噬菌体疗法治疗耐药细菌感染的安全性与有效性评估：一项探索性、前瞻性单臂研究 (Phage Therapy)

本研究是由研究者发起、前瞻性、单臂探索性临床研究，于南京大学医学院附属南京鼓楼医院感染性疾病科开展。 本研究旨在系统评估个性化噬菌体鸡尾酒疗法在耐药细菌引起的尿路感染（UTIs）患者中的安全性和有效性，以应对全球抗生素耐药性蔓延背景下替代治疗方案未满足的临床需求。

1. 研究背景 2019年全球与耐药细菌感染相关的死亡率达到495万，其中127万死亡直接归因于此。 预测显示，若无有效干预措施，到2050年这一数字可能每年上升至1000万。 新型抗生素的研发远远落后于耐药菌株的出现，因为大多数新批准的药物是现有抗生素的衍生物，其耐药机制已确立。 噬菌体疗法利用噬菌体天然特异性裂解目标细菌而不伤害人体细胞或共生微生物群，已成为一种有前景的替代方案。 来自全球超过6300例病例和系统评价的临床证据证实了其良好的安全性（不良事件发生率7.5% vs 常规抗生素的14.9%）和有效性（临床改善率78.8%，病原体清除率86.7%）。 本研究基于这些发现，旨在验证个性化噬菌体疗法在耐药尿路感染中的临床适用性。

2. 研究设计与范围

   • 研究类型：前瞻性、单臂、探索性研究，无对照组（基于伦理考虑和新型噬菌体疗法缺乏标准化对照方案而合理设置）。
   • 样本量：6名符合条件的患者（基于既往临床数据和机构能力确定）。
   • 研究周期：每位参与者经历筛选期（≤7天）、治疗期（2-3天）和随访期（2-4周），总观察时长最多5周。
   • 研究地点：南京大学医学院附属南京鼓楼医院感染性疾病科（中国南京）。
3. 入选标准 3.1 纳入标准

1. 年龄18-65岁。
2. 由耐药细菌引起的尿路感染患者（基于我院或其他三甲医院的药敏试验结果）。

3. 患者感染的病原菌必须满足以下条件之一：

   a) 病原菌对关键抗生素耐药：

   • 鲍曼不动杆菌：碳青霉烯类耐药；

     • 肠杆菌科（如肺炎克雷伯菌、大肠杆菌）：碳青霉烯类或头孢菌素类耐药； ② 铜绿假单胞菌：碳青霉烯类耐药；

       ③ 肠球菌：万古霉素耐药；

       ④ 金黄色葡萄球菌：甲氧西林或万古霉素耐药；

       • 嗜麦芽窄食单胞菌。 参考WHO细菌优先病原体清单，2024年 b) 病原菌在体外对关键抗生素敏感，但使用此类抗生素治疗无效或疗效不显著（患者的目标细菌感染持续7天或以上，且在此期间尽管使用抗生素仍无法根除感染）。

         c) 使用病原菌敏感的關鍵抗生素受到限制（例如，抗生素可能引起的器官毒性，或患者对此类抗生素过敏）。

4. 至少能筛选出一种针对病原菌的裂解性噬菌体。
5. 患者能耐受经尿管膀胱灌注、经输尿管导管逆行肾盂灌注或经皮肾造瘘管肾盂灌注的操作，并同意在治疗期间接受留置或间歇性导尿。
6. 受试者及其家属（或法定监护人）已充分阅读并理解相关信息，并签署知情同意书。

3.2 排除标准

1. 可通过常规抗生素治疗控制的细菌感染。
2. 存在未引流的尿路脓肿或梗阻。
3. 严重肾功能损害（eGFR <30 mL/min/1.73m²）。
4. 并发器官衰竭（心、肝、肺等）。
5. 严重自身免疫性疾病。
6. 无针对感染病原体的活性噬菌体可用。
7. 研究者认为不适合的其他情况。

4. 干预细节 4.1 噬菌体制备

• 试验产品：由创世纪（上海）生物技术有限公司提供的个性化噬菌体鸡尾酒，由针对参与者特定病原体的裂解性噬菌体组成。 制剂在符合GMP标准的设施中纯化和包装，规格为5 mL/瓶，滴度≥10⁷ PFU/mL。
• 噬菌体匹配：从参与者分离的病原菌送至合作实验室，使用双层琼脂平板法或液体杀伤曲线法进行高通量噬菌体筛选。 优先采用下一代进化噬菌体分型（NEPT）方法组合初级和次级噬菌体，以防止噬菌体耐药细菌的出现。
• 质量控制：每批次进行无菌测试（血琼脂平板培养48小时无细菌生长）和使用参与者目标病原体进行滴度验证（≥10⁷ PFU/mL，依据团体标准T/SHPPA 028-2024）。

4.2 给药方式

根据感染部位选择治疗途径：

• 膀胱灌注（用于下尿路感染）：50 mL噬菌体鸡尾酒（必要时用林格氏液稀释）通过尿管灌注。 给药后夹闭尿管30分钟，然后拔除或松开。 每12小时重复给药一次，共4-6次总剂量（2或3天疗程）。

4.3 伴随用药 可根据药敏试验和临床判断使用抗生素。 若无敏感抗生素可用，则采用非活性抗生素与噬菌体协同作用（NABS）方法识别与噬菌体有协同作用的抗生素。

5. 结局指标 5.1 安全性结局

• 主要安全性终点：治疗和随访期间不良事件（AEs）和严重不良事件（SAEs）的发生率、严重程度和因果关系。 关键监测事件包括：

  o 细菌裂解相关反应（例如内毒素释放综合征：体温>39℃、低血压）。

  • 免疫原性反应（例如皮疹、呼吸困难、过敏反应）。
• 安全性评估：生命体征（治疗期间每日）；实验室检查（全血细胞计数、肝肾功能、CRP、降钙素原、细胞因子）在基线、治疗后第1、3、5、7天进行；以及对AEs的临床观察。

5.2 有效性结局

• 主要有效性终点：病原体清除率，定义为：

  o 连续两份样本尿培养目标病原体阴性，或

  o 若病原体持续存在，细菌载量（绝对定量）降低≥10倍或半定量（四区划线法）降低≥2级。

  • 评估在基线和治疗后第1、3、5、7天进行。

• 次要有效性终点：临床症状缓解率，评估为：

  o 完全缓解：尿痛、尿频、尿急、腰痛和发热消失；尿常规正常（白细胞<5/HPF，亚硝酸盐阴性）；尿培养阴性。

  o 部分缓解：症状改善，残留轻微异常。

  o 评估在每次随访时进行（治疗后第1、2、3、4周）。

  6. 安全性监测与伦理保护

• AE/SAE管理：所有AE均按CTCAE标准记录、追踪和分级。 SAE（例如死亡、危及生命事件、住院）在24小时内报告给机构审查委员会（IRB）。
• 伦理合规：本研究遵循《赫尔辛基宣言》和GCP指南。 研究方案已获南京大学医学院附属南京鼓楼医院医学伦理委员会批准。 参与者可随时退出研究，无需承担任何处罚。

• 数据安全监测：主要研究者定期审查累积的安全性数据，评估风险-获益平衡，并在必要时建议研究继续或终止。

  7. 研究时间表

• 2026年1月 - 2026年6月：患者筛选、入组、治疗和随访。
• 2026年7月 - 2026年8月：数据分析和研究报告完成。