 odpověď v tomto tkáňovém prostředí. Lepší pochopení modulace imunity nosní tkáně blokádou IL-5 na buněčné úrovni je zásadním krokem k vhodnému výběru pacientů a vývoji nových cílených terapeutik. Jednobuněčná transkriptomika je mocný nástroj pro charakterizaci tkáňových imunitních krajin a funkčních variací, dosud byla špatně využívána mimo studie nosního epitelu u CRS.

Hypotéza

• Blokáda IL-5 stimuluje zvýšenou aktivitu T lymfocytů nosní tkáně > T lymfocytů periferní krve a podporuje zvýšenou polarizaci Th2 tkáňových T lymfocytů
• Blokáda IL-5 stimuluje zvýšenou aktivitu zárodečného centra B buněk v nazálních sekundárních a terciárních lymfoidních strukturách prostřednictvím zvýšených interakcí Tfh-B buněk a zvýšeného zrání na buňky vylučující tkáňové protilátky prostřednictvím upregulace BLIMP1 v B buňkách zárodečného centra.

Cíle

1. Charakterizujte lokální slizniční odpověď B buněk v terciárních (nosních) a sekundárních (postnazální prostor) lymfoidních orgánech u CRSwNP ve srovnání s cirkulující imunitou pomocí vizualizace a modelování aktivity germinálních center, buněčné podpory aktivity germinálních center a hodnocení klonální selekce B buněk , přepínání tříd, osud a somatická hypermutace pomocí jednobuněčné transkriptomiky, jednobuněčného sekvenování BCR (B-buněčný receptor) a prostorového rozlišení prostřednictvím konfokální mikroskopie.
2. Použijte jednobuněčnou transkriptomiku a analýzu repertoáru VDJ (variabilní, rozmanitost a spojování) k charakterizaci účinků modulace Th2 prostřednictvím blokády IL-5 na tvorbu a udržování adaptivní imunitní paměti nazálních T a B buněk.
3. Lokalizovat nosní zdroje prozánětlivé signalizace u CRSwNP v přítomnosti blokády IL-5 pomocí jednobuněčné transkriptomiky, konfokální mikroskopie a analýzy nazálních cytokinů.
4. Porovnejte podskupiny nosních prozánětlivých buněk se spárovanými vzorky periferní krve pomocí jednobuněčné transkriptomiky, abyste korelovali aktivitu s kandidáty na biomarkery.

Design výzkumu

Navrhovaná studie je prospektivní experimentální medicínou využívající blokádu IL-5 jako způsob zkoumání účinků Th2 modulace na tvorbu lokální tkáňové adaptivní imunity u CRSwNP. Účastníci budou zařazeni do:

• Léčebná skupina: 20 jedinců s CRSwNP a astmatem, kteří zahájí léčbu mepolizumabem
• Kontrolní skupina onemocnění: 10 subjektů s CRSsNP bez astmatu, kteří nezahájí léčbu mepolizumabem a budou pokračovat ve standardní léčbě.
• Kontrolní skupina: 10 zdravých jedinců bez jakéhokoli onemocnění dutin

Tato studie zahrnuje tři studijní návštěvy pro léčebné rameno (základní stav, týdny 6 a 30), dvě návštěvy pro subjekty s kontrolou onemocnění a jednu (základní) návštěvu pro zdravé kontrolní subjekty.

Účastníci užívající studijní medikaci dostanou 100 mg mepolizumabu každé 4 týdny subkutánně.

Ošetřující rameno:

CRSwNP (NPS 1-8) a astma podstupující blokádu IL-5 (Mepolizumab)

• Týden 0: Nábor, screening a zahájení standardní péče

o Vzorky nosu a krve Týden 6 – Před zahájením léčby mepolizumabem (před léčbou) 30. týden – Po zahájení léčby mepolizumabem (při léčbě)

Ovládací rameno:

1. Kontrola nemocí:

   CRSsNP bez astmatu

   • Týden 0: Nábor, screening a zahájení standardní péče

   o Vzorky nosu a krve 6. týden - Po 6 týdnech standardní péče

2. Zdravá kontrola • Týden 0: Nábor a screening, nosní a krevní vzorky

Statistická analýza Jednobuněčná RNA sekvenační data Sekvenovaná data budou porovnána s CellRanger v7.0. Výsledné výstupní soubory budou zpracovány pomocí standardního filtrování a QC potrubí ve Scanpy. Dávková korekce bude provedena pomocí scVI a bude provedeno Leidenské shlukování. Klastrové značky budou přiřazeny pomocí kanonických markerových genů a publikovaných genových signatur, s validací pomocí publikované datové sady tříděných imunitních buněk prostřednictvím balíčku SingleR. Následná analýza bude zahrnovat mimo jiné analýzu exprese genového souboru (GSEA) genových sad Hallmark a Gene Ontology, testování diferenciální četnosti, analýzu sítě vážené koexprese genů a imputaci interakce buňka-buňka pomocí CellphoneDB. Analýza TCR bude provedena pomocí Scirpy a analýza BCR pomocí sady Dandelion a Immcantation