EUS引导下的CTCs+多组学：预测胰腺癌复发和转移

共有20名参与者根据影像学检查结果分层为可切除胰腺癌组（8例）、临界可切除胰腺癌组（8例）和局部晚期胰腺癌组（4例）。 这些患者在影像学检查显示胰腺内存在可通过内镜超声（EUS）到达的实性占位性病变（直径>1cm）。 每位试验患者将获得唯一识别编号，且在整个试验期间保持不变。

使用纳入和排除标准观察患者并进行相关检查，确认患者是否符合试验资格。 记录治疗前最后一次检查的结果。 尽管最好在进行各类观察和检查前获得知情同意，但若因故已完成医学影像检查，只要该影像检查在针吸活检前3周内完成，仍可作为基线数据收集；针吸活检前2周内完成的其他实验室检查项目仍可作为研究前基线数据收集，但这些检查应在试验中心医院进行以保证数据可追溯性。

研究者将按严格顺序对所有患者进行采样操作：首先，在EUS引导下优先使用22G ECHO 3-22针采集10ml门静脉血以避免污染。 随后，研究者将在胰腺病灶处进行3次针道穿刺，采用5mL湿式抽吸获取组织。 最后采集10ml外周血。 样本使用CTC100系统或IFC-IMP技术处理，随后进行单细胞RNA测序（10xGenomics）和蛋白质组学分析（timstofPro2/orbitrap）。 结果将在3个工作日内反馈给临床医生。 在不知样本来源的情况下（初始时对具体亚型设盲），细胞学家和病理学家将评估标本质量并做出诊断。

在穿刺后1周、12周和36周对患者进行随访（门诊随访或电话随访），收集患者临床数据并确认最终诊断。

试验期间若发生严重不良事件，试验中心必须立即采取必要措施确保受试患者安全。 一旦发生严重不良事件，研究者应在知悉不良事件后24小时内通知试验申请方和试验中心伦理委员会。 研究者还应将报告传真至国家食品药品监督管理总局及当地省级食品药品监督管理部门。 申请方收到报告后应在24小时内通知其他临床试验中心。 所有严重不良事件应在组长单位和各试验中心备案。

病例报告表（CRF）由研究者填写，每位参与患者均需完成CRF填写。 临床监查员将进行审核，并移交数据管理员进行数据录入与管理，第一份由申请方保存，第二份交试验中心，第三份由试验研究者保存。 数据录入与管理由专人负责。 为保证数据准确性，数据将由两名独立数据管理员进行双重录入，通过计算机与人工核对后移交统计学专家进行核查与统计分析。

针对病例报告表中的疑问，数据管理员将发出数据澄清表（DRQ），通过临床监查员向研究者询问。 研究者将尽快答复反馈。 根据研究者答复，数据管理员将进行数据修改、确认或录入，必要时再次发出DRQ。

统计分析将由专业统计人员按照预先制定的统计分析计划执行。 统计分析将遵循意向性原则确定的全分析集和符合方案集原则进行。 统计分析完成后，统计分析师将出具统计分析报告并提交主要研究者撰写研究报告。

统计分析计划： ① 一般原则： ⑴ 所有统计检验均采用双侧检验法，P<0.05将被认为检验差异具有统计学意义。 ⑵ 定量指标描述将计算均值和标准差。 分类指标描述将说明各类别例数及百分比。 ② 统计分析方法： ⑴ 对计量资料，比较门静脉循环肿瘤细胞与外周血循环肿瘤细胞的差异，采用配对t检验或符号秩和检验进行组内比较。 ⑵ 对计数资料（循环肿瘤细胞亚型），采用卡方检验或Fisher精确检验法进行组间比较。 ③ 脱落分析：比较各组总脱落率及不良事件所致脱落率，采用卡方检验或Fisher精确检验法。 ④ 基线均衡性分析：采用成组t检验或卡方检验比较人口学信息、生命体征、疾病史及基础治疗等基线指标，衡量组间均衡性。 ⑤ 有效性分析：有效性分析主要指标为门静脉循环肿瘤细胞数量/亚型与临界可切除胰腺癌复发/转移的相关性，次要有效性指标包括新辅助治疗指导的适用性。 ⑥ 安全性分析：采用卡方检验或Fisher精确检验比较不良事件/不良反应（包括胰腺炎、出血等穿刺并发症）发生率。 并使用表格描述本试验项目期间发生的不良事件；试验前后实验室检查结果、正常/异常变化情况及异常变化时与本试验研究的关系。